葡聚(ju)糖基(ji)質(zhi)凝膠(jiao)過(guo)濾層析介(jie)質樹(shu)脂填料(liao)Smartdex G-10 蛋白(bai)分離：Smartdex G-10系(xi)列介(jie)質(zhi)是(shi)壹類以(yi)葡(pu)聚(ju)糖(tang)為(wei)基質(zhi)的(de)凝膠(jiao)過(guo)濾層析（gel filtration chromatography）介(jie)質，其(qi)工作原理(li)主要是(shi)利用具有(you)網(wang)狀(zhuang)結構(gou)的(de)葡聚(ju)糖(tang)凝(ning)膠(jiao)的(de)分子(zi)篩(shai)作用，根據(ju)被分離物(wu)質的(de)分子(zi)大(da)小不(bu)同來(lai)進(jin)行分離。

葡聚糖基質(zhi)凝(ning)膠(jiao)過(guo)濾層析介(jie)質樹(shu)脂填料(liao)Smartdex G-10 蛋白(bai)分離

Smartdex G-10系(xi)列介(jie)質(zhi)是(shi)壹類以(yi)葡(pu)聚(ju)糖(tang)為(wei)基質(zhi)的(de)凝膠(jiao)過(guo)濾層析（gel filtration chromatography）介(jie)質，其(qi)工作原理(li)主要是(shi)利用具有(you)網(wang)狀(zhuang)結構(gou)的(de)葡聚(ju)糖(tang)凝(ning)膠(jiao)的(de)分子(zi)篩(shai)作用，根據(ju)被分離物(wu)質的(de)分子(zi)大(da)小不(bu)同來(lai)進(jin)行分離。

  葡(pu)聚糖(tang)凝(ning)膠(jiao)是(shi)壹種(zhong)具(ju)有(you)三(san)維(wei)網(wang)狀(zhuang)結構(gou)的(de)高分子(zi)化合(he)物(wu)，它(ta)是(shi)由葡(pu)聚(ju)糖(tang)加入(ru)交(jiao)聯(lian)劑通過(guo)醚鍵互(hu)相(xiang)交(jiao)聯(lian)聚合(he)而(er)成的(de)，交(jiao)聯(lian)度(du)越大,網(wang)孔結(jie)構(gou)就(jiu)越緊密(mi)，吸水(shui)後(hou)的(de)體(ti)積膨脹就(jiu)越小，能允(yun)許進(jin)入(ru)凝膠(jiao)內(nei)部的(de)分子(zi)的(de)分子(zi)量(liang)也就(jiu)越(yue)小，反之(zhi)亦(yi)然。層析(xi)時，大(da)於(yu)凝膠(jiao)孔徑(jing)的(de)大分子(zi)，被(bei)阻(zu)於凝(ning)膠(jiao)相(xiang)外(wai)，沿著(zhe)凝膠(jiao)顆(ke)粒之(zhi)間(jian)的(de)間(jian)隙走(zou)，下(xia)移(yi)速度(du)最快,故(gu)最先洗脫(tuo)下(xia)來(lai)，中分子(zi)物(wu)質部份進(jin)入(ru)凝膠(jiao)內(nei)部，洗脫(tuo)速度(du)為(wei)其次(ci)，而(er)小分子(zi)物(wu)質因全(quan)部進(jin)入(ru)凝膠(jiao)，受(shou)到(dao)阻(zu)力大(da)，故(gu)最後被(bei)洗脫(tuo)下(xia)來(lai)，如此物質得(de)到(dao)分離。

   型(xing)號(hao)G表(biao)明每克(ke)於凝(ning)膠(jiao)吸水(shui)量(liang)的(de)多少，例(li)如G-10表(biao)明每克(ke)幹凝(ning)膠(jiao)吸水(shui)1.0克(ke)。這表(biao)征了(le)凝膠(jiao)所(suo)能膨(peng)脹的(de)倍數(shu)，亦(yi)間(jian)接(jie)表(biao)征了(le)凝膠(jiao)孔徑(jing)的(de)大小(xiao)。

表(biao)1.Smartdex G-10產(chan)品性能

2.裝柱說明

2.1凝膠(jiao)的(de)預處理(li)

Smartdex G-10 為(wei)於粉，初(chu)次(ci)使(shi)用前必(bi)須(xu)進(jin)行預處理(li)。溶脹(zhang)過(guo)程(cheng)中嚴(yan)禁(jin)使(shi)用磁力(li)攪拌(ban)，以(yi)免(mian)使(shi)微球破(po)碎。

加(jia)入(ru)足(zu)夠(gou)的(de)水(shui)或(huo)緩沖(chong)液進(jin)行溶脹，室溫3h 以(yi)上或(huo)水(shui)浴(yu) 90℃、1h。如果室溫溶(rong)脹(zhang)則(ze)需要進(jin)行真空(kong)脫(tuo)氣(qi)，然後將(jiang)溶脹(zhang)好的(de)微球按(an)照3∶1（v/v）加入(ru)水(shui)或(huo)緩沖(chong)液攪拌(ban)使(shi)其(qi)形(xing)成均(jun)勻(yun)的(de)75%膠(jiao)懸(xuan)液。如果是(shi)重復使(shi)用的(de)可以(yi)將(jiang) 20%乙醇(chun)傾去，加水(shui)或(huo)緩沖(chong)液攪拌(ban)均勻(yun)成75%的(de)膠(jiao)懸(xuan)液。

2.2 Smartdex G-10 的(de)裝填

2.2.1重力柱的(de)裝填

1）取合適(shi)規格的(de)重力(li)層(ceng)析(xi)柱，裝入(ru)下(xia)墊片(pian)，加(jia)入(ru)適量(liang)純水(shui)潤(run)洗柱管和(he)墊(dian)片(pian)，關(guan)閉下(xia)出(chu)口(kou)。

2）將(jiang)溶脹(zhang)好的(de)介質(zhi)混(hun)合(he)均勻(yun)，用槍(qiang)頭吸取適(shi)量(liang)漿(jiang)液加入(ru)至(zhi)重力(li)柱中（介(jie)質(zhi)實際(ji)體(ti)積占懸(xuan)液的(de)75%），打開(kai)下(xia)出(chu)口(kou)流(liu)幹保(bao)護液。3）加入(ru)適量(liang)純水(shui)沖(chong)洗介質(zhi)，待(dai)柱管中液體(ti)重力流(liu)幹後(hou)，關閉下(xia)出(chu)口(kou)。4）裝入(ru)潤洗後的(de)上墊(dian)片(pian)，確(que)保(bao)墊片(pian)與填料(liao)之前(qian)沒(mei)有空(kong)隙，且保(bao)持(chi)水(shui)平(ping)。

5）裝填好的(de)重力(li)柱可以(yi)直(zhi)接(jie)加入(ru)平(ping)衡(heng)液進(jin)行平(ping)衡(heng)，暫不(bu)使(shi)用時則(ze)加入(ru)保(bao)護液，4-30℃保(bao)存。

2.2.2 層(ceng)析柱的(de)裝填

裝柱前根據(ju)層析(xi)柱直(zhi)徑計算柱子底面積(ji)，根據(ju)所需裝柱高度(du)計算所需介質(zhi)體(ti)積，公(gong)式(shi)如下(xia)∶

V=1.15mh

V∶所需介質(zhi)體(ti)積 ml 1.15∶壓縮(suo)系數(shu)r∶柱管半(ban)徑(jing) cm h∶裝填高度(du) cm

註意(yi)∶介(jie)質(zhi)實際(ji)體(ti)積占所取(qu)懸(xuan)液總(zong)體(ti)積的(de) 75%。

1）用去離子(zi)水(shui)沖(chong)洗層析(xi)柱底篩板(ban)與接(jie)頭，確(que)保(bao)柱底篩板(ban)上無氣(qi)泡，關(guan)閉柱底出(chu)口(kou)，並在(zai)柱底部留出(chu)1-2cm 的(de)去離子(zi)水(shui)。2）將(jiang)填料(liao)懸(xuan)浮(fu)起來(lai)，小(xiao)心(xin)的(de)將(jiang)漿(jiang)液連續地(di)倒入(ru)層析柱中。用玻(bo)璃棒(bang)沿著(zhe)柱壁倒入(ru)漿(jiang)液可減(jian)少氣(qi)泡的(de)產(chan)生(sheng)。

3）如果使(shi)用儲(chu)液器，應(ying)立(li)即(ji)在(zai)層(ceng)析柱和(he)儲(chu)液器中加(jia)滿水(shui)，將(jiang)進(jin)樣分配器放置(zhi)於漿(jiang)液表(biao)面，連接(jie)至(zhi)泵上，避(bi)免(mian)在(zai)分配器或(huo)進(jin)樣管中產(chan)生(sheng)氣(qi)泡。4）打(da)開(kai)層(ceng)析(xi)柱底部出(chu)口(kou)，開(kai)啟(qi)泵，使(shi)其(qi)在(zai)設(she)定的(de)流(liu)速下(xia)進(jin)行。最初應(ying)讓(rang)緩(huan)沖(chong)液緩慢流(liu)過(guo)層析(xi)柱，然後緩(huan)慢增加(jia)至(zhi)最終(zhong)流(liu)速，這樣可避(bi)免(mian)液壓對所形成柱床的(de)沖(chong)擊(ji)，也可以(yi)避(bi)免(mian)柱床形成的(de)不(bu)均勻(yun)。如果達不(bu)到(dao)推(tui)薦(jian)的(de)壓力(li)或(huo)流(liu)速，可以(yi)用妳所使(shi)用泵的(de)最大流(liu)速，這樣也可以(yi)得(de)到(dao)壹個很(hen)好的(de)裝填效果。（註意(yi)∶在(zai)隨(sui)後(hou)的(de)色譜(pu)程(cheng)序(xu)中，不(bu)要超(chao)過(guo)最大裝柱流(liu)速的(de)75%）當柱床高度(du)穩定後(hou)，在(zai)最後的(de)裝柱流(liu)速下(xia)至(zhi)少再(zai)上3 倍(bei)柱床體(ti)積的(de)去離子(zi)水(shui)。標(biao)上柱床高度(du)。5）關閉泵，關閉層析(xi)柱出(chu)口(kou)。

6）如果使(shi)用儲(chu)液器，去除(chu)儲(chu)液器，將(jiang)分配器置(zhi)於(yu)層析柱中。

7）將(jiang)分配器推(tui)向柱子至(zhi)標記(ji)的(de)柱床高度(du)處。允許(xu)裝柱液進(jin)入(ru)分配器，鎖(suo)緊分配器接(jie)頭。8）將(jiang)裝填好的(de)層析(xi)柱連接(jie)至(zhi)泵或(huo)色譜(pu)系(xi)統中，開(kai)始平(ping)衡(heng)。如果需要可以(yi)重(zhong)新(xin)調(tiao)整分配器。

葡(pu)聚(ju)糖基質(zhi)凝膠(jiao)過(guo)濾層析介(jie)質樹(shu)脂填料(liao)Smartdex G-10 蛋白(bai)分離過(guo)程(cheng)

3.1 緩(huan)沖(chong)液的(de)準(zhun)備

所(suo)用水(shui)和(he)緩(huan)沖(chong)液在(zai)使(shi)用之前(qian)建(jian)議用0.22 μm 或(huo)0.45 um 濾膜過(guo)濾。

平(ping)衡(heng)液為(wei)蛋白(bai)純化後(hou)，用幹保(bao)護蛋白(bai)的(de)溶液（例(li)如;PBS等），根(gen)據(ju)客戶(hu)需求(qiu)自(zi)行選擇(ze)。

3.2 樣(yang)品準(zhun)備

樣(yang)品在(zai)上樣(yang)前(qian)建(jian)議離心(xin)或(huo)用0.22 μm 或(huo)0.45 μm 濾膜過(guo)濾，減少雜質，防止堵(du)塞柱子。

3.3 樣品純化1平(ping)衡(heng)

上樣(yang)之(zhi)前，用平(ping)衡(heng)液至(zhi)少平(ping)衡(heng) 5-10個柱體(ti)積，或(huo)直(zhi)到(dao)基線(xian)穩定。含去垢劑的(de)溶液可能需要平(ping)衡(heng)更長時間(jian)。2）上樣(yang)和(he)洗脫(tuo)

推(tui)薦(jian)上樣(yang)體(ti)積為(wei)柱體(ti)積的(de) 10%以(yi)內(nei)。脫(tuo)鹽(yan)時最大樣(yang)品量(liang)可至(zhi) 30%柱體(ti)積。使(shi)用重力(li)柱純化時。待(dai)樣(yang)品進(jin)入(ru)填料(liao)後，繼(ji)續加入(ru)平(ping)衡(heng)液進(jin)行洗

脫(tuo)，使(shi)用預裝層析柱純化時，可以(yi)通過(guo)上樣(yang)管或(huo)樣品環(huan)來(lai)上樣(yang)。分管收集洗脫(tuo)液，樣品進(jin)入(ru)填料(liao)開(kai)始，按昭(zhao)固定體(ti)積（例(li)如 1ml/管）收集

樣品，檢測每管蛋白(bai)濃(nong)度(du)和(he)鹽(yan)濃(nong)度(du)，計算回(hui)收率(lv)和(he)脫(tuo)鹽(yan)效(xiao)率(lv)。預裝層析柱純化流(liu)速最高不(bu)能超(chao)過(guo)裝柱流(liu)速的(de) 70%。

凝膠(jiao)過(guo)濾是(shi)壹種(zhong)非(fei)吸附性色譜(pu)技(ji)術，所(suo)有的(de)樣品物質都應(ying)在(zai)壹(yi)個柱體(ti)積之內洗脫(tuo)出(chu)來(lai)。完(wan)成壹(yi)次(ci)操(cao)作後，如仍用同壹(yi)種(zhong)緩沖(chong)液，色譜(pu)柱不(bu)需要再(zai)平(ping)衡(heng)。3）再(zai)生(sheng)

再(zai)生(sheng)通常(chang)用水(shui)沖(chong)洗2 倍柱體(ti)積，然後用緩沖(chong)液沖(chong)洗2-3倍柱體(ti)積，如果不(bu)立(li)刻(ke)使(shi)用，則(ze)用20%乙醇(chun)平(ping)衡(heng)後，4-30℃C保(bao)存。對不(bu)同的(de)樣品，建(jian)議大(da)約(yue)5次(ci)循(xun)環(huan)後，采用完(wan)整的(de)在(zai)位(wei)清洗（CIP）。

4.清洗及(ji)保(bao)存

在(zai)位(wei)清洗∶為(wei)除(chu)去變性蛋白(bai)或(huo)脂肪，有(you)時需要對脫(tuo)鹽(yan)柱進(jin)行原位(wei)清洗。常(chang)用的(de)清洗液為(wei)0.1-0.2 M NaOH 或(huo)非(fei)離子(zi)型去垢劑。

1）加(jia)入(ru)壹倍的(de)柱體(ti)積0.1-0.2 M NaOH，依靠重(zhong)力或(huo)者低(di)流(liu)速清(qing)洗介質(zhi)。

2）用足(zu)夠(gou)量(liang)的(de)去離子(zi)水(shui)，沖(chong)洗介質(zhi)，直(zhi)至(zhi) pH 值至(zhi)中性。

3）用至(zhi)少三(san)倍(bei)柱體(ti)積 20%乙醇溶(rong)液沖(chong)洗介質(zhi)，然後做好(hao)色譜(pu)柱的(de)密(mi)封(feng)，置於(yu)2-8℃保(bao)存。

註∶不(bu)建(jian)議介(jie)質多(duo)次(ci)重(zhong)復再(zai)生(sheng)和(he)使(shi)用。

蘇(su)州阿(e)爾法生(sheng)物提供(gong)的(de)瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)介(jie)質、葡聚糖(tang)凝(ning)膠(jiao)介(jie)質等蛋白(bai)純化和(he)分離填(tian)料(liao)以(yi)及(ji)相(xiang)關(guan)生(sheng)物試(shi)劑。另(ling)外(wai)還提供(gong)、氨(an)酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)親(qin)和(he)純化介(jie)質(zhi)、GST-tag蛋白(bai)親(qin)和(he)純化介(jie)質(zhi)、 MBP-tag蛋白(bai)親(qin)和(he)純化介(jie)質(zhi)、Biotin-tag蛋白(bai)親(qin)和(he)純化介(jie)質(zhi)、Strep-tagll標(biao)簽親(qin)和(he)純化介(jie)質(zhi)、 標(biao)簽抗體(ti)親(qin)和(he)純化介(jie)質(zhi)等標(biao)簽蛋白(bai)親(qin)和(he)層(ceng)析(xi)介(jie)質(zhi)； 離子(zi)交(jiao)換層(ceng)析 、色譜(pu)柱、離子(zi)交(jiao)換層(ceng)析樹脂、疏水(shui)層(ceng)析(xi)介(jie)質、 磁性微球等。