瓊(qiong)脂糖凝(ning)膠(jiao)過濾(lv)基(ji)質(zhi)樹(shu)脂填料(liao) Smartaroe 蛋(dan)白純化(hua)試(shi)劑是壹(yi)種球(qiu)形瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)過濾(lv)基(ji)質(zhi)，Smartarose 4B和(he)Smartarose 6B的(de)瓊脂糖含(han)量(liang)分別(bie)為(wei)4%和6%o Smartarose CL凝(ning)膠(jiao)是 Smartarose 4B和(he)Smartarose 6B的衍(yan)生物(wu)，化(hua)學(xue)和(he)物(wu)理性能(neng)更優(you)異(yi)，流速更快。Smartarose CL凝膠(jiao)耐(nai)有機溶劑，因(yin)此適(shi)合在(zai)有機溶劑 中分離(li)物(wu)質(zhi)。

瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)過濾(lv)基(ji)質(zhi)樹(shu)脂填料(liao) Smartaroe 蛋(dan)白純化(hua)

Smartarose是壹(yi)種球(qiu)形瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)過濾(lv)基(ji)質(zhi)，Smartarose 4B和(he)Smartarose 6B的(de)瓊脂糖含(han)量(liang)分別(bie)為(wei)4%和6%o Smartarose CL凝(ning)膠(jiao)是 Smartarose 4B和(he)Smartarose 6B的衍(yan)生物(wu)，化(hua)學(xue)和(he)物(wu)理性能(neng)更優(you)異(yi)，流速更快。Smartarose CL凝膠(jiao)耐(nai)有機溶劑，因(yin)此適(shi)合在(zai)有機溶劑 中分離(li)物(wu)質(zhi)。Smartarose和Smartarose CL分離(li)範(fan)圍(wei)較(jiao)廣(guang)，適(shi)合對(dui)分子(zi)量(liang)不同(tong)的(de)樣(yang)品(pin)進(jin)行表征或分離(li)。

瓊(qiong)脂糖凝(ning)膠(jiao)過濾(lv)基(ji)質(zhi)樹(shu)脂填料(liao) Smartaroe 蛋(dan)白純化(hua)性(xing)能(neng)

   pH範(fan)圍(wei)是我們(men)根據(ju)實(shi)驗和經驗估算的(de)。請註意(yi)：pH長期(qi)穩(wen)定(ding)性(xing)是指(zhi)凝膠(jiao)在(zai)長時(shi)間內(nei)其層(ceng)析性能(neng)不(bu)會改(gai)變的(de)pH範(fan)圍(wei)。pH短(duan)期(qi)穩(wen)定(ding)性(xing)是指(zhi)凝膠(jiao)再(zai)生(sheng)和(he)清(qing)洗時(shi)穩(wen)定(ding)的(de)pH範(fan)圍(wei)。

裝(zhuang)柱(zhu)說明：

介質(zhi)保(bao)存(cun)於20%乙(yi)醇(chun)。裝(zhuang)柱(zhu)前建(jian)議(yi)將20%乙(yi)醇(chun)抽(chou)濾去除，置(zhi)換(huan)成去離(li)子(zi)水。

將75%介質(zhi)和(he)25%去離(li)子(zi)水混(hun)句(ju)，真空負壓脫氣。不要(yao)使(shi)用(yong)粘性(xing)試劑裝(zhuang)柱(zhu)。裝(zhuang)柱(zhu)完(wan)成後(hou)，可(ke)以用(yong)粘性(xing)緩沖液低(di)流速平(ping)衡(heng)層(ceng)析柱(zhu)。

2.2介質(zhi)裝(zhuang)填

裝(zhuang)柱(zhu)方法有兩(liang)步(bu)，第(di)二(er)步(bu)應在恒(heng)壓下進(jin)行，柱(zhu)壓見表2。凝膠(jiao)層(ceng)析的分辨(bian)率(lv)隨(sui)柱(zhu)床高度(du)的增加(jia)而(er)增加(jia)。因(yin)此，柱(zhu)床高度(du)最好在(zai)60 cm以上(shang)。

表2.推薦(jian)裝(zhuang)柱(zhu)流速和壓力

V：所需介質(zhi)體積ml

1.15：壓縮系(xi)數(shu)（不(bu)同介質(zhi)壓縮系(xi)數(shu)不(bu)同）

r：柱(zhu)管半徑(jing)cm

h：裝(zhuang)填高度(du)cm

1） 用(yong)去離(li)子(zi)水沖洗層(ceng)析柱(zhu)底篩板與(yu)接(jie)頭，確保柱(zhu)底篩板上(shang)無(wu)氣泡(pao)，關(guan)閉(bi)柱(zhu)底出(chu)口(kou)，並在(zai)柱(zhu)底部(bu)留(liu)出1-2 cm的(de)去離(li)子(zi)水。

2） 將填料(liao)懸(xuan)浮起來(lai)，小(xiao)心的(de)將(jiang)漿(jiang)液連(lian)續(xu)地(di)倒(dao)入(ru)層(ceng)析柱(zhu)中。用(yong)玻(bo)璃棒(bang)沿(yan)著柱(zhu)壁(bi)倒入(ru)漿(jiang)液可(ke)減少(shao)氣泡(pao)的(de)產生。

3） 如果使(shi)用(yong)儲(chu)液器，應(ying)立(li)即(ji)在層(ceng)析柱(zhu)和儲(chu)液器中加(jia)滿(man)水(shui)，將(jiang)進(jin)樣(yang)分配器放(fang)置於(yu)漿(jiang)液表面，連接(jie)至泵(beng)上(shang)，避(bi)免(mian)在分配器或進(jin)樣(yang)管中產生氣(qi)泡(pao)。

4） 打(da)開層(ceng)析柱(zhu)底部(bu)出(chu)口，開啟(qi)泵(beng)，使其在設(she)定(ding)的流速下進(jin)行。最初應(ying)讓(rang)緩沖(chong)液緩(huan)慢流過層(ceng)析柱(zhu)，然(ran)後(hou)緩慢(man)增加(jia)至(zhi)最(zui)終(zhong)流速，這樣(yang)可(ke)避(bi)免(mian)液 壓對(dui)所(suo)形成(cheng)柱(zhu)床的沖(chong)擊，也(ye)可(ke)以避(bi)免(mian)柱(zhu)床形成(cheng)的不(bu)均(jun)勻。如果達(da)不到(dao)推薦(jian)的壓力或流速，可(ke)以用(yong)妳所(suo)使用(yong)泵(beng)的最(zui)大(da)流速，這樣(yang)也(ye)可(ke)以得(de)到 壹(yi)個很好的裝(zhuang)填效果。（註(zhu)意：在(zai)隨(sui)後(hou)的色(se)譜(pu)程(cheng)序中，不(bu)要(yao)超(chao)過最(zui)大(da)裝(zhuang)柱(zhu)流速的75%）當(dang)柱(zhu)床高度(du)穩(wen)定(ding)後(hou)，在(zai)最後的裝(zhuang)柱(zhu)流速下至(zhi)少(shao)再上(shang)2 倍(bei)柱(zhu)床體積的(de)去離(li)子(zi)水。標(biao)上(shang)柱(zhu)床高度(du)。

5） 關閉(bi)泵(beng)，關閉(bi)層(ceng)析柱(zhu)出口。

6） 如果使(shi)用(yong)儲(chu)液器，去除儲(chu)液器，將(jiang)分配器置(zhi)於(yu)層(ceng)析柱(zhu)中。

7） 將(jiang)分配器推(tui)向(xiang)柱(zhu)子(zi)至標(biao)記的(de)柱(zhu)床高度(du)處(chu)。允(yun)許裝(zhuang)柱(zhu)液進(jin)入(ru)分配器，鎖(suo)緊分配器接(jie)頭。

8） 將(jiang)裝(zhuang)填好的層(ceng)析柱(zhu)連接(jie)至泵(beng)或色譜(pu)系(xi)統中，開始(shi)平(ping)衡(heng)。如果需要(yao)可(ke)以重(zhong)新(xin)調(tiao)整(zheng)分配器。

2.3柱(zhu)效測試(shi)

為(wei)了檢(jian)驗層(ceng)析柱(zhu)的質量(liang)，應進(jin)行柱(zhu)效測試(shi)，以確定理論塔(ta)板數(shu)和(he)峰不對(dui)稱系(xi)數(shu)。

洗脫液：去離(li)子(zi)水

樣(yang)品(pin)：2% （v/v）丙(bing)酮(tong)水(shui)溶液或者1 M NaCI溶液

如圖1所(suo)示(shi)計(ji)算理論塔(ta)板數(shu)，用(yong)如下公(gong)式：N/m = 5.54 （VrM）2 x 1000/L

計(ji)算峰(feng)不對(dui)稱系(xi)數(shu)（AS）公(gong)式如下：AS = b/a （如圖1所(suo)示(shi)）

3 .純(chun)化(hua)流程(cheng)

3.1緩(huan)沖液的(de)準備(bei)

所用(yong)水和(he)緩沖液在(zai)使用(yong)之前(qian)建(jian)議(yi)用(yong)0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾(lv)。

平(ping)衡(heng)液為(wei)蛋白純化(hua)後(hou)，用(yong)於保(bao)護蛋白的溶液，根(gen)據(ju)客戶需求自行選擇(ze)。

3.2樣(yang)品(pin)準(zhun)備(bei)

樣(yang)品(pin)在(zai)上(shang)樣(yang)前(qian)建(jian)議(yi)離(li)心或用(yong)0.22 pm或0.45|jm濾膜過濾(lv)，減少(shao)雜質，防(fang)止堵塞(sai)柱(zhu)子(zi)。

3.3樣(yang)品(pin)純(chun)化(hua)

1） 平(ping)衡(heng)

上(shang)樣(yang)之(zhi)前(qian)，用(yong)平(ping)衡(heng)液至(zhi)少(shao)平(ping)衡(heng)兩(liang)個柱(zhu)體積，或直到基(ji)線穩(wen)定(ding)。含(han)去垢(gou)劑的(de)溶液可(ke)能(neng)需要(yao)平(ping)衡(heng)更長時(shi)間。

2） 上(shang)樣(yang)

推(tui)薦(jian)上(shang)樣(yang)體積為(wei)柱(zhu)體積的(de)2-5%o可(ke)以通(tong)過上(shang)樣(yang)管或樣(yang)品(pin)環(huan)來(lai)上(shang)樣(yang)。純(chun)化(hua)流速最高(gao)不(bu)能(neng)超(chao)過裝(zhuang)柱(zhu)流速的70%0

3） 再(zai)生(sheng)

再(zai)生(sheng)通(tong)常用(yong)水沖(chong)洗2倍(bei)柱(zhu)體積，然(ran)後(hou)用(yong)緩沖(chong)液沖(chong)洗2-3倍(bei)柱(zhu)體積，如果不(bu)立刻(ke)使用(yong)，則(ze)用(yong)20%乙醇(chun)平(ping)衡(heng)後，4-30°C保存。對(dui)不(bu)同的(de)樣(yang)品(pin), 建(jian)議(yi)大(da)約5次循(xun)環後(hou)，采(cai)用(yong)完(wan)整(zheng)的在(zai)位(wei)清(qing)洗（CIP）o

4.清洗及保存(cun)

4.1 CIP （Cleaning In Place）清洗

CIP是去除以(yi)前(qian)生產過程(cheng)中產生的(de)結合過緊(jin)密、沈澱或變性(xing)的(de)物(wu)質(zhi)。在某(mou)些(xie)情(qing)況(kuang)下，介質(zhi)再(zai)生(sheng)後，月(yue)謳(謳)或變性(xing)蛋(dan)白跡(跡)物(wu)質(zhi)仍可(ke)育誡留茁(zhuo)掃=o 需要(yao)制鵰料(liao)中已(yi)知(zhi)汙(wu)染(ran)I刎樓(lou)來(lai)設(she)H特(te)定(ding)的(de)CIP程(cheng)序。

當(dang)出(chu)現下列情(qing)況(kuang)，需要(yao)對(dui)介質(zhi)進(jin)行在位(wei)清(qing)洗：

•柱(zhu)壓增高(gao)；

•填料(liao)顏色(se)變化(hua)明(ming)顯(xian)；

•分辨(bian)率(lv)降低；

•上(shang)接(jie)頭與(yu)凝膠(jiao)表面之間(jian)出現(xian)空隙；

•如果反壓增高(gao)，在(zai)介質(zhi)清(qing)洗前檢(jian)查(zha)閥門(men)、管線等(deng)中止情況(kuang)。

1） 去除非(fei)特(te)異(yi)性(xing)結合蛋(dan)白和脂蛋白

用(yong)0.5 M NaOH清洗壹個柱(zhu)體積，去離(li)子(zi)水或緩沖(chong)液平(ping)衡(heng)至中性(xing)，流速40 cm/ho

2） 去除壹(yi)些(xie)沈澱或變性(xing)物(wu)質(zhi)，建(jian)議(yi)使用(yong)下面(mian)的方(fang)法

用(yong)4倍(bei)柱(zhu)體積的(de)1.0-2.0 M NaOH溶液，流速40 cm/h對(dui)介質(zhi)進(jin)行清洗，然(ran)後(hou)立即(ji)用(yong)2-3倍(bei)柱(zhu)體積的(de)水(shui)清洗。

3） 去除壹(yi)些(xie)強(qiang)結合的(de)疏水蛋白

用(yong)4-10倍(bei)柱(zhu)體積的(de)70%乙(yi)醇(chun)或30%異丙(bing)醇(chun)清洗（使用(yong)有機溶劑要(yao)梯(ti)度(du)清洗，避(bi)免(mian)起泡(pao)）或者用(yong)含去垢(gou)劑的(de)酸或中性(xing)溶液。比(bi)如，用(yong)1 M 醋酸(suan)溶液含(han)0.5%非離(li)子(zi)型去垢(gou)劑，清(qing)洗流速40 cm/h。隨(sui)後(hou)用(yong)70%乙醇(chun)沖洗5個柱(zhu)體積洗去殘留(liu)去垢(gou)劑。

4.2保(bao)存

CIP之(zhi)後(hou)的介質(zhi)如果不(bu)使用(yong)可(ke)以用(yong)20%乙醇(chun)，4 -30°C保存(cun)。

5 .訂購信(xin)息及相關(guan)產品

         蘇州(zhou)阿爾(er)法生物(wu)提(ti)供(gong)的瓊脂糖凝(ning)膠(jiao)介質(zhi)、葡聚糖凝(ning)膠(jiao)介質(zhi)等(deng)蛋(dan)白純化(hua)和(he)分離(li)填料(liao)以(yi)及相關(guan)生物(wu)試(shi)劑。另(ling)外還提(ti)供(gong)、組(zu)氨(an)酸(suan)標(biao)簽(qian)蛋(dan)白親和純化(hua)介質(zhi)、GST-tag蛋(dan)白親和純化(hua)介質(zhi)、 MBP-tag蛋(dan)白親和純化(hua)介質(zhi)、生(sheng)物(wu)素(su)Biotin-tag蛋白親和純化(hua)介質(zhi)、Strep-tagll標(biao)簽(qian)親(qin)和純化(hua)介質(zhi)、 標(biao)簽(qian)抗體親和(he)純化(hua)介質(zhi)等(deng)標(biao)簽(qian)蛋(dan)白親和層(ceng)析介質(zhi)； 離(li)子(zi)交換層(ceng)析 、色譜(pu)柱(zhu)、離(li)子(zi)交換層(ceng)析樹(shu)脂、疏水層(ceng)析介質(zhi)、 磁(ci)性微(wei)球等(deng)。