LightNing® HinP1I內(nei)切酶是(shi)壹(yi)系(xi)列經(jing)過基因(yin)工(gong)程(cheng)重組(zu)的快速(su)限制性內(nei)切酶，適用(yong)於(yu)質粒 DNA、PCR 產物(wu)或基因(yin)組(zu) DNA 等的快速(su)酶切。所有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內(nei)切酶在通(tong)用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都(dou)具有(you)優(you)良(liang)的活(huo)性(xing)，能(neng)夠(gou)在 5~15 分(fen)鐘(zhong)內(nei)完成(cheng)酶切。

LightNing® HinP1I內(nei)切酶組(zu)成(cheng)

特性和用(yong)法(fa)

LightNing® HinP1I內(nei)切酶，可在5~15 min內(nei)完成(cheng)反(fan)應

u建議反(fan)應條(tiao)件

1× CutOne®緩沖液；

37℃溫育(yu)；

參照“DNA 快速酶切流(liu)程(cheng)"配制(zhi)反(fan)應體(ti)系(xi)。

u失活(huo)條(tiao)件

80℃溫育(yu)20 min。

u甲基化(hua)敏感性(xing)

對(dui)於(yu)被 CpG 甲基化(hua)的 DNA，剪切可能受阻(zu)。

u儲運(yun)條(tiao)件

-20℃

相(xiang)關(guan)問答

Q:為什(shen)麽在CutOne® Buffer中加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶在反(fan)應過程(cheng)中需(xu)要HSA的參與(yu)，我(wo)們(men)在CutOne® Buffer中添加(jia)了(le)HSA，避免反(fan)應中(zhong)額(e)外添加(jia)組(zu)分(fen)，使得(de)酶切反(fan)應更加(jia)便(bian)捷。

Q:HSA的添加(jia)對(dui)於(yu)雷霆系列限制性內(nei)切酶的功能(neng)會產生(sheng)什(shen)麽樣的影響(xiang)？

A:在我(wo)們(men)的測試中未(wei)曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對(dui)於(yu)雷霆系列限制性內(nei)切酶的功能(neng)有(you)任(ren)何影響(xiang)。在有(you)些(xie)情(qing)況下(xia)，對(dui)於(yu)部分(fen)的酶切反(fan)應有(you)促進(jin)作用(yong)。

Q:我(wo)需要嚴(yan)格(ge)遵守(shou)5~15 min的酶切時(shi)間嗎(ma)？能(neng)夠(gou)延長反(fan)應時(shi)間嗎(ma)？

A:雷霆系列限制性內(nei)切酶經(jing)過改(gai)造可以(yi)將酶切時(shi)間縮短(duan)至5~15 min。同樣也消(xiao)除了(le)限制性內(nei)切酶的星(xing)活(huo)性(xing)（長(chang)時(shi)間反(fan)應造成(cheng)的非(fei)特(te)異性消(xiao)化(hua)），在說(shuo)明書(shu)中告知的星(xing)活(huo)性(xing)出(chu)現(xian)的時(shi)間範圍內(nei)可以(yi)適當(dang)延(yan)長反(fan)應時(shi)間。

Q:我(wo)什(shen)麽時(shi)候(hou)應當(dang)考(kao)慮星(xing)活(huo)性(xing)對(dui)於(yu)酶切反(fan)應的影響(xiang)？

A:如果額(e)外的酶切條(tiao)帶(dai)對(dui)於(yu)實驗結果(guo)會(hui)產生(sheng)影響(xiang)時(shi)我(wo)們(men)應當(dang)考(kao)慮星(xing)活(huo)性(xing)對(dui)於(yu)酶切反(fan)應的影響(xiang)。例如：進(jin)行基因(yin)型、突(tu)變(bian)型分(fen)析(xi)或克隆(long)時(shi)我(wo)們(men)應當(dang)避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的產生(sheng)。避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的有(you)效(xiao)方(fang)法(fa)：適當(dang)擴(kuo)大反(fan)應體(ti)積(ji)（較小(xiao)的反(fan)應體(ti)積(ji)容易(yi)造成(cheng)甘(gan)油體積達(da)到或超過總(zong)反(fan)應體(ti)積(ji)的5%）；不進(jin)行超長時(shi)間孵(fu)育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化(hua)極(ji)易(yi)產生(sheng)星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪(na)些(xie)關(guan)鍵(jian)因(yin)素會導致星(xing)活(huo)性(xing)？

A:長時(shi)間孵(fu)育(yu)、過量(liang)的酶、高(gao)甘油含(han)量(liang)（通(tong)常高(gao)於5%）、較小(xiao)的反(fan)應體(ti)系(xi)等因(yin)素都(dou)會導(dao)致星(xing)活(huo)性(xing)的產生(sheng)。

Q:未(wei)經(jing)純(chun)化(hua)的PCR產物(wu)直(zhi)接酶切要(yao)怎(zen)樣設(she)定體(ti)系？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推(tui)薦(jian)由這(zhe)些(xie)內(nei)容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應的限制性內(nei)切酶、ddH2O補(bu)齊(qi)到30 μl。酶的用量(liang)根(gen)據(ju)PCR產物(wu)的濃度(du)而定，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應緩(huan)沖(chong)液的原因(yin)是(shi)PCR反(fan)應中(zhong)存(cun)在對(dui)應的鹽(yan)離(li)子和金(jin)屬離(li)子，適當(dang)減(jian)少反(fan)應緩(huan)沖(chong)液的用量(liang)以(yi)保證最(zui)終反(fan)應體(ti)系(xi)中的環境適宜(yi)限制性內(nei)切酶發揮(hui)功能(neng)。

Q:限制性內(nei)切酶簡並(bing)性(xing)識(shi)別(bie)位(wei)點壹(yi)定是(shi)回文的嗎？

A:大多(duo)數(shu)二(er)型限制性內(nei)切酶的識(shi)別(bie)序(xu)列是(shi)回文的，而且(qie)是(shi)特定的堿基序(xu)列。然(ran)而(er)有(you)些(xie)限制性內(nei)切酶具有(you)簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別(bie)位(wei)點，也就是(shi)說(shuo)識(shi)別(bie)位(wei)點中有(you)壹(yi)個或以(yi)上的堿基對(dui)是(shi)非(fei)特(te)異的（例如(ru)：BsrfI識(shi)別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於(yu)這(zhe)樣(yang)的具有(you)簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別(bie)位(wei)點的限制性內(nei)切酶，只要(yao)是(shi)符合要(yao)求的序(xu)列皆(jie)能(neng)被識(shi)別(bie)並且(qie)被正確(que)地切割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中兩(liang)個並不是(shi)回文的，仍然(ran)能被BsrFI識(shi)別(bie)並且(qie)切割(ge)）。