LightNing® HinfI內(nei)切酶(mei)是壹系(xi)列(lie)經過基(ji)因(yin)工程重組的(de)快(kuai)速限制性(xing)內(nei)切酶(mei)，適(shi)用於質粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或基(ji)因(yin)組 DNA 等的(de)快(kuai)速酶切。所(suo)有 LightNing® 快速內(nei)切酶(mei)在(zai)通(tong)用的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中都具有優良的(de)活(huo)性，能夠在(zai) 5~15 分鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)酶切。

LightNing® HinfI內(nei)切酶(mei)組成(cheng)

特(te)性和(he)用法(fa)

LightNing® HinfI內(nei)切酶(mei)，可(ke)在(zai)5~15 min內(nei)完(wan)成(cheng)反應(ying)

u建(jian)議反(fan)應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照(zhao)“DNA 快(kuai)速酶(mei)切流(liu)程(cheng)"配制(zhi)反應(ying)體(ti)系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲基(ji)化(hua)敏感(gan)性

對(dui)於被 CpG 甲基(ji)化(hua)的(de) DNA，剪(jian)切可(ke)能受阻(zu)，

對(dui)於被 EcoBI 甲基(ji)化(hua)的(de) DNA，剪(jian)切可(ke)能受阻(zu)。

u儲運(yun)條(tiao)件

-20℃

相(xiang)關問(wen)答(da)

Q:為(wei)什麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入(ru)HSA？

A:壹些(xie)酶(mei)在(zai)反應(ying)過程(cheng)中(zhong)需要(yao)HSA的(de)參與，我(wo)們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添加(jia)了(le)HSA，避免(mian)反(fan)應(ying)中(zhong)額外(wai)添加(jia)組分，使(shi)得(de)酶切反(fan)應(ying)更加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加(jia)對(dui)於雷霆系列(lie)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)功能會(hui)產(chan)生什麽(me)樣(yang)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在(zai)我(wo)們(men)的(de)測(ce)試(shi)中(zhong)未曾發現(xian)HSA對(dui)於雷霆系列(lie)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)功能有任(ren)何(he)影(ying)響(xiang)。在(zai)有些情況下，對(dui)於部(bu)分的(de)酶(mei)切反(fan)應(ying)有促(cu)進(jin)作(zuo)用。

Q:我(wo)需(xu)要(yao)嚴格(ge)遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶(mei)切時(shi)間(jian)嗎(ma)？能夠延(yan)長(chang)反(fan)應時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆系列(lie)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)經(jing)過改(gai)造(zao)可以(yi)將(jiang)酶切時(shi)間(jian)縮(suo)短(duan)至5~15 min。同(tong)樣(yang)也消(xiao)除了(le)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)星(xing)活性（長(chang)時(shi)間(jian)反(fan)應(ying)造成(cheng)的(de)非(fei)特異(yi)性消(xiao)化(hua)），在(zai)說明書(shu)中告(gao)知(zhi)的(de)星(xing)活性出(chu)現(xian)的(de)時(shi)間(jian)範圍(wei)內(nei)可(ke)以(yi)適當(dang)延(yan)長(chang)反(fan)應時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什麽(me)時(shi)候(hou)應(ying)當(dang)考慮星(xing)活性對(dui)於酶切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如果(guo)額外(wai)的(de)酶(mei)切條(tiao)帶(dai)對(dui)於實驗結果(guo)會(hui)產(chan)生影(ying)響(xiang)時(shi)我(wo)們(men)應當(dang)考慮星(xing)活性對(dui)於酶切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)。例(li)如：進(jin)行(xing)基(ji)因(yin)型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分(fen)析或克(ke)隆(long)時(shi)我(wo)們(men)應當(dang)避免(mian)星(xing)活性的(de)產(chan)生。避免(mian)星(xing)活性的(de)有效方(fang)法(fa)：適當(dang)擴大(da)反應(ying)體(ti)積(ji)（較小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)積(ji)容易造(zao)成(cheng)甘(gan)油(you)體(ti)積(ji)達到或(huo)超過總(zong)反(fan)應體(ti)積(ji)的(de)5%）；不(bu)進行(xing)超(chao)長(chang)時(shi)間(jian)孵育(yu)（過夜消(xiao)化(hua)極(ji)易產(chan)生星(xing)活性）。

Q:有哪些關鍵因(yin)素(su)會(hui)導(dao)致星(xing)活性？

A:長(chang)時(shi)間(jian)孵育(yu)、過量的(de)酶(mei)、高(gao)甘(gan)油(you)含(han)量（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)系(xi)等因(yin)素(su)都(dou)會(hui)導(dao)致星(xing)活性的(de)產(chan)生。

Q:未經純(chun)化(hua)的(de)PCR產(chan)物直接(jie)酶切要(yao)怎(zen)樣(yang)設(she)定(ding)體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推薦由(you)這(zhe)些(xie)內(nei)容組成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應的(de)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊到30 μl。酶(mei)的(de)用量根據PCR產(chan)物的(de)濃(nong)度而(er)定(ding)，只加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應緩(huan)沖(chong)液的(de)原(yuan)因(yin)是PCR反(fan)應中(zhong)存(cun)在(zai)對(dui)應的(de)鹽離(li)子(zi)和(he)金屬離(li)子(zi)，適(shi)當(dang)減(jian)少(shao)反應緩(huan)沖液(ye)的(de)用量以保(bao)證(zheng)最(zui)終反應(ying)體(ti)系(xi)中的(de)環(huan)境適宜(yi)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)發揮功能。

Q:限制性(xing)內(nei)切酶(mei)簡並性(xing)識別(bie)位(wei)點(dian)壹定(ding)是回文(wen)的(de)嗎(ma)？

A:大(da)多數(shu)二(er)型(xing)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)識(shi)別(bie)序列是回文(wen)的(de)，而(er)且(qie)是特定的(de)堿(jian)基(ji)序列。然(ran)而(er)有些限制性(xing)內(nei)切酶(mei)具有簡並性(xing)識別(bie)位(wei)點(dian)，也就是說識(shi)別(bie)位(wei)點(dian)中(zhong)有壹個(ge)或(huo)以上(shang)的(de)堿(jian)基(ji)對(dui)是非特異(yi)的(de)（例(li)如：BsrfI識(shi)別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣(yang)的(de)具有簡並性(xing)識別(bie)位(wei)點(dian)的(de)限制性(xing)內(nei)切酶(mei)，只(zhi)要是符(fu)合要(yao)求(qiu)的(de)序列皆(jie)能被識(shi)別(bie)並且(qie)被正(zheng)確(que)地切割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其中兩個(ge)並不是回文(wen)的(de)，仍然能被BsrFI識(shi)別(bie)並且(qie)切割(ge)）。