LightNing® HindIII內(nei)切酶(mei)是壹系列(lie)經(jing)過基(ji)因工(gong)程重(zhong)組的(de)快(kuai)速限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，適(shi)用(yong)於(yu)質粒 DNA、PCR 產物(wu)或(huo)基(ji)因組 DNA 等(deng)的(de)快(kuai)速酶(mei)切(qie)。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速內(nei)切(qie)酶在(zai)通用(yong)的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具(ju)有優(you)良的(de)活(huo)性(xing)，能夠(gou)在(zai) 5~15 分鐘內(nei)完(wan)成酶切(qie)。

LightNing® HindIII內切酶(mei)組成(cheng)

特性(xing)和用(yong)法(fa)

LightNing® HindIII內切酶(mei)，可在(zai)5~15 min內完成(cheng)反(fan)應(ying)

u建(jian)議反(fan)應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩沖液(ye)；

37℃溫育；

參照“DNA 快(kuai)速酶(mei)切(qie)流(liu)程"配(pei)制(zhi)反(fan)應(ying)體(ti)系。

u失活(huo)條(tiao)件

80℃溫育20 min。

u甲基(ji)化敏(min)感性(xing)

對(dui)於被(bei) EcoBI 甲基(ji)化的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻(zu)。

u儲運條(tiao)件

-20℃

相(xiang)關問答(da)

Q:為什(shen)麽在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加入(ru)HSA？

A:壹些酶(mei)在(zai)反(fan)應(ying)過(guo)程中(zhong)需要HSA的(de)參(can)與，我們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加了(le)HSA，避(bi)免反(fan)應(ying)中(zhong)額(e)外(wai)添(tian)加組分，使得(de)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)更(geng)加便捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加對(dui)於雷霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)功(gong)能會(hui)產生(sheng)什(shen)麽樣(yang)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在(zai)我們的(de)測(ce)試(shi)中(zhong)未曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對(dui)於雷霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)功(gong)能有(you)任何影(ying)響(xiang)。在(zai)有些情況(kuang)下(xia)，對(dui)於部(bu)分的(de)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)有(you)促(cu)進作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴(yan)格遵守5~15 min的(de)酶(mei)切(qie)時(shi)間(jian)嗎？能夠(gou)延(yan)長反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)嗎？

A:雷霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶經(jing)過改(gai)造可以將(jiang)酶切(qie)時間(jian)縮短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也消(xiao)除了(le)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)星(xing)活(huo)性(xing)（長時間(jian)反(fan)應(ying)造成的(de)非(fei)特異性(xing)消(xiao)化(hua)），在(zai)說明書(shu)中(zhong)告知的(de)星(xing)活(huo)性(xing)出(chu)現的(de)時(shi)間(jian)範圍內(nei)可(ke)以適(shi)當(dang)延(yan)長反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)。

Q:我什(shen)麽時候應當(dang)考慮星(xing)活(huo)性(xing)對(dui)於酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如果額(e)外(wai)的(de)酶(mei)切(qie)條(tiao)帶對(dui)於實(shi)驗(yan)結果(guo)會產生(sheng)影(ying)響(xiang)時我們應(ying)當(dang)考慮星(xing)活(huo)性(xing)對(dui)於酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)。例如：進行(xing)基(ji)因型(xing)、突變型(xing)分析或(huo)克(ke)隆(long)時(shi)我們應(ying)當(dang)避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的(de)產生(sheng)。避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的(de)有(you)效(xiao)方(fang)法(fa)：適(shi)當(dang)擴(kuo)大(da)反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)容(rong)易(yi)造成甘油(you)體積(ji)達到或(huo)超過總(zong)反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)的(de)5%）；不進(jin)行(xing)超長時間(jian)孵(fu)育（過(guo)夜(ye)消(xiao)化(hua)極易產生(sheng)星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有哪(na)些(xie)關鍵因(yin)素(su)會導致(zhi)星(xing)活(huo)性(xing)？

A:長時間(jian)孵(fu)育、過(guo)量的(de)酶(mei)、高(gao)甘(gan)油(you)含量（通常(chang)高(gao)於(yu)5%）、較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體(ti)系等(deng)因(yin)素(su)都會導(dao)致(zhi)星(xing)活(huo)性(xing)的(de)產生(sheng)。

Q:未經(jing)純化(hua)的(de)PCR產物(wu)直(zhi)接(jie)酶(mei)切要怎樣(yang)設定(ding)體(ti)系？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系推(tui)薦(jian)由(you)這(zhe)些(xie)內(nei)容(rong)組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應的(de)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶、ddH2O補齊到(dao)30 μl。酶的(de)用(yong)量根據PCR產物(wu)的(de)濃度(du)而(er)定(ding)，只加入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩沖液(ye)的(de)原(yuan)因是PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存在(zai)對(dui)應的(de)鹽(yan)離(li)子和金屬(shu)離(li)子，適(shi)當(dang)減(jian)少反(fan)應(ying)緩沖液(ye)的(de)用(yong)量以保證最(zui)終反(fan)應(ying)體(ti)系中(zhong)的(de)環(huan)境適(shi)宜(yi)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶發揮功能。

Q:限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶簡並性(xing)識別位點壹定(ding)是回(hui)文(wen)的(de)嗎？

A:大(da)多數二型(xing)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)識別序列(lie)是回(hui)文(wen)的(de)，而(er)且(qie)是特定(ding)的(de)堿(jian)基(ji)序列(lie)。然(ran)而(er)有些(xie)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶具(ju)有簡並性(xing)識別位點，也就(jiu)是說(shuo)識別位點中(zhong)有壹個或(huo)以(yi)上(shang)的(de)堿(jian)基(ji)對(dui)是非(fei)特異的(de)（例(li)如(ru)：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣(yang)的(de)具(ju)有簡並性(xing)識別位點的(de)限制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，只要(yao)是符(fu)合要求的(de)序列(lie)皆(jie)能被(bei)識別並且(qie)被(bei)正確(que)地切割(ge)（例(li)如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩個並不是回(hui)文(wen)的(de)，仍(reng)然(ran)能被(bei)BsrFI識別並且(qie)切割(ge)）。