LightNing® HhaI內切酶(mei)是壹系(xi)列(lie)經(jing)過基因(yin)工程重(zhong)組的(de)快(kuai)速限制性內切酶(mei)，適用於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或(huo)基因(yin)組 DNA 等的(de)快(kuai)速酶切。所有(you) LightNing® 快(kuai)速內切酶(mei)在通用(yong)的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中都具(ju)有(you)優良(liang)的(de)活(huo)性(xing)，能(neng)夠(gou)在 5~15 分鐘(zhong)內完成(cheng)酶切。

LightNing® HhaI內切酶(mei)組成(cheng)

特性和用法

LightNing® HhaI內切酶(mei)，可在5~15 min內完成(cheng)反應

u 建(jian)議(yi)反應條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫育；

參照(zhao)“DNA 快速酶切流(liu)程(cheng)"配制反應體系(xi)。

u 失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

80℃溫育20 min。

u 甲(jia)基化(hua)敏(min)感(gan)性

對於被 CpG 甲(jia)基化(hua)的(de) DNA，剪切可(ke)能(neng)受(shou)阻(zu)。

u 儲運條件(jian)

-20℃

相關(guan)問答(da)

Q:為什(shen)麽在CutOne® Buffer中加入HSA？

A:壹些酶在反應過程中需(xu)要HSA的(de)參(can)與(yu)，我們在CutOne® Buffer中添(tian)加了(le)HSA，避(bi)免反應中額(e)外添(tian)加組分，使(shi)得酶(mei)切反應更加便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加對(dui)於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性內切酶(mei)的(de)功(gong)能會產(chan)生什(shen)麽樣的(de)影響？

A:在我們的(de)測(ce)試(shi)中未曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性內切酶(mei)的(de)功(gong)能有(you)任(ren)何影響。在有(you)些情況下，對(dui)於部分的(de)酶(mei)切反應有(you)促(cu)進(jin)作(zuo)用。

Q:我需(xu)要嚴格遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶(mei)切時(shi)間嗎(ma)？能夠(gou)延(yan)長反應時(shi)間嗎(ma)？

A:雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性內切酶(mei)經(jing)過改造可(ke)以(yi)將(jiang)酶切時(shi)間縮短(duan)至5~15 min。同樣也(ye)消(xiao)除了限制性內切酶(mei)的(de)星(xing)活(huo)性(xing)（長時(shi)間反應造成(cheng)的(de)非特異性消(xiao)化(hua)），在說(shuo)明書(shu)中告知的(de)星(xing)活(huo)性(xing)出(chu)現的(de)時(shi)間範圍內(nei)可(ke)以適當延(yan)長反應時(shi)間。

Q:我什麽時(shi)候應當考(kao)慮(lv)星(xing)活(huo)性(xing)對(dui)於酶(mei)切反應的(de)影響？

A:如果額(e)外的(de)酶(mei)切條(tiao)帶(dai)對於實(shi)驗(yan)結(jie)果會產(chan)生影響時(shi)我們應當考(kao)慮(lv)星(xing)活(huo)性(xing)對(dui)於酶(mei)切反應的(de)影響。例(li)如：進(jin)行基因(yin)型、突變型分析(xi)或(huo)克(ke)隆時(shi)我們應當避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的(de)產(chan)生。避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的(de)有(you)效(xiao)方法：適當擴(kuo)大反應體積（較(jiao)小的(de)反應體積容(rong)易造(zao)成(cheng)甘油(you)體積達到(dao)或(huo)超(chao)過(guo)總(zong)反應體積的(de)5%）；不進(jin)行超(chao)長時(shi)間孵(fu)育(yu)（過(guo)夜消化(hua)極(ji)易產(chan)生星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪些關鍵因素(su)會導(dao)致星(xing)活(huo)性(xing)？

A:長時(shi)間孵(fu)育(yu)、過(guo)量(liang)的(de)酶(mei)、高甘油含(han)量(liang)（通(tong)常(chang)高於5%）、較(jiao)小的(de)反應體系(xi)等因(yin)素(su)都會(hui)導(dao)致星(xing)活(huo)性(xing)的(de)產(chan)生。

Q:未經(jing)純化(hua)的(de)PCR產(chan)物直(zhi)接酶切要怎(zen)樣設(she)定體系(xi)？

A:反應體系(xi)推薦(jian)由這些內容(rong)組成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限(xian)制性內切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊(qi)到(dao)30 μl。酶的(de)用(yong)量根據PCR產(chan)物的(de)濃(nong)度而定，只(zhi)加入2 μl反應緩(huan)沖液(ye)的(de)原(yuan)因(yin)是PCR反應中存在對應(ying)的(de)鹽(yan)離(li)子(zi)和金(jin)屬(shu)離(li)子，適當減(jian)少反應緩(huan)沖液(ye)的(de)用(yong)量以保(bao)證最終(zhong)反應體系(xi)中的(de)環(huan)境適宜限制性內切酶(mei)發(fa)揮功能(neng)。

Q:限制性內切酶(mei)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)壹(yi)定是回文(wen)的(de)嗎(ma)？

A:大多(duo)數二(er)型限制性內切酶(mei)的(de)識(shi)別序列(lie)是回文(wen)的(de)，而且是特定的(de)堿基序(xu)列(lie)。然(ran)而有(you)些限制性內切酶(mei)具(ju)有(you)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)，也(ye)就(jiu)是說(shuo)識(shi)別位點(dian)中有(you)壹(yi)個或(huo)以上(shang)的(de)堿基對(dui)是非特異的(de)（例(li)如：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這(zhe)樣的(de)具(ju)有(you)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)的(de)限(xian)制性內切酶(mei)，只(zhi)要是符合要求的(de)序(xu)列(lie)皆能被識(shi)別並(bing)且被正(zheng)確(que)地切割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中兩個並(bing)不是回文(wen)的(de)，仍(reng)然(ran)能被BsrFI識(shi)別並(bing)且切割(ge)）。