LightNing® HaeIII內切酶是(shi)壹(yi)系(xi)列(lie)經過基因工(gong)程重組的(de)快(kuai)速限(xian)制性內切酶，適(shi)用於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產物或基(ji)因組(zu) DNA 等(deng)的快(kuai)速酶(mei)切(qie)。所(suo)有(you) LightNing® 快(kuai)速內切酶在(zai)通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具(ju)有(you)優(you)良的(de)活性，能(neng)夠在(zai) 5~15 分鐘(zhong)內完成酶(mei)切。

LightNing® HaeIII內切酶組(zu)成

特性(xing)和(he)用法

LightNing® HaeIII內切酶，可在(zai)5~15 min內完成反(fan)應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩沖(chong)液(ye)；

37℃溫(wen)育；

參照(zhao)“DNA 快(kuai)速酶(mei)切(qie)流(liu)程"配(pei)制反(fan)應(ying)體(ti)系。

u失活條件(jian)

80℃溫(wen)育20 min。

u甲(jia)基(ji)化敏(min)感(gan)性(xing)

對(dui)於被(bei) CpG 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切可(ke)能(neng)受(shou)阻。

u儲(chu)運條件(jian)

-20℃

相關(guan)問(wen)答

Q:為(wei)什(shen)麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在(zai)反(fan)應(ying)過程中(zhong)需要(yao)HSA的參(can)與，我(wo)們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添加(jia)了HSA，避免(mian)反(fan)應(ying)中(zhong)額外添加(jia)組分，使得(de)酶(mei)切反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便捷(jie)。

Q:HSA的添(tian)加(jia)對(dui)於雷(lei)霆(ting)系列(lie)限(xian)制性內切酶的(de)功能(neng)會產生什麽(me)樣(yang)的(de)影響(xiang)？

A:在我(wo)們(men)的(de)測試中(zhong)未曾發(fa)現HSA對(dui)於雷(lei)霆(ting)系列(lie)限(xian)制性內切酶的(de)功能(neng)有(you)任(ren)何(he)影響(xiang)。在(zai)有(you)些(xie)情況(kuang)下(xia)，對(dui)於部分的酶(mei)切反(fan)應(ying)有(you)促進作用。

Q:我(wo)需(xu)要(yao)嚴(yan)格遵守5~15 min的酶(mei)切(qie)時(shi)間(jian)嗎(ma)？能(neng)夠延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性內切酶經過改造(zao)可以將酶切(qie)時(shi)間(jian)縮短至(zhi)5~15 min。同樣(yang)也(ye)消除(chu)了(le)限(xian)制性內切酶的(de)星活性（長(chang)時(shi)間(jian)反(fan)應(ying)造(zao)成的(de)非(fei)特(te)異性消(xiao)化），在(zai)說明(ming)書中(zhong)告(gao)知的星(xing)活性出現的時(shi)間(jian)範(fan)圍(wei)內可以適(shi)當(dang)延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什(shen)麽(me)時(shi)候(hou)應(ying)當(dang)考慮(lv)星(xing)活性對(dui)於酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影響(xiang)？

A:如果(guo)額外的酶切條帶(dai)對(dui)於實驗結(jie)果會產生影響(xiang)時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當(dang)考慮(lv)星(xing)活性對(dui)於酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影響(xiang)。例(li)如(ru)：進行基因型(xing)、突變(bian)型(xing)分析或克(ke)隆時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當(dang)避免(mian)星(xing)活性的產生。避免(mian)星(xing)活性的有(you)效方(fang)法：適(shi)當(dang)擴(kuo)大(da)反(fan)應(ying)體(ti)積（較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體(ti)積容易(yi)造(zao)成甘油體(ti)積達到或超(chao)過總(zong)反(fan)應(ying)體(ti)積的5%）；不進行超長(chang)時(shi)間(jian)孵(fu)育（過夜消(xiao)化極(ji)易(yi)產生星活性）。

Q:有(you)哪些(xie)關(guan)鍵(jian)因素(su)會導(dao)致(zhi)星活性？

A:長(chang)時(shi)間(jian)孵(fu)育、過量(liang)的(de)酶、高甘油含(han)量(liang)（通(tong)常高於5%）、較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體(ti)系等(deng)因素(su)都(dou)會導(dao)致(zhi)星活性的產生。

Q:未經純(chun)化的PCR產物直(zhi)接酶切(qie)要(yao)怎(zen)樣(yang)設(she)定(ding)體(ti)系？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系推薦(jian)由(you)這(zhe)些(xie)內容組成：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限(xian)制性內切酶、ddH2O補齊到30 μl。酶的(de)用量(liang)根據(ju)PCR產物的濃度(du)而(er)定(ding)，只(zhi)加(jia)入2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)原因是(shi)PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存在(zai)對(dui)應(ying)的(de)鹽(yan)離子和(he)金屬(shu)離子，適(shi)當(dang)減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)用量(liang)以保證(zheng)最終反(fan)應(ying)體(ti)系中(zhong)的環境(jing)適(shi)宜(yi)限制性內切酶發(fa)揮功能(neng)。

Q:限制性內切酶簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別(bie)位點壹(yi)定(ding)是回(hui)文(wen)的(de)嗎(ma)？

A:大(da)多(duo)數二(er)型(xing)限(xian)制性內切酶的(de)識(shi)別(bie)序(xu)列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，而(er)且(qie)是(shi)特(te)定(ding)的堿(jian)基(ji)序列(lie)。然而(er)有(you)些(xie)限(xian)制性內切酶具(ju)有(you)簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別(bie)位點，也(ye)就是(shi)說識(shi)別(bie)位點中(zhong)有(you)壹(yi)個(ge)或以上(shang)的(de)堿(jian)基(ji)對(dui)是非(fei)特(te)異(yi)的（例(li)如(ru)：BsrfI識(shi)別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣(yang)的(de)具有(you)簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別(bie)位點的(de)限(xian)制性內切酶，只(zhi)要(yao)是(shi)符合(he)要(yao)求(qiu)的(de)序列(lie)皆(jie)能(neng)被(bei)識(shi)別(bie)並(bing)且(qie)被(bei)正確(que)地(di)切(qie)割（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩(liang)個(ge)並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，仍然能(neng)被(bei)BsrFI識(shi)別(bie)並(bing)且(qie)切(qie)割）。