LightNing® FspI內切酶是(shi)壹系(xi)列(lie)經過基因工(gong)程(cheng)重組(zu)的(de)快速(su)限制(zhi)性內切酶，適用於(yu)質(zhi)粒 DNA、PCR 產物(wu)或基因組(zu) DNA 等的(de)快速(su)酶(mei)切。所(suo)有 LightNing® 快速(su)內切酶在(zai)通(tong)用的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具(ju)有優(you)良(liang)的(de)活(huo)性，能(neng)夠(gou)在(zai) 5~15 分(fen)鐘(zhong)內完成酶切。

LightNing® FspI內切酶組(zu)成

特(te)性(xing)和(he)用法

LightNing® FspI內切酶，可(ke)在(zai)5~15 min內完成反應

u建(jian)議(yi)反(fan)應條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液；

37℃溫(wen)育；

參(can)照“DNA 快速(su)酶(mei)切流程"配制(zhi)反(fan)應體(ti)系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

不(bu)可(ke)熱(re)失(shi)活(huo)，請(qing)使用酚氯仿(fang)抽(chou)提(ti)或(huo)柱純化。

u甲(jia)基化敏感性

對(dui)於(yu)被 CpG 甲(jia)基化的(de) DNA，剪(jian)切(qie)可(ke)能(neng)受(shou)阻。

u儲(chu)運條(tiao)件(jian)

-20℃

相(xiang)關(guan)問答(da)

Q:為(wei)什麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中加入(ru)HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在(zai)反應過(guo)程(cheng)中需(xu)要HSA的(de)參與(yu)，我(wo)們(men)在CutOne® Buffer中添加(jia)了HSA，避(bi)免反應中額(e)外(wai)添(tian)加(jia)組(zu)分(fen)，使得(de)酶切(qie)反(fan)應更加便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添加(jia)對(dui)於(yu)雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限制(zhi)性內切酶的(de)功(gong)能(neng)會(hui)產(chan)生(sheng)什麽(me)樣(yang)的(de)影(ying)響？

A:在(zai)我(wo)們(men)的(de)測試(shi)中未曾發現HSA對(dui)於(yu)雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限制(zhi)性內切酶的(de)功(gong)能(neng)有任何(he)影(ying)響。在有些(xie)情(qing)況下，對(dui)於(yu)部分(fen)的(de)酶切(qie)反(fan)應(ying)有促進(jin)作(zuo)用。

Q:我(wo)需(xu)要嚴格遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶切(qie)時間嗎(ma)？能(neng)夠(gou)延(yan)長(chang)反應(ying)時間嗎(ma)？

A:雷(lei)霆(ting)系(xi)列(lie)限制(zhi)性內切酶經過改(gai)造(zao)可(ke)以將酶(mei)切時間縮短至5~15 min。同(tong)樣(yang)也消除了限制(zhi)性內切酶的(de)星活(huo)性（長(chang)時間反應造(zao)成的(de)非特(te)異(yi)性(xing)消(xiao)化），在(zai)說明書中告知(zhi)的(de)星活(huo)性出(chu)現的(de)時間範圍內可以適當(dang)延(yan)長(chang)反應(ying)時間。

Q:我(wo)什麽(me)時候應當(dang)考慮星活(huo)性對(dui)於(yu)酶切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響？

A:如(ru)果額(e)外(wai)的(de)酶切(qie)條(tiao)帶(dai)對於(yu)實驗(yan)結果會產生(sheng)影(ying)響時我們(men)應當(dang)考慮星活(huo)性對(dui)於(yu)酶切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響。例如：進(jin)行基因型(xing)、突(tu)變(bian)型分(fen)析或(huo)克(ke)隆(long)時我們(men)應當(dang)避(bi)免星活(huo)性的(de)產生(sheng)。避免星活(huo)性的(de)有效(xiao)方法：適當(dang)擴(kuo)大(da)反應體(ti)積(ji)（較小的(de)反應(ying)體(ti)積(ji)容(rong)易造(zao)成甘油(you)體(ti)積(ji)達(da)到或(huo)超(chao)過(guo)總反應體(ti)積(ji)的(de)5%）；不(bu)進(jin)行超(chao)長(chang)時間孵育（過(guo)夜(ye)消(xiao)化極(ji)易(yi)產生(sheng)星活(huo)性）。

Q:有哪(na)些(xie)關(guan)鍵因素(su)會導(dao)致星活(huo)性？

A:長(chang)時間孵育、過(guo)量的(de)酶、高(gao)甘(gan)油(you)含(han)量(liang)（通(tong)常(chang)高於(yu)5%）、較小的(de)反應(ying)體(ti)系(xi)等因素(su)都會(hui)導(dao)致星活(huo)性的(de)產生(sheng)。

Q:未(wei)經純化的(de)PCR產(chan)物(wu)直(zhi)接(jie)酶(mei)切(qie)要怎(zen)樣(yang)設(she)定體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)推(tui)薦由(you)這(zhe)些(xie)內容(rong)組成：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的(de)限制(zhi)性內切酶、ddH2O補(bu)齊到30 μl。酶(mei)的(de)用量根(gen)據PCR產(chan)物(wu)的(de)濃度(du)而(er)定(ding)，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液的(de)原因是(shi)PCR反(fan)應(ying)中存在(zai)對應的(de)鹽離(li)子(zi)和(he)金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)，適當(dang)減(jian)少反應緩(huan)沖(chong)液的(de)用量以(yi)保(bao)證(zheng)最終反應(ying)體(ti)系(xi)中的(de)環境適宜(yi)限制(zhi)性內切酶發(fa)揮(hui)功(gong)能(neng)。

Q:限制(zhi)性內切酶簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別位點壹定是(shi)回(hui)文的(de)嗎(ma)？

A:大(da)多(duo)數二(er)型(xing)限制(zhi)性內切酶的(de)識(shi)別序(xu)列是(shi)回(hui)文的(de)，而且(qie)是(shi)特定(ding)的(de)堿基序(xu)列。然而有些(xie)限制(zhi)性內切酶具(ju)有簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別位點，也就(jiu)是(shi)說識(shi)別位點中有壹(yi)個(ge)或以上的(de)堿基對是(shi)非特(te)異(yi)的(de)（例如：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於(yu)這樣(yang)的(de)具有簡(jian)並(bing)性(xing)識(shi)別位點的(de)限制(zhi)性內切酶，只(zhi)要是(shi)符合(he)要求的(de)序(xu)列皆能(neng)被識(shi)別並(bing)且(qie)被正(zheng)確(que)地切(qie)割(ge)（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其中兩(liang)個並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文的(de)，仍然(ran)能(neng)被BsrFI識(shi)別並(bing)且(qie)切(qie)割(ge)）。