LightNing® FokI內(nei)切(qie)酶是(shi)壹(yi)系列經過(guo)基(ji)因工(gong)程(cheng)重組(zu)的快(kuai)速限制性內切(qie)酶，適(shi)用(yong)於質粒 DNA、PCR 產(chan)物或基(ji)因(yin)組 DNA 等(deng)的(de)快(kuai)速酶切(qie)。所有(you) LightNing® 快(kuai)速內切(qie)酶在通(tong)用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具有(you)優良(liang)的(de)活(huo)性，能夠在 5~15 分(fen)鐘(zhong)內完成酶切(qie)。

LightNing® FokI內切(qie)酶組成

特(te)性和用(yong)法

LightNing® FokI內切(qie)酶，可(ke)在5~15 min內完成反應(ying)

u建議反應(ying)條件

1× CutOne®緩沖(chong)液(ye)；

37℃溫育(yu)；

參照“DNA 快(kuai)速酶切(qie)流(liu)程(cheng)"配制反應(ying)體系。

u失活(huo)條件

80℃溫育(yu)20 min。

u甲(jia)基化(hua)敏感性

對於(yu)被 Dcm 甲(jia)基化(hua)的 DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻(zu)。

對於(yu)被 CpG 甲(jia)基化(hua)的 DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻(zu)。

對於(yu)被 EcoBI 甲(jia)基化(hua)的 DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻(zu)。

u儲(chu)運(yun)條件

-20℃

相關問答

Q:為(wei)什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中(zhong)加入(ru)HSA？

A:壹些酶在反應(ying)過程(cheng)中(zhong)需(xu)要(yao)HSA的參與，我們在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添加(jia)了(le)HSA，避(bi)免反應(ying)中(zhong)額外(wai)添(tian)加(jia)組分(fen)，使(shi)得酶切(qie)反應(ying)更加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添(tian)加(jia)對於(yu)雷霆系列限制性內切(qie)酶的功(gong)能會產(chan)生什(shen)麽(me)樣的影響？

A:在我們的(de)測試中(zhong)未曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於(yu)雷霆系列限制性內切(qie)酶的功(gong)能有(you)任何(he)影響。在有(you)些情況下，對於(yu)部(bu)分(fen)的(de)酶切(qie)反應(ying)有(you)促進(jin)作用(yong)。

Q:我需(xu)要(yao)嚴格遵守5~15 min的酶切(qie)時(shi)間(jian)嗎？能夠延長反應(ying)時間(jian)嗎？

A:雷霆系列限制性內切(qie)酶經過(guo)改(gai)造(zao)可(ke)以(yi)將(jiang)酶切(qie)時(shi)間(jian)縮短(duan)至(zhi)5~15 min。同樣也(ye)消(xiao)除(chu)了限(xian)制性內切(qie)酶的星活(huo)性（長時(shi)間反應(ying)造(zao)成的非(fei)特(te)異(yi)性消(xiao)化(hua)），在說(shuo)明書(shu)中(zhong)告知的星活(huo)性出(chu)現的(de)時間(jian)範(fan)圍內(nei)可(ke)以(yi)適(shi)當延長反應(ying)時間(jian)。

Q:我什(shen)麽(me)時候(hou)應(ying)當考慮星活(huo)性對於(yu)酶切(qie)反應(ying)的影響？

A:如(ru)果額外(wai)的酶切(qie)條帶(dai)對於(yu)實驗結(jie)果會產(chan)生影響時我們應(ying)當考慮星活(huo)性對於(yu)酶切(qie)反應(ying)的影響。例如(ru)：進行基因(yin)型、突變型(xing)分(fen)析(xi)或克(ke)隆(long)時我們應(ying)當避(bi)免星活(huo)性的產(chan)生。避(bi)免星活(huo)性的有(you)效方法：適(shi)當擴(kuo)大(da)反應(ying)體積（較小(xiao)的(de)反應(ying)體積容(rong)易(yi)造(zao)成甘油體積達(da)到(dao)或超(chao)過(guo)總(zong)反應(ying)體積的(de)5%）；不進行(xing)超長(chang)時(shi)間(jian)孵(fu)育(yu)（過(guo)夜(ye)消(xiao)化(hua)極易(yi)產(chan)生星活(huo)性）。

Q:有(you)哪些關鍵因素(su)會(hui)導(dao)致星活(huo)性？

A:長時(shi)間(jian)孵(fu)育(yu)、過(guo)量的酶、高甘油含(han)量（通常高於(yu)5%）、較小(xiao)的(de)反應(ying)體系等(deng)因(yin)素(su)都會導(dao)致星活(huo)性的產(chan)生。

Q:未經(jing)純(chun)化(hua)的PCR產(chan)物直(zhi)接酶切(qie)要(yao)怎(zen)樣設(she)定體系？

A:反應(ying)體系推薦由這些內容(rong)組(zu)成：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的限(xian)制性內切(qie)酶、ddH2O補齊(qi)到(dao)30 μl。酶的用(yong)量根據PCR產(chan)物的(de)濃度而定，只(zhi)加入(ru)2 μl反應(ying)緩沖(chong)液的(de)原因(yin)是(shi)PCR反應(ying)中(zhong)存在(zai)對應(ying)的鹽(yan)離(li)子和金(jin)屬(shu)離(li)子，適(shi)當減少(shao)反應(ying)緩沖(chong)液的(de)用(yong)量以(yi)保(bao)證(zheng)最終反應(ying)體系中(zhong)的環(huan)境(jing)適(shi)宜(yi)限制性內切(qie)酶發(fa)揮(hui)功能。

Q:限制性內切(qie)酶簡並性識別(bie)位(wei)點(dian)壹定是(shi)回(hui)文的嗎？

A:大(da)多數二(er)型(xing)限(xian)制性內切(qie)酶的識(shi)別(bie)序(xu)列是(shi)回(hui)文的，而且是(shi)特(te)定(ding)的堿基(ji)序(xu)列。然而有(you)些限制性內切(qie)酶具有(you)簡並性識別(bie)位(wei)點(dian)，也(ye)就(jiu)是(shi)說(shuo)識別(bie)位(wei)點(dian)中(zhong)有(you)壹個或以(yi)上(shang)的(de)堿基(ji)對是(shi)非(fei)特(te)異(yi)的（例如(ru)：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣的具有(you)簡並性識別(bie)位(wei)點(dian)的限制性內切(qie)酶，只(zhi)要是(shi)符合(he)要求的序(xu)列皆(jie)能被識別(bie)並且被正(zheng)確(que)地切(qie)割（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩個並不是(shi)回(hui)文的，仍(reng)然能被BsrFI識別(bie)並且切(qie)割）。