LightNing® HpaI內切(qie)酶(mei)是壹(yi)系(xi)列經(jing)過(guo)基因工程重組(zu)的快速(su)限(xian)制性內切(qie)酶(mei)，適用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物(wu)或(huo)基因組(zu) DNA 等(deng)的快速(su)酶(mei)切(qie)。所有(you) LightNing® 快速(su)內切(qie)酶(mei)在通(tong)用(yong)的 CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中都(dou)具有(you)優(you)良(liang)的活性(xing)，能夠(gou)在 5~15 分(fen)鐘(zhong)內完(wan)成(cheng)酶(mei)切。

LightNing® HpaI內切(qie)酶(mei)組成(cheng)

特(te)性(xing)和(he)用(yong)法

LightNing® HpaI內切(qie)酶(mei)，可在5~15 min內完(wan)成(cheng)反(fan)應

u建(jian)議反(fan)應條件(jian)

1× CutOne®緩沖液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照“DNA 快速(su)酶(mei)切(qie)流程"配制反(fan)應體(ti)系(xi)。

u失活條件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲基化敏(min)感性

對於(yu)被(bei) CpG 甲基化的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻(zu)，

對於(yu)被(bei) EcoKI 甲基化的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受(shou)阻(zu)。

u儲運(yun)條件(jian)

-20℃

相關問(wen)答(da)

Q:為(wei)什(shen)麽在CutOne® Buffer中加(jia)入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在反(fan)應過(guo)程中需(xu)要(yao)HSA的參與(yu)，我們在CutOne® Buffer中添(tian)加(jia)了(le)HSA，避免(mian)反(fan)應中(zhong)額外添(tian)加(jia)組(zu)分(fen)，使得(de)酶切(qie)反(fan)應更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添(tian)加(jia)對(dui)於(yu)雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制性內切(qie)酶(mei)的功能(neng)會產(chan)生(sheng)什(shen)麽樣的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在我們的(de)測試(shi)中未(wei)曾發(fa)現(xian)HSA對於(yu)雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制性內切(qie)酶(mei)的功能(neng)有(you)任(ren)何影(ying)響(xiang)。在有(you)些(xie)情況(kuang)下(xia)，對於(yu)部(bu)分的(de)酶(mei)切(qie)反(fan)應有(you)促(cu)進(jin)作(zuo)用(yong)。

Q:我需(xu)要(yao)嚴(yan)格遵(zun)守(shou)5~15 min的酶(mei)切(qie)時(shi)間(jian)嗎(ma)？能夠(gou)延長反(fan)應時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆系(xi)列限(xian)制性內切(qie)酶(mei)經(jing)過(guo)改造可以將(jiang)酶切時(shi)間(jian)縮(suo)短(duan)至5~15 min。同樣(yang)也消除(chu)了(le)限制性內切(qie)酶(mei)的星(xing)活性(xing)（長時(shi)間(jian)反(fan)應造成的非特(te)異(yi)性消化），在說(shuo)明書(shu)中(zhong)告(gao)知的(de)星(xing)活性(xing)出(chu)現(xian)的(de)時(shi)間(jian)範圍(wei)內可(ke)以適當延長反(fan)應時(shi)間(jian)。

Q:我什(shen)麽時(shi)候(hou)應(ying)當考慮(lv)星(xing)活性(xing)對於酶(mei)切反(fan)應的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如果(guo)額(e)外(wai)的(de)酶(mei)切條帶對(dui)於實驗結果(guo)會(hui)產(chan)生(sheng)影(ying)響(xiang)時(shi)我們應(ying)當考(kao)慮星(xing)活性(xing)對於酶(mei)切反(fan)應的(de)影(ying)響(xiang)。例如：進行(xing)基因型(xing)、突(tu)變型(xing)分析或(huo)克隆(long)時(shi)我們應(ying)當避(bi)免(mian)星(xing)活性(xing)的產(chan)生(sheng)。避(bi)免(mian)星(xing)活性(xing)的有(you)效(xiao)方法：適當擴(kuo)大反(fan)應體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的反(fan)應體(ti)積(ji)容(rong)易造成甘(gan)油(you)體(ti)積(ji)達(da)到或(huo)超過(guo)總反(fan)應體(ti)積(ji)的(de)5%）；不進行(xing)超長時(shi)間(jian)孵(fu)育(yu)（過(guo)夜消化極(ji)易產(chan)生(sheng)星(xing)活性(xing)）。

Q:有(you)哪(na)些關鍵因素會導致星(xing)活性(xing)？

A:長時(shi)間(jian)孵(fu)育(yu)、過(guo)量的(de)酶、高(gao)甘(gan)油(you)含量（通(tong)常高(gao)於(yu)5%）、較(jiao)小(xiao)的反(fan)應體(ti)系(xi)等(deng)因素都(dou)會導致星(xing)活性(xing)的產(chan)生(sheng)。

Q:未(wei)經(jing)純化的(de)PCR產(chan)物(wu)直(zhi)接(jie)酶切要(yao)怎(zen)樣設(she)定(ding)體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推(tui)薦(jian)由(you)這(zhe)些內容(rong)組成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的限制性內切(qie)酶(mei)、ddH2O補齊(qi)到30 μl。酶的(de)用(yong)量根(gen)據PCR產(chan)物(wu)的(de)濃(nong)度而(er)定(ding)，只加(jia)入2 μl反(fan)應緩沖液(ye)的原(yuan)因是(shi)PCR反(fan)應中(zhong)存在對(dui)應(ying)的鹽(yan)離(li)子和(he)金屬(shu)離(li)子，適當減少(shao)反(fan)應緩沖液(ye)的用(yong)量以保證最(zui)終(zhong)反(fan)應體(ti)系(xi)中的(de)環境(jing)適宜(yi)限(xian)制性內切(qie)酶(mei)發揮(hui)功能(neng)。

Q:限制性內切(qie)酶(mei)簡並性識別位(wei)點(dian)壹(yi)定(ding)是回文(wen)的嗎(ma)？

A:大多(duo)數(shu)二(er)型(xing)限制性內切(qie)酶(mei)的識別序列(lie)是(shi)回文(wen)的，而(er)且(qie)是特(te)定(ding)的堿(jian)基序列(lie)。然(ran)而有(you)些(xie)限制性內切(qie)酶(mei)具有(you)簡(jian)並性識別位(wei)點(dian)，也就是(shi)說(shuo)識別位(wei)點(dian)中有(you)壹(yi)個或(huo)以上(shang)的堿(jian)基對(dui)是(shi)非特(te)異(yi)的（例如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這(zhe)樣的具(ju)有(you)簡(jian)並性識別位(wei)點(dian)的限(xian)制性內切(qie)酶(mei)，只要(yao)是(shi)符合要(yao)求(qiu)的序列(lie)皆(jie)能被(bei)識別並且(qie)被正(zheng)確(que)地(di)切(qie)割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中兩(liang)個並不是回文(wen)的，仍(reng)然(ran)能(neng)被BsrFI識別並且(qie)切割(ge)）。