LightNing® EcoRI內切(qie)酶是(shi)壹(yi)系列(lie)經(jing)過基因(yin)工(gong)程(cheng)重(zhong)組的快(kuai)速(su)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，適(shi)用(yong)於質粒(li) DNA、PCR 產物或基因(yin)組 DNA 等的(de)快速(su)酶切(qie)。所有(you) LightNing® 快速(su)內切(qie)酶在(zai)通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有(you)優良的(de)活性，能(neng)夠在 5~15 分(fen)鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)酶切(qie)。

LightNing® EcoRI內切(qie)酶組成(cheng)

特性(xing)和用(yong)法(fa)

LightNing® EcoRI內切(qie)酶，可在5~15 min內完(wan)成(cheng)反應(ying)

u建(jian)議反應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩(huan)沖液；

37℃溫育(yu)；

參(can)照“DNA 快速(su)酶切(qie)流(liu)程(cheng)"配(pei)制(zhi)反(fan)應(ying)體(ti)系。

u失活條(tiao)件

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲(jia)基化(hua)敏(min)感性(xing)

對於被 CpG 對甲(jia)基化(hua)的(de) DNA，剪切(qie)可能(neng)受阻，

對於被 EcoBI 甲(jia)基化(hua)的(de) DNA，剪切(qie)可能(neng)受阻。

u儲運條(tiao)件

-20℃

相關(guan)問(wen)答

Q:為(wei)什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中(zhong)加入HSA？

A:壹些(xie)酶在(zai)反(fan)應(ying)過程(cheng)中(zhong)需(xu)要HSA的(de)參(can)與，我(wo)們(men)在(zai)CutOne® Buffer中添(tian)加了(le)HSA，避(bi)免(mian)反應(ying)中(zhong)額(e)外(wai)添(tian)加組分(fen)，使(shi)得(de)酶切(qie)反應(ying)更(geng)加便捷。

Q:HSA的添(tian)加對於雷霆系列(lie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)功能(neng)會產生(sheng)什麽(me)樣的影(ying)響(xiang)？

A:在(zai)我(wo)們(men)的(de)測(ce)試中未(wei)曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於雷霆系列(lie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)功能(neng)有任何(he)影(ying)響。在有些(xie)情況下，對於部(bu)分(fen)的(de)酶(mei)切(qie)反應(ying)有(you)促(cu)進作用。

Q:我(wo)需(xu)要嚴格(ge)遵守5~15 min的(de)酶切(qie)時間(jian)嗎？能(neng)夠延(yan)長(chang)反應(ying)時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆系列(lie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶經(jing)過改造可以(yi)將酶切(qie)時間(jian)縮短至5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消(xiao)除(chu)了(le)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)星活性（長(chang)時間反(fan)應(ying)造(zao)成(cheng)的非(fei)特異(yi)性(xing)消(xiao)化(hua)），在(zai)說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)告(gao)知(zhi)的星(xing)活性出現(xian)的(de)時(shi)間範(fan)圍(wei)內可以(yi)適(shi)當延(yan)長(chang)反應(ying)時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什(shen)麽(me)時候應(ying)當考(kao)慮(lv)星(xing)活性對於酶切(qie)反應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如(ru)果(guo)額(e)外(wai)的(de)酶切(qie)條(tiao)帶(dai)對於實驗結果(guo)會(hui)產生(sheng)影響時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當考(kao)慮(lv)星(xing)活性對於酶切(qie)反應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)。例如：進(jin)行(xing)基因(yin)型、突變型分(fen)析或克隆(long)時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當避(bi)免(mian)星活性的(de)產生(sheng)。避(bi)免(mian)星活性的(de)有效(xiao)方法(fa)：適(shi)當擴(kuo)大(da)反應(ying)體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的(de)反應(ying)體(ti)積(ji)容易造(zao)成(cheng)甘油(you)體積(ji)達(da)到或超(chao)過總(zong)反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)的(de)5%）；不(bu)進行(xing)超長(chang)時間孵育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化(hua)極(ji)易(yi)產生(sheng)星活性）。

Q:有(you)哪(na)些關(guan)鍵因(yin)素會(hui)導致(zhi)星(xing)活性？

A:長(chang)時間孵育(yu)、過量的酶、高(gao)甘油(you)含(han)量(liang)（通常高於5%）、較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體(ti)系等因(yin)素都(dou)會導(dao)致(zhi)星(xing)活性的(de)產生(sheng)。

Q:未經(jing)純(chun)化的(de)PCR產物直(zhi)接(jie)酶(mei)切(qie)要怎樣設定(ding)體(ti)系？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系推薦由(you)這(zhe)些(xie)內(nei)容組成(cheng)：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶、ddH2O補(bu)齊(qi)到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用量(liang)根據(ju)PCR產物的濃(nong)度而(er)定(ding)，只(zhi)加(jia)入2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖液的(de)原(yuan)因(yin)是(shi)PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存(cun)在(zai)對應(ying)的(de)鹽(yan)離(li)子和(he)金(jin)屬離(li)子，適(shi)當減(jian)少(shao)反應(ying)緩(huan)沖液的(de)用(yong)量以(yi)保證最(zui)終(zhong)反應(ying)體(ti)系中的(de)環境適(shi)宜(yi)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶發(fa)揮功能。

Q:限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶簡並(bing)性識(shi)別(bie)位(wei)點壹定(ding)是(shi)回(hui)文的嗎(ma)？

A:大(da)多數二(er)型限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)識別(bie)序列(lie)是(shi)回(hui)文的，而(er)且(qie)是(shi)特定(ding)的(de)堿(jian)基序(xu)列(lie)。然(ran)而(er)有(you)些(xie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶具(ju)有簡並(bing)性識(shi)別(bie)位(wei)點，也就(jiu)是(shi)說(shuo)識(shi)別(bie)位(wei)點中(zhong)有壹個(ge)或以(yi)上(shang)的堿(jian)基對是(shi)非(fei)特異(yi)的(de)（例(li)如(ru)：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這(zhe)樣(yang)的(de)具(ju)有(you)簡並(bing)性識(shi)別(bie)位(wei)點的限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，只(zhi)要是(shi)符(fu)合(he)要求(qiu)的序(xu)列(lie)皆(jie)能(neng)被識別(bie)並(bing)且(qie)被正(zheng)確地(di)切(qie)割（例(li)如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中兩個(ge)並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文的，仍(reng)然(ran)能被BsrFI識(shi)別並(bing)且(qie)切(qie)割）。