LightNing® EagI內切(qie)酶是(shi)壹(yi)系列經(jing)過基(ji)因(yin)工(gong)程重(zhong)組(zu)的快速(su)限(xian)制性(xing)內(nei)切(qie)酶，適(shi)用於質粒(li) DNA、PCR 產(chan)物(wu)或(huo)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等(deng)的(de)快(kuai)速(su)酶切(qie)。所有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內(nei)切(qie)酶在(zai)通用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具(ju)有(you)優(you)良的(de)活性，能夠在(zai) 5~15 分鐘(zhong)內(nei)完成(cheng)酶切(qie)。

LightNing® EagI內切(qie)酶組成(cheng)

特性和用法(fa)

LightNing® EagI內切(qie)酶，可(ke)在(zai)5~15 min內完成(cheng)反應(ying)

u建(jian)議反(fan)應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩沖(chong)液；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照(zhao)“DNA 快速(su)酶切(qie)流(liu)程"配制(zhi)反(fan)應(ying)體系。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲基(ji)化敏感性(xing)

對(dui)於被 CpG 甲基(ji)化的 DNA，剪(jian)切(qie)可(ke)能(neng)受(shou)阻。

u儲運(yun)條件(jian)

-20℃

相關(guan)問答

Q:為(wei)什(shen)麽在(zai)CutOne® Buffer中加(jia)入HSA？

A:壹些酶在(zai)反應(ying)過程中需(xu)要(yao)HSA的參與(yu)，我(wo)們在(zai)CutOne® Buffer中添加(jia)了HSA，避免(mian)反應中(zhong)額(e)外添加(jia)組(zu)分，使得酶切(qie)反(fan)應(ying)更加(jia)便捷。

Q:HSA的添加(jia)對(dui)於雷(lei)霆系列限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的功(gong)能會產生(sheng)什(shen)麽樣的影響(xiang)？

A:在(zai)我(wo)們的(de)測試中(zhong)未曾發(fa)現(xian)HSA對(dui)於雷(lei)霆系列限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的功(gong)能有(you)任(ren)何(he)影響(xiang)。在(zai)有(you)些情況(kuang)下(xia)，對(dui)於部(bu)分的酶切(qie)反(fan)應(ying)有(you)促(cu)進(jin)作用。

Q:我(wo)需(xu)要(yao)嚴格(ge)遵守(shou)5~15 min的酶切(qie)時(shi)間(jian)嗎(ma)？能夠延長(chang)反應時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷(lei)霆系列限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶經(jing)過改(gai)造可(ke)以(yi)將酶切(qie)時(shi)間(jian)縮(suo)短(duan)至5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消(xiao)除(chu)了限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的星(xing)活性（長(chang)時間(jian)反應(ying)造成(cheng)的非特異(yi)性(xing)消(xiao)化），在(zai)說(shuo)明書中告知(zhi)的星(xing)活(huo)性出(chu)現的時(shi)間(jian)範圍內可(ke)以(yi)適(shi)當延長(chang)反應時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什(shen)麽時候應當(dang)考慮星活(huo)性對(dui)於酶切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影響(xiang)？

A:如果額(e)外的酶切(qie)條(tiao)帶(dai)對(dui)於實驗結果(guo)會產生(sheng)影(ying)響(xiang)時(shi)我(wo)們應(ying)當考慮星活(huo)性對(dui)於酶切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影響(xiang)。例如：進行(xing)基(ji)因(yin)型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析或克(ke)隆(long)時我(wo)們應(ying)當避免星(xing)活(huo)性(xing)的產(chan)生(sheng)。避免(mian)星活(huo)性(xing)的(de)有(you)效方法(fa)：適(shi)當擴大反應體積(ji)（較(jiao)小(xiao)的反(fan)應(ying)體積(ji)容(rong)易造成(cheng)甘油體積(ji)達到或(huo)超過總反應(ying)體積(ji)的(de)5%）；不進(jin)行超長(chang)時間(jian)孵育(yu)（過夜消(xiao)化極(ji)易產(chan)生星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪(na)些關鍵因(yin)素(su)會導致(zhi)星(xing)活性(xing)？

A:長(chang)時間(jian)孵育(yu)、過量(liang)的(de)酶、高(gao)甘(gan)油含(han)量(liang)（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較小(xiao)的反(fan)應(ying)體系等(deng)因(yin)素(su)都(dou)會導致(zhi)星(xing)活性(xing)的產(chan)生。

Q:未經(jing)純(chun)化的PCR產物(wu)直(zhi)接酶切(qie)要(yao)怎(zen)樣設定(ding)體系？

A:反應(ying)體系推薦(jian)由(you)這(zhe)些內容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的限制(zhi)性(xing)內(nei)切(qie)酶、ddH2O補齊(qi)到30 μl。酶的用(yong)量(liang)根據(ju)PCR產物(wu)的(de)濃(nong)度(du)而定(ding)，只(zhi)加(jia)入2 μl反應(ying)緩沖(chong)液的原(yuan)因(yin)是(shi)PCR反應(ying)中存(cun)在(zai)對(dui)應的(de)鹽離(li)子(zi)和金屬(shu)離(li)子(zi)，適(shi)當減(jian)少反應緩沖(chong)液的用(yong)量(liang)以(yi)保證(zheng)最(zui)終(zhong)反應體系中(zhong)的環境(jing)適(shi)宜限制(zhi)性內切(qie)酶發揮功(gong)能。

Q:限制(zhi)性內切(qie)酶簡並(bing)性(xing)識別(bie)位點壹定是(shi)回(hui)文的(de)嗎(ma)？

A:大多(duo)數二(er)型(xing)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶的識別(bie)序列是(shi)回(hui)文的(de)，而且是(shi)特定的(de)堿基(ji)序列。然(ran)而有(you)些限制性(xing)內切(qie)酶具(ju)有(you)簡並(bing)性(xing)識別(bie)位點，也(ye)就是(shi)說(shuo)識別(bie)位點中有(you)壹(yi)個(ge)或以上的堿基(ji)對(dui)是(shi)非特異(yi)的(de)（例如：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣的(de)具(ju)有(you)簡並(bing)性(xing)識別(bie)位點的限制性內(nei)切(qie)酶，只(zhi)要(yao)是(shi)符(fu)合要(yao)求(qiu)的序列皆能被識別(bie)並(bing)且被正確(que)地切(qie)割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中兩個(ge)並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文的(de)，仍(reng)然能(neng)被BsrFI識別(bie)並(bing)且切(qie)割）。