LightNing® DraIII內切(qie)酶是壹(yi)系(xi)列(lie)經(jing)過(guo)基因工(gong)程(cheng)重(zhong)組(zu)的快(kuai)速(su)限(xian)制性(xing)內切(qie)酶，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產物(wu)或基(ji)因組(zu) DNA 等(deng)的快(kuai)速(su)酶切(qie)。所(suo)有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內切(qie)酶在(zai)通(tong)用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有(you)優良的活(huo)性(xing)，能(neng)夠在(zai) 5~15 分鐘(zhong)內完成(cheng)酶切(qie)。

LightNing® DraIII內切(qie)酶組(zu)成(cheng)

特(te)性(xing)和用(yong)法

LightNing® DraIII內切(qie)酶，可在(zai)5~15 min內完成(cheng)反應(ying)

u建議反應(ying)條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩沖(chong)液；

37℃溫(wen)育(yu)；

參(can)照“DNA 快(kuai)速(su)酶切(qie)流程(cheng)"配(pei)制反應(ying)體系(xi)。

u失活(huo)條(tiao)件(jian)

不(bu)可熱(re)失(shi)活(huo)，請(qing)使用(yong)酚氯仿抽(chou)提(ti)或柱純(chun)化(hua)。

u甲(jia)基(ji)化敏(min)感(gan)性

對於被 CpG 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切(qie)可能(neng)受(shou)阻(zu)。

對於被 EcoKI 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切(qie)可能(neng)受(shou)阻(zu)。

對於被 EcoBI 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切(qie)可能(neng)受(shou)阻(zu)。

u儲運條(tiao)件(jian)

-20℃

相(xiang)關(guan)問答(da)

Q:為(wei)什(shen)麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中加入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶在(zai)反應(ying)過(guo)程中(zhong)需(xu)要HSA的參(can)與(yu)，我(wo)們在(zai)CutOne® Buffer中添加了HSA，避免(mian)反應(ying)中額外添加組分，使得(de)酶切(qie)反應(ying)更加便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添加對於雷(lei)霆系(xi)列(lie)限(xian)制性(xing)內切(qie)酶的功能(neng)會(hui)產生(sheng)什(shen)麽(me)樣(yang)的影響(xiang)？

A:在(zai)我(wo)們的測(ce)試(shi)中未曾(zeng)發現(xian)HSA對於雷(lei)霆系(xi)列(lie)限(xian)制性(xing)內切(qie)酶的功能(neng)有(you)任何(he)影響(xiang)。在(zai)有(you)些(xie)情(qing)況下，對於部(bu)分的酶切(qie)反應(ying)有(you)促(cu)進(jin)作用(yong)。

Q:我(wo)需(xu)要嚴格遵(zun)守5~15 min的酶切(qie)時間(jian)嗎(ma)？能(neng)夠延長反應(ying)時間(jian)嗎(ma)？

A:雷(lei)霆系(xi)列(lie)限(xian)制性(xing)內切(qie)酶經(jing)過(guo)改造可以(yi)將(jiang)酶切(qie)時間(jian)縮(suo)短(duan)至5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消除了(le)限(xian)制性(xing)內切(qie)酶的星(xing)活(huo)性(xing)（長(chang)時(shi)間(jian)反應(ying)造成(cheng)的非特異(yi)性消化），在(zai)說(shuo)明(ming)書中告(gao)知(zhi)的星(xing)活(huo)性(xing)出現(xian)的時間(jian)範圍(wei)內可以(yi)適(shi)當(dang)延長反應(ying)時間(jian)。

Q:我(wo)什(shen)麽(me)時(shi)候(hou)應(ying)當考慮星(xing)活(huo)性(xing)對於酶切(qie)反應(ying)的影響(xiang)？

A:如(ru)果額外的酶切(qie)條(tiao)帶(dai)對於實(shi)驗(yan)結(jie)果會產生(sheng)影(ying)響(xiang)時(shi)我(wo)們應(ying)當考慮星(xing)活(huo)性(xing)對於酶切(qie)反應(ying)的影響(xiang)。例如：進行基因型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析或克隆(long)時(shi)我(wo)們應(ying)當避免(mian)星(xing)活(huo)性(xing)的產生(sheng)。避(bi)免(mian)星(xing)活(huo)性(xing)的有(you)效方法(fa)：適(shi)當(dang)擴(kuo)大(da)反應(ying)體積（較(jiao)小(xiao)的反應(ying)體積容易造成(cheng)甘(gan)油體(ti)積達(da)到(dao)或超(chao)過(guo)總反應(ying)體積的5%）；不(bu)進(jin)行超長時間(jian)孵育(yu)（過(guo)夜(ye)消化極(ji)易產生(sheng)星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪(na)些(xie)關(guan)鍵因素(su)會(hui)導致(zhi)星(xing)活(huo)性(xing)？

A:長時間(jian)孵育(yu)、過(guo)量的酶、高(gao)甘(gan)油含(han)量(liang)（通(tong)常(chang)高於5%）、較(jiao)小(xiao)的反應(ying)體系(xi)等(deng)因素(su)都(dou)會導致(zhi)星(xing)活(huo)性(xing)的產生(sheng)。

Q:未經(jing)純化(hua)的PCR產物(wu)直(zhi)接酶切(qie)要怎樣設定(ding)體系(xi)？

A:反應(ying)體系(xi)推(tui)薦(jian)由(you)這(zhe)些(xie)內容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的限(xian)制性(xing)內切(qie)酶、ddH2O補(bu)齊到(dao)30 μl。酶的用量(liang)根(gen)據PCR產物(wu)的濃度而(er)定(ding)，只(zhi)加入2 μl反應(ying)緩沖(chong)液的原因是PCR反應(ying)中存在(zai)對應(ying)的鹽(yan)離子(zi)和金屬(shu)離(li)子，適當減少反應(ying)緩沖(chong)液的用量(liang)以(yi)保證最(zui)終(zhong)反應(ying)體系(xi)中(zhong)的環(huan)境適(shi)宜限(xian)制性(xing)內切(qie)酶發揮功能(neng)。

Q:限(xian)制性(xing)內切(qie)酶簡並(bing)性(xing)識別位點(dian)壹(yi)定(ding)是回文(wen)的嗎(ma)？

A:大(da)多(duo)數二(er)型限(xian)制性(xing)內切(qie)酶的識別序(xu)列是回文(wen)的，而(er)且(qie)是特定的堿(jian)基序(xu)列。然(ran)而(er)有(you)些(xie)限(xian)制性(xing)內切(qie)酶具(ju)有(you)簡並(bing)性(xing)識別位點(dian)，也(ye)就(jiu)是說(shuo)識別位點(dian)中有(you)壹(yi)個或(huo)以(yi)上(shang)的堿(jian)基對是非特異(yi)的（例如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這(zhe)樣(yang)的具有(you)簡並(bing)性(xing)識別位點(dian)的限(xian)制性(xing)內切(qie)酶，只(zhi)要是符合要求的序(xu)列皆(jie)能(neng)被識別並(bing)且(qie)被正(zheng)確(que)地切(qie)割(ge)（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中兩(liang)個並(bing)不(bu)是回文(wen)的，仍然(ran)能(neng)被BsrFI識別並(bing)且(qie)切(qie)割(ge)）。