LightNing® DraI內切酶(mei)是(shi)壹(yi)系(xi)列經過(guo)基(ji)因(yin)工程(cheng)重(zhong)組(zu)的(de)快(kuai)速(su)限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒 DNA、PCR 產物或基(ji)因(yin)組 DNA 等的(de)快(kuai)速(su)酶(mei)切。所有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內切酶(mei)在通用(yong)的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中都(dou)具有(you)優(you)良(liang)的(de)活(huo)性，能(neng)夠(gou)在 5~15 分(fen)鐘(zhong)內完成酶(mei)切。

LightNing® DraI內切酶(mei)組成(cheng)

特性和(he)用(yong)法

LightNing® DraI內切酶(mei)，可(ke)在(zai)5~15 min內完成反(fan)應

u建議(yi)反應條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫育(yu)；

參照“DNA 快(kuai)速(su)酶(mei)切流(liu)程(cheng)"配(pei)制(zhi)反應體系(xi)。

u失(shi)活條(tiao)件(jian)

80℃溫育(yu)20 min。

u甲基(ji)化敏感性

對於(yu)被(bei) EcoKI 甲基(ji)化的(de) DNA，剪(jian)切可(ke)能(neng)受(shou)阻(zu)。

u儲運(yun)條件(jian)

-20℃

相關(guan)問(wen)答(da)

Q:為什(shen)麽在CutOne® Buffer中加(jia)入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在反(fan)應過(guo)程(cheng)中需要(yao)HSA的(de)參與(yu)，我們(men)在(zai)CutOne® Buffer中添(tian)加(jia)了(le)HSA，避免反應中額(e)外添(tian)加(jia)組分(fen)，使得酶(mei)切反(fan)應更加(jia)便捷。

Q:HSA的(de)添(tian)加(jia)對於雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)的(de)功(gong)能會產(chan)生(sheng)什(shen)麽樣的(de)影(ying)響？

A:在我們(men)的(de)測(ce)試(shi)中未(wei)曾發(fa)現(xian)HSA對於(yu)雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)的(de)功(gong)能有(you)任(ren)何(he)影(ying)響(xiang)。在(zai)有(you)些(xie)情(qing)況(kuang)下，對(dui)於(yu)部分(fen)的(de)酶(mei)切反(fan)應有(you)促(cu)進(jin)作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴格遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶(mei)切時(shi)間嗎？能夠(gou)延長反應時間嗎？

A:雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)經過(guo)改(gai)造(zao)可(ke)以(yi)將酶(mei)切時(shi)間縮短(duan)至5~15 min。同樣也(ye)消(xiao)除了(le)限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)的(de)星(xing)活(huo)性（長時間反應造成的(de)非特異性消(xiao)化），在(zai)說(shuo)明書中告(gao)知(zhi)的(de)星(xing)活(huo)性出(chu)現的(de)時(shi)間範(fan)圍內可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)延(yan)長反應時間。

Q:我什(shen)麽時候(hou)應當(dang)考(kao)慮星(xing)活(huo)性對(dui)於酶(mei)切反(fan)應的(de)影(ying)響？

A:如(ru)果(guo)額(e)外的(de)酶(mei)切條(tiao)帶對(dui)於(yu)實驗(yan)結果(guo)會產(chan)生(sheng)影響(xiang)時我們(men)應當(dang)考(kao)慮星(xing)活(huo)性對(dui)於酶(mei)切反(fan)應的(de)影(ying)響。例如(ru)：進行基(ji)因(yin)型、突(tu)變(bian)型(xing)分(fen)析(xi)或(huo)克隆(long)時我們(men)應當(dang)避免星(xing)活(huo)性的(de)產(chan)生(sheng)。避免星(xing)活(huo)性的(de)有(you)效方(fang)法(fa)：適(shi)當(dang)擴(kuo)大(da)反應體積（較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應體積容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)甘(gan)油(you)體積達(da)到(dao)或超(chao)過(guo)總(zong)反(fan)應體積的(de)5%）；不進(jin)行(xing)超(chao)長時間孵育（過(guo)夜(ye)消(xiao)化極易(yi)產(chan)生(sheng)星(xing)活(huo)性）。

Q:有(you)哪(na)些(xie)關(guan)鍵(jian)因(yin)素會導(dao)致(zhi)星(xing)活(huo)性？

A:長時間孵育、過(guo)量(liang)的(de)酶(mei)、高(gao)甘(gan)油(you)含(han)量(liang)（通常(chang)高(gao)於(yu)5%）、較小(xiao)的(de)反(fan)應體系(xi)等因(yin)素都(dou)會導(dao)致(zhi)星(xing)活(huo)性的(de)產(chan)生(sheng)。

Q:未(wei)經純(chun)化的(de)PCR產物(wu)直(zhi)接(jie)酶(mei)切要(yao)怎(zen)樣設(she)定(ding)體系(xi)？

A:反應體系(xi)推(tui)薦由(you)這些內容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的(de)限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量根據(ju)PCR產物(wu)的(de)濃度(du)而定，只加(jia)入2 μl反應緩(huan)沖液(ye)的(de)原因(yin)是(shi)PCR反應中存在(zai)對應的(de)鹽(yan)離子(zi)和金(jin)屬離子(zi)，適(shi)當(dang)減(jian)少(shao)反應緩(huan)沖液(ye)的(de)用(yong)量以(yi)保證(zheng)最終反應體系(xi)中的(de)環(huan)境適(shi)宜(yi)限制(zhi)性內切酶(mei)發揮功(gong)能。

Q:限制(zhi)性內切酶(mei)簡並(bing)性識(shi)別位點(dian)壹(yi)定(ding)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)嗎(ma)？

A:大(da)多數二(er)型限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)的(de)識(shi)別序列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，而且是(shi)特(te)定(ding)的(de)堿(jian)基(ji)序列(lie)。然(ran)而有(you)些(xie)限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)具有(you)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)，也(ye)就(jiu)是(shi)說(shuo)識(shi)別位點(dian)中有(you)壹(yi)個(ge)或(huo)以(yi)上的(de)堿(jian)基(ji)對是(shi)非特異的(de)（例如(ru)：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣的(de)具有(you)簡(jian)並(bing)性識(shi)別位點(dian)的(de)限(xian)制(zhi)性內切酶(mei)，只要(yao)是(shi)符(fu)合要(yao)求(qiu)的(de)序(xu)列皆能被(bei)識(shi)別並且(qie)被(bei)正(zheng)確地切(qie)割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中兩(liang)個(ge)並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，仍(reng)然(ran)能被(bei)BsrFI識(shi)別並且(qie)切(qie)割）。