LightNing® EarI內(nei)切(qie)酶(mei)是壹系(xi)列(lie)經過(guo)基(ji)因工(gong)程(cheng)重組的(de)快速限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)，適用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或(huo)基(ji)因組 DNA 等的(de)快速酶切(qie)。所(suo)有(you) LightNing® 快速內(nei)切(qie)酶(mei)在通用(yong)的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具(ju)有(you)優良(liang)的(de)活性，能夠(gou)在 5~15 分鐘(zhong)內(nei)完(wan)成酶切(qie)。

LightNing® EarI內(nei)切(qie)酶(mei)組成

特性和用(yong)法

LightNing® EarI內(nei)切(qie)酶(mei)，可在5~15 min內(nei)完(wan)成反應

u建議(yi)反應條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照“DNA 快速酶切(qie)流程(cheng)"配制(zhi)反應體系(xi)。

u失活條件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲(jia)基化敏感性

對於被 CpG 對甲(jia)基化的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受阻(zu)。

u儲運條件(jian)

-20℃

相關問答

Q:為(wei)什麽在CutOne® Buffer中(zhong)加入HSA？

A:壹些酶(mei)在反應過(guo)程(cheng)中(zhong)需要HSA的(de)參與(yu)，我(wo)們在CutOne® Buffer中(zhong)添加了(le)HSA，避免反應中(zhong)額外添(tian)加組(zu)分(fen)，使(shi)得(de)酶(mei)切(qie)反應更加(jia)便(bian)捷。

Q:HSA的(de)添加(jia)對於雷霆系(xi)列(lie)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)的(de)功能會產生什麽樣的(de)影響？

A:在我(wo)們的(de)測試(shi)中(zhong)未(wei)曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於雷霆系(xi)列(lie)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)的(de)功能有(you)任何影響。在有(you)些情(qing)況下(xia)，對於部(bu)分(fen)的(de)酶切(qie)反應有(you)促進(jin)作(zuo)用(yong)。

Q:我(wo)需要嚴(yan)格(ge)遵守5~15 min的(de)酶切(qie)時(shi)間嗎？能夠(gou)延(yan)長反應時間(jian)嗎？

A:雷霆系(xi)列(lie)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)經過(guo)改(gai)造(zao)可以(yi)將(jiang)酶切(qie)時(shi)間縮短(duan)至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消除(chu)了(le)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)的(de)星(xing)活性（長時間反應造(zao)成的(de)非特異性消化），在說明(ming)書(shu)中(zhong)告知的(de)星(xing)活性出(chu)現(xian)的(de)時間(jian)範圍(wei)內(nei)可以(yi)適當(dang)延(yan)長反應時間(jian)。

Q:我(wo)什麽時候(hou)應當考(kao)慮星(xing)活性對於酶切(qie)反應的(de)影響？

A:如果(guo)額外的(de)酶切(qie)條帶(dai)對於實驗結(jie)果(guo)會產生影響時(shi)我(wo)們應當考(kao)慮星(xing)活性對於酶切(qie)反應的(de)影響。例(li)如：進(jin)行基(ji)因型、突(tu)變(bian)型(xing)分析(xi)或(huo)克(ke)隆(long)時我(wo)們應當避(bi)免星(xing)活性的(de)產生(sheng)。避(bi)免星(xing)活性的(de)有(you)效(xiao)方(fang)法：適(shi)當擴大反應體積(ji)（較(jiao)小的(de)反應體積(ji)容易(yi)造(zao)成甘(gan)油(you)體(ti)積(ji)達到或(huo)超(chao)過(guo)總(zong)反應體積(ji)的(de)5%）；不進行超(chao)長時間孵(fu)育(yu)（過(guo)夜消化極易(yi)產(chan)生星(xing)活性）。

Q:有(you)哪(na)些(xie)關(guan)鍵因素(su)會導致星(xing)活性？

A:長時間孵(fu)育(yu)、過(guo)量(liang)的(de)酶、高(gao)甘(gan)油(you)含(han)量(liang)（通常高(gao)於(yu)5%）、較(jiao)小的(de)反應體系(xi)等因素(su)都(dou)會導致星(xing)活性的(de)產生(sheng)。

Q:未(wei)經純(chun)化的(de)PCR產物直(zhi)接(jie)酶切(qie)要怎(zen)樣設定體系(xi)？

A:反應體系(xi)推(tui)薦(jian)由這些內(nei)容組(zu)成：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的(de)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)、ddH2O補齊到30 μl。酶的(de)用(yong)量(liang)根據PCR產物的(de)濃(nong)度(du)而(er)定，只加(jia)入(ru)2 μl反應緩(huan)沖液的(de)原因是PCR反應中(zhong)存在對應的(de)鹽(yan)離(li)子(zi)和(he)金(jin)屬離(li)子(zi)，適(shi)當減(jian)少反應緩(huan)沖液的(de)用(yong)量(liang)以(yi)保(bao)證(zheng)最(zui)終(zhong)反應體系(xi)中(zhong)的(de)環境(jing)適(shi)宜(yi)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)發揮功能。

Q:限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)簡並(bing)性識別(bie)位點(dian)壹定是回文(wen)的(de)嗎？

A:大多數(shu)二(er)型(xing)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)的(de)識別(bie)序列(lie)是回文(wen)的(de)，而且(qie)是特定的(de)堿基序(xu)列(lie)。然(ran)而(er)有(you)些限(xian)制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)具(ju)有(you)簡並(bing)性識別(bie)位點(dian)，也(ye)就是說識別(bie)位點(dian)中(zhong)有(you)壹個或(huo)以(yi)上(shang)的(de)堿基對是非特異的(de)（例(li)如：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這樣的(de)具(ju)有(you)簡並(bing)性識別(bie)位點(dian)的(de)限制(zhi)性內(nei)切(qie)酶(mei)，只要是符合要求(qiu)的(de)序列(lie)皆(jie)能(neng)被(bei)識(shi)別(bie)並(bing)且(qie)被正確地切(qie)割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩個並(bing)不(bu)是回文(wen)的(de)，仍然(ran)能(neng)被(bei)BsrFI識別(bie)並(bing)且(qie)切(qie)割(ge)）。