LightNing® BstBI內切酶是壹(yi)系(xi)列(lie)經(jing)過基(ji)因(yin)工程(cheng)重組(zu)的(de)快速限(xian)制性(xing)內切酶，適用(yong)於(yu)質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產物(wu)或(huo)基因(yin)組(zu) DNA 等(deng)的(de)快速酶切。所有(you) LightNing® 快速內切酶在(zai)通(tong)用(yong)的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有(you)優良(liang)的(de)活(huo)性(xing)，能(neng)夠(gou)在(zai) 5~15 分(fen)鐘(zhong)內完成酶切(qie)。

LightNing® BstBI內切酶組成(cheng)

特(te)性(xing)和(he)用法

LightNing® BstBI內切酶，可(ke)在(zai)5~15 min內完成反應(ying)

u建(jian)議反應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩沖液；

37℃溫(wen)育(yu)；

參(can)照“DNA 快速酶切流程(cheng)"配制反(fan)應(ying)體系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲基化敏(min)感性(xing)

對於被 CpG 甲基化的(de) DNA，剪切可能(neng)受(shou)阻(zu)，

對於被 EcoKI 甲基化的(de) DNA，剪切可能(neng)受(shou)阻(zu)。

u儲(chu)運(yun)條(tiao)件(jian)

-20℃

相(xiang)關問(wen)答(da)

Q:為(wei)什(shen)麽在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)加入(ru)HSA？

A:壹(yi)些酶(mei)在(zai)反(fan)應(ying)過程(cheng)中(zhong)需要(yao)HSA的(de)參(can)與(yu)，我們(men)在(zai)CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加了(le)HSA，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)中(zhong)額(e)外(wai)添(tian)加組(zu)分(fen)，使(shi)得酶(mei)切(qie)反應(ying)更加便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加對於雷霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性(xing)內切酶的(de)功(gong)能(neng)會(hui)產(chan)生(sheng)什(shen)麽樣(yang)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在(zai)我們(men)的(de)測(ce)試(shi)中(zhong)未曾發(fa)現HSA對於雷霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性(xing)內切酶的(de)功(gong)能(neng)有(you)任(ren)何影響(xiang)。在(zai)有(you)些情(qing)況下(xia)，對於部(bu)分(fen)的(de)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)有促(cu)進作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守5~15 min的(de)酶(mei)切(qie)時間(jian)嗎(ma)？能(neng)夠(gou)延(yan)長(chang)反應(ying)時間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆(ting)系(xi)列(lie)限(xian)制性(xing)內切酶經過改(gai)造(zao)可(ke)以將(jiang)酶切(qie)時間(jian)縮短(duan)至5~15 min。同(tong)樣也(ye)消除了(le)限(xian)制性(xing)內切酶的(de)星活(huo)性(xing)（長時間(jian)反應(ying)造(zao)成(cheng)的(de)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)消化），在(zai)說明書(shu)中(zhong)告(gao)知(zhi)的(de)星活(huo)性(xing)出現(xian)的(de)時間(jian)範(fan)圍(wei)內可以適當延(yan)長反(fan)應(ying)時間(jian)。

Q:我什(shen)麽時候應(ying)當考(kao)慮(lv)星活(huo)性(xing)對於酶切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如(ru)果(guo)額(e)外(wai)的(de)酶(mei)切(qie)條(tiao)帶(dai)對於實驗(yan)結果會(hui)產(chan)生(sheng)影(ying)響(xiang)時我們(men)應(ying)當考(kao)慮(lv)星活(huo)性(xing)對於酶切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)。例(li)如(ru)：進行(xing)基因(yin)型(xing)、突(tu)變(bian)型分(fen)析或(huo)克隆時我們(men)應(ying)當避(bi)免(mian)星活(huo)性(xing)的(de)產(chan)生(sheng)。避(bi)免(mian)星活(huo)性(xing)的(de)有(you)效(xiao)方(fang)法：適當擴(kuo)大反應(ying)體積（較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體積容易(yi)造(zao)成(cheng)甘(gan)油(you)體積達(da)到(dao)或(huo)超(chao)過總反應(ying)體積的(de)5%）；不(bu)進行(xing)超(chao)長(chang)時間(jian)孵育（過夜(ye)消化極(ji)易(yi)產生(sheng)星活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪些關(guan)鍵(jian)因(yin)素(su)會(hui)導(dao)致(zhi)星活(huo)性(xing)？

A:長(chang)時間(jian)孵育、過量(liang)的(de)酶(mei)、高甘(gan)油(you)含量(liang)（通常(chang)高於5%）、較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體系(xi)等因(yin)素(su)都(dou)會(hui)導(dao)致(zhi)星活(huo)性(xing)的(de)產(chan)生(sheng)。

Q:未經純(chun)化的(de)PCR產(chan)物(wu)直接酶切(qie)要(yao)怎(zen)樣設(she)定體系(xi)？

A:反(fan)應(ying)體系(xi)推薦(jian)由(you)這(zhe)些內容組成：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的(de)限(xian)制性(xing)內切酶、ddH2O補(bu)齊(qi)到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量(liang)根據(ju)PCR產(chan)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)而定，只(zhi)加入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩沖液的(de)原(yuan)因(yin)是(shi)PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存(cun)在(zai)對應(ying)的(de)鹽(yan)離子和(he)金屬(shu)離子，適(shi)當減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩沖液的(de)用(yong)量(liang)以保證(zheng)最(zui)終反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)的(de)環(huan)境(jing)適(shi)宜(yi)限(xian)制性(xing)內切酶發(fa)揮功(gong)能(neng)。

Q:限(xian)制性(xing)內切酶簡(jian)並(bing)性(xing)識別(bie)位點(dian)壹(yi)定是(shi)回(hui)文的(de)嗎(ma)？

A:大(da)多(duo)數二型限(xian)制性(xing)內切酶的(de)識別(bie)序(xu)列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，而且(qie)是特(te)定的(de)堿(jian)基(ji)序(xu)列(lie)。然而有(you)些限(xian)制性(xing)內切酶具有(you)簡(jian)並(bing)性(xing)識別(bie)位點(dian)，也(ye)就(jiu)是(shi)說識別(bie)位點(dian)中(zhong)有(you)壹(yi)個(ge)或(huo)以上的(de)堿(jian)基(ji)對是非特(te)異(yi)的(de)（例(li)如(ru)：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這(zhe)樣的(de)具有(you)簡(jian)並(bing)性(xing)識別(bie)位點(dian)的(de)限(xian)制性(xing)內切酶，只(zhi)要(yao)是(shi)符(fu)合要(yao)求的(de)序(xu)列(lie)皆(jie)能(neng)被(bei)識別(bie)並(bing)且(qie)被(bei)正確地(di)切(qie)割（例(li)如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩個(ge)並(bing)不(bu)是回文的(de)，仍然能(neng)被(bei)BsrFI識別(bie)並(bing)且(qie)切(qie)割）。