LightNing® BsrGI內切酶是(shi)壹系列(lie)經過基因工(gong)程(cheng)重組的快速限(xian)制性內(nei)切酶，適用於(yu)質粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或(huo)基因組 DNA 等的快速酶切。所(suo)有 LightNing® 快速內切酶(mei)在通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具有優良(liang)的活性，能夠(gou)在 5~15 分鐘(zhong)內(nei)完成酶切(qie)。

LightNing® BsrGI內切酶組成

特性和用法(fa)

LightNing® BsrGI內切酶，可在5~15 min內完成反(fan)應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條件

1× CutOne®緩沖(chong)液；

37℃溫育(yu)；

參(can)照“DNA 快速酶切流(liu)程(cheng)"配制反(fan)應(ying)體(ti)系。

u失活條件

80℃溫育(yu)20 min。

u儲運條件

-20℃

相關問(wen)答

Q:為(wei)什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中加(jia)入(ru)HSA？

A:壹些酶在反(fan)應(ying)過程(cheng)中需要(yao)HSA的參(can)與(yu)，我們(men)在CutOne® Buffer中添加(jia)了HSA，避免(mian)反(fan)應(ying)中額外(wai)添加(jia)組分，使(shi)得(de)酶切反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添加(jia)對於(yu)雷霆系列(lie)限(xian)制性內(nei)切酶的功能會(hui)產(chan)生什(shen)麽(me)樣的影響(xiang)？

A:在我們(men)的測試中未曾發(fa)現(xian)HSA對於(yu)雷霆系列(lie)限(xian)制性內(nei)切酶的功能有任何(he)影響(xiang)。在有些情況下(xia)，對於(yu)部(bu)分的酶切反(fan)應(ying)有促進作(zuo)用。

Q:我需要嚴(yan)格遵(zun)守(shou)5~15 min的酶切時間(jian)嗎(ma)？能夠(gou)延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆系列(lie)限(xian)制性內(nei)切酶經(jing)過改造可以將(jiang)酶切(qie)時間(jian)縮(suo)短(duan)至5~15 min。同樣也消(xiao)除(chu)了限(xian)制性內(nei)切酶的星(xing)活性（長(chang)時間(jian)反(fan)應(ying)造成的非特異(yi)性消(xiao)化），在說明(ming)書中告知的星(xing)活性出(chu)現的時間(jian)範圍內可以適當延長(chang)反(fan)應(ying)時間(jian)。

Q:我什(shen)麽(me)時候(hou)應(ying)當考慮星(xing)活性對於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的影響(xiang)？

A:如果(guo)額(e)外(wai)的酶切條帶(dai)對於(yu)實(shi)驗結果(guo)會產(chan)生影(ying)響(xiang)時我們(men)應(ying)當考慮星(xing)活性對於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的影響(xiang)。例(li)如：進(jin)行基因型、突(tu)變型分析(xi)或克(ke)隆(long)時我們(men)應(ying)當避免(mian)星(xing)活性的產(chan)生。避免(mian)星(xing)活性的有效(xiao)方(fang)法(fa)：適當擴(kuo)大反(fan)應(ying)體(ti)積（較小的反(fan)應(ying)體(ti)積容易(yi)造成甘(gan)油(you)體(ti)積達(da)到(dao)或超過總反(fan)應(ying)體(ti)積的5%）；不(bu)進(jin)行超長(chang)時間(jian)孵(fu)育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化極(ji)易產(chan)生星(xing)活性）。

Q:有哪些(xie)關鍵因素會(hui)導(dao)致星(xing)活性？

A:長(chang)時間(jian)孵(fu)育(yu)、過量(liang)的酶、高甘(gan)油(you)含(han)量(liang)（通(tong)常高(gao)於(yu)5%）、較小的反(fan)應(ying)體(ti)系等(deng)因素都(dou)會(hui)導致星(xing)活性的產(chan)生。

Q:未經純(chun)化(hua)的PCR產(chan)物直接酶切(qie)要怎(zen)樣設(she)定體(ti)系？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系推(tui)薦(jian)由(you)這些(xie)內容組成：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的限(xian)制性內(nei)切酶、ddH2O補齊(qi)到(dao)30 μl。酶的用量(liang)根(gen)據PCR產(chan)物的濃度而定(ding)，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的原(yuan)因是(shi)PCR反(fan)應(ying)中存在對應(ying)的鹽(yan)離(li)子和金(jin)屬(shu)離(li)子，適當減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的用量(liang)以(yi)保(bao)證(zheng)最終(zhong)反(fan)應(ying)體(ti)系中的環境(jing)適宜(yi)限(xian)制性內(nei)切酶發(fa)揮(hui)功能。

Q:限(xian)制性內(nei)切酶簡(jian)並性識(shi)別位點(dian)壹定是(shi)回(hui)文(wen)的嗎？

A:大多數二型限(xian)制性內(nei)切酶的識別序列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的，而且是(shi)特定的堿基序列(lie)。然(ran)而有些限(xian)制性內(nei)切酶具有簡並性識(shi)別位點(dian)，也就(jiu)是(shi)說(shuo)識(shi)別(bie)位點中有壹個(ge)或以上(shang)的堿基對是(shi)非特異(yi)的（例如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣(yang)的具有簡並性識(shi)別位點(dian)的限(xian)制性內(nei)切酶，只(zhi)要是(shi)符(fu)合要求的序列皆(jie)能被識別(bie)並且被正確(que)地切割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中兩個(ge)並不(bu)是(shi)回(hui)文(wen)的，仍(reng)然能被BsrFI識別並且切割）。