LightNing® BsaI內切(qie)酶是壹系(xi)列經(jing)過基因(yin)工(gong)程重(zhong)組(zu)的(de)快速(su)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，適用於(yu)質(zhi)粒 DNA、PCR 產物或(huo)基(ji)因(yin)組 DNA 等(deng)的(de)快速(su)酶切(qie)。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速(su)內切(qie)酶在通(tong)用的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具(ju)有優(you)良的(de)活性，能夠在 5~15 分(fen)鐘內完成酶切(qie)。

LightNing® BsaI內切(qie)酶組(zu)成(cheng)

特(te)性和(he)用法(fa)

LightNing® BsaI內切(qie)酶，可(ke)在5~15 min內完成反(fan)應

u建議反(fan)應條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液；

37℃溫育；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速(su)酶切(qie)流(liu)程"配制反(fan)應體(ti)系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

80℃溫育20 min。

u甲基化敏(min)感(gan)性(xing)

對(dui)於(yu)被(bei) CpG 甲基化的(de) DNA，剪(jian)切(qie)可能受阻，

對(dui)於(yu)被(bei) Dcm 甲基化的(de) DNA，剪(jian)切(qie)可能受阻。

u儲(chu)運(yun)條(tiao)件(jian)

-20℃

相關問(wen)答

Q:為(wei)什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入(ru)HSA？

A:壹些酶(mei)在反(fan)應過(guo)程中(zhong)需(xu)要HSA的(de)參與，我們在CutOne® Buffer中(zhong)添加(jia)了(le)HSA，避(bi)免反(fan)應中(zhong)額外(wai)添加(jia)組分(fen)，使(shi)得酶切(qie)反(fan)應更(geng)加(jia)便捷(jie)。

Q:HSA的(de)添加(jia)對於(yu)雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)功能會產生(sheng)什(shen)麽(me)樣(yang)的(de)影(ying)響？

A:在我們的(de)測試(shi)中(zhong)未曾(zeng)發現(xian)HSA對(dui)於(yu)雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)功能有任(ren)何影(ying)響。在有些(xie)情(qing)況(kuang)下(xia)，對(dui)於(yu)部(bu)分(fen)的(de)酶切(qie)反(fan)應有促(cu)進作用。

Q:我需(xu)要嚴(yan)格(ge)遵守(shou)5~15 min的(de)酶切(qie)時間嗎？能夠延長反(fan)應時間嗎？

A:雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶經(jing)過(guo)改(gai)造(zao)可(ke)以將酶(mei)切(qie)時間縮(suo)短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也消除(chu)了(le)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)星(xing)活(huo)性(xing)（長時間反(fan)應造(zao)成(cheng)的(de)非特(te)異性消化），在說(shuo)明(ming)書中(zhong)告(gao)知的(de)星(xing)活(huo)性(xing)出現(xian)的(de)時間範圍(wei)內可(ke)以適當延(yan)長反(fan)應時間。

Q:我什麽(me)時候應當考(kao)慮星(xing)活(huo)性(xing)對於(yu)酶切(qie)反(fan)應的(de)影(ying)響？

A:如果額(e)外(wai)的(de)酶切(qie)條(tiao)帶(dai)對(dui)於(yu)實(shi)驗結果會(hui)產生(sheng)影(ying)響時我們應(ying)當考(kao)慮星(xing)活(huo)性(xing)對於(yu)酶切(qie)反(fan)應的(de)影(ying)響。例如：進行基因(yin)型(xing)、突變型(xing)分(fen)析或(huo)克隆(long)時我們應(ying)當避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的(de)產生(sheng)。避(bi)免星(xing)活(huo)性(xing)的(de)有效(xiao)方法(fa)：適當擴(kuo)大(da)反(fan)應體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)積(ji)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)甘油(you)體(ti)積(ji)達(da)到(dao)或(huo)超過總(zong)反(fan)應體(ti)積(ji)的(de)5%）；不進行超長時間孵育（過(guo)夜(ye)消化極易(yi)產生(sheng)星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有哪(na)些(xie)關(guan)鍵(jian)因(yin)素會(hui)導致星(xing)活(huo)性(xing)？

A:長時間孵育、過(guo)量(liang)的(de)酶、高(gao)甘油(you)含量（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)系(xi)等因(yin)素都(dou)會(hui)導致星(xing)活(huo)性(xing)的(de)產生(sheng)。

Q:未(wei)經(jing)純(chun)化的(de)PCR產物直接(jie)酶(mei)切(qie)要怎(zen)樣(yang)設定體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推薦(jian)由這些內容(rong)組成(cheng)：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的(de)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶、ddH2O補(bu)齊(qi)到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用量(liang)根(gen)據(ju)PCR產物的(de)濃度(du)而(er)定(ding)，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應緩(huan)沖(chong)液的(de)原因(yin)是PCR反(fan)應中(zhong)存在對(dui)應(ying)的(de)鹽離(li)子(zi)和金(jin)屬離(li)子(zi)，適當減(jian)少反(fan)應緩(huan)沖(chong)液的(de)用量(liang)以保證(zheng)最(zui)終(zhong)反(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)的(de)環(huan)境(jing)適宜(yi)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶發揮功(gong)能。

Q:限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶簡(jian)並(bing)性識別(bie)位(wei)點壹定是回文(wen)的(de)嗎？

A:大(da)多(duo)數(shu)二型(xing)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶的(de)識別(bie)序(xu)列(lie)是回文(wen)的(de)，而且(qie)是特(te)定的(de)堿基序(xu)列(lie)。然(ran)而(er)有些(xie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶具(ju)有簡(jian)並(bing)性(xing)識別(bie)位(wei)點，也(ye)就(jiu)是說(shuo)識別(bie)位(wei)點中(zhong)有壹個或(huo)以上的(de)堿基對是非特(te)異的(de)（例如：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於(yu)這(zhe)樣(yang)的(de)具(ju)有簡(jian)並(bing)性(xing)識別(bie)位(wei)點的(de)限(xian)制(zhi)性(xing)內切(qie)酶，只(zhi)要是符合(he)要求(qiu)的(de)序(xu)列(lie)皆能被識別(bie)並(bing)且(qie)被(bei)正確地切(qie)割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩個並(bing)不是回文(wen)的(de)，仍然(ran)能被BsrFI識別(bie)並(bing)且(qie)切(qie)割）。