LightNing® ClaI內切(qie)酶(mei)是(shi)壹系列經過(guo)基(ji)因工(gong)程(cheng)重(zhong)組的快速(su)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或基(ji)因組(zu) DNA 等的快速(su)酶(mei)切(qie)。所(suo)有(you) LightNing® 快速(su)內切(qie)酶(mei)在通(tong)用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具有(you)優(you)良(liang)的活性，能(neng)夠(gou)在 5~15 分鐘(zhong)內完(wan)成酶切(qie)。

LightNing® ClaI內切(qie)酶(mei)組成(cheng)

特性和用法(fa)

LightNing® ClaI內切(qie)酶(mei)，可在5~15 min內完(wan)成反應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液；

37℃溫育；

參(can)照(zhao)“DNA 快速(su)酶(mei)切(qie)流程(cheng)"配制反(fan)應體系。

u失(shi)活(huo)條件(jian)

80℃溫育20 min。

u甲(jia)基(ji)化敏(min)感性

對於(yu)被 Dam 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切(qie)可能受阻，

對於(yu)被 CpG 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切(qie)可能受阻，

對於(yu)被 EcoBI 甲(jia)基(ji)化的 DNA，剪切(qie)可能受阻。

u儲運條件(jian)

-20℃

相關問(wen)答(da)

Q:為什(shen)麽(me)在(zai)CutOne® Buffer中加入HSA？

A:壹些(xie)酶在(zai)反(fan)應(ying)過程(cheng)中需(xu)要(yao)HSA的參(can)與，我(wo)們在CutOne® Buffer中添(tian)加(jia)了(le)HSA，避免(mian)反(fan)應中(zhong)額外(wai)添(tian)加(jia)組(zu)分，使得(de)酶(mei)切反應(ying)更(geng)加(jia)便捷(jie)。

Q:HSA的添(tian)加(jia)對於(yu)雷霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的功能(neng)會產(chan)生什(shen)麽(me)樣的影響？

A:在(zai)我(wo)們的測(ce)試(shi)中未曾發(fa)現(xian)HSA對於(yu)雷霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的功能(neng)有(you)任何(he)影響。在有(you)些(xie)情況(kuang)下(xia)，對於(yu)部(bu)分的酶切(qie)反應(ying)有(you)促進(jin)作用。

Q:我(wo)需(xu)要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守5~15 min的酶切(qie)時(shi)間嗎？能夠(gou)延(yan)長(chang)反應時(shi)間嗎？

A:雷霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)經過(guo)改造(zao)可以將酶(mei)切(qie)時(shi)間縮(suo)短至(zhi)5~15 min。同樣也(ye)消(xiao)除(chu)了(le)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的星活(huo)性（長(chang)時(shi)間反(fan)應造成的非特(te)異性消(xiao)化(hua)），在(zai)說明(ming)書(shu)中告(gao)知的星活(huo)性出(chu)現的時(shi)間範(fan)圍內可以適(shi)當延(yan)長(chang)反應時(shi)間。

Q:我(wo)什(shen)麽(me)時(shi)候應(ying)當考(kao)慮星活性對於(yu)酶切反應(ying)的影響？

A:如(ru)果額(e)外(wai)的酶切(qie)條帶(dai)對於(yu)實驗(yan)結果會(hui)產(chan)生影響時(shi)我(wo)們應當考(kao)慮星活性對於(yu)酶切反應(ying)的影響。例如：進(jin)行基(ji)因型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析(xi)或(huo)克隆(long)時(shi)我(wo)們應當避免(mian)星(xing)活性的產(chan)生。避免(mian)星(xing)活性的有(you)效方(fang)法(fa)：適(shi)當擴大反(fan)應(ying)體積（較小的反應(ying)體積容易(yi)造(zao)成甘油(you)體積達到(dao)或(huo)超(chao)過(guo)總(zong)反應體積的5%）；不進(jin)行超(chao)長(chang)時(shi)間孵(fu)育（過夜消(xiao)化(hua)極易產(chan)生星活性）。

Q:有(you)哪些(xie)關鍵因(yin)素(su)會導(dao)致星(xing)活性？

A:長(chang)時(shi)間孵(fu)育、過量(liang)的酶、高(gao)甘油(you)含量(liang)（通(tong)常高(gao)於(yu)5%）、較小的反應(ying)體系(xi)等因素(su)都會(hui)導(dao)致星(xing)活性的產(chan)生。

Q:未經純化的PCR產(chan)物直(zhi)接(jie)酶(mei)切(qie)要(yao)怎樣設(she)定(ding)體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應體系推薦由這些(xie)內容(rong)組(zu)成：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)、ddH2O補齊到(dao)30 μl。酶的用量(liang)根據PCR產(chan)物的濃(nong)度而(er)定，只(zhi)加入(ru)2 μl反(fan)應緩(huan)沖(chong)液的原因(yin)是(shi)PCR反(fan)應(ying)中存(cun)在(zai)對應(ying)的鹽離子和金屬(shu)離子，適(shi)當減少反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的用量(liang)以(yi)保(bao)證最終(zhong)反(fan)應(ying)體(ti)系中的環境適(shi)宜(yi)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)發(fa)揮(hui)功能(neng)。

Q:限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)簡並(bing)性識(shi)別位點壹定是(shi)回(hui)文(wen)的嗎？

A:大多數二型(xing)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的識別序(xu)列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的，而(er)且是(shi)特定(ding)的堿基(ji)序列(lie)。然而(er)有(you)些(xie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)具有(you)簡並(bing)性識(shi)別位點，也(ye)就是(shi)說識別位點中(zhong)有(you)壹個或以上(shang)的堿基(ji)對是(shi)非特(te)異的（例如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣的具有(you)簡並(bing)性識(shi)別位點的限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)，只(zhi)要是(shi)符合(he)要(yao)求(qiu)的序列(lie)皆(jie)能(neng)被(bei)識(shi)別並(bing)且(qie)被(bei)正確地切(qie)割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩(liang)個並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文(wen)的，仍然(ran)能被(bei)BsrFI識別並(bing)且(qie)切(qie)割）。