LightNing® BclI內(nei)切酶(mei)是(shi)壹系列經(jing)過基(ji)因工(gong)程(cheng)重(zhong)組的快(kuai)速(su)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或基(ji)因組 DNA 等的(de)快速(su)酶(mei)切(qie)。所(suo)有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內(nei)切酶(mei)在(zai)通用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都(dou)具有(you)優(you)良(liang)的活性，能夠(gou)在 5~15 分鐘內(nei)完(wan)成(cheng)酶(mei)切(qie)。

LightNing® BclI內(nei)切酶(mei)組成(cheng)

特(te)性和用(yong)法(fa)

LightNing® BclI內(nei)切酶(mei)，可(ke)在5~15 min內(nei)完(wan)成(cheng)反(fan)應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條件

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫(wen)育；

參(can)照“DNA 快(kuai)速(su)酶(mei)切(qie)流(liu)程"配(pei)制(zhi)反(fan)應(ying)體(ti)系。

u失(shi)活條件

80℃溫(wen)育20 min

u甲(jia)基(ji)化敏感性

對於(yu)被(bei) Dam 甲(jia)基(ji)化的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受阻(zu)，

對於(yu)被(bei) EcoBI 甲(jia)基(ji)化的(de) DNA，剪切(qie)可(ke)能受阻(zu)。

u儲運條件

-20℃

相(xiang)關問(wen)答(da)

Q:為什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些酶(mei)在(zai)反(fan)應(ying)過(guo)程(cheng)中需(xu)要HSA的(de)參(can)與，我(wo)們在(zai)CutOne® Buffer中添(tian)加(jia)了(le)HSA，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)中額(e)外(wai)添(tian)加(jia)組分，使得酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便捷(jie)。

Q:HSA的(de)添加(jia)對於(yu)雷(lei)霆(ting)系列限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能會產(chan)生什(shen)麽(me)樣的影響(xiang)？

A:在(zai)我們(men)的測試中未曾發(fa)現HSA對於(yu)雷(lei)霆(ting)系列限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能有(you)任(ren)何(he)影響(xiang)。在有(you)些情況(kuang)下(xia)，對於(yu)部(bu)分的酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)有(you)促(cu)進(jin)作用(yong)。

Q:我(wo)需要嚴(yan)格遵守5~15 min的(de)酶(mei)切(qie)時(shi)間嗎(ma)？能夠(gou)延長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間嗎(ma)？

A:雷(lei)霆系列限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)經(jing)過改(gai)造可(ke)以(yi)將酶(mei)切(qie)時(shi)間縮短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消(xiao)除(chu)了(le)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的(de)星(xing)活(huo)性（長時(shi)間反(fan)應(ying)造成(cheng)的(de)非特(te)異(yi)性消(xiao)化），在(zai)說明(ming)書中告知(zhi)的(de)星(xing)活(huo)性出(chu)現的時(shi)間範(fan)圍內(nei)可(ke)以(yi)適(shi)當延長反(fan)應(ying)時(shi)間。

Q:我(wo)什麽(me)時(shi)候應(ying)當考慮(lv)星活(huo)性對於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影響(xiang)？

A:如(ru)果(guo)額(e)外(wai)的(de)酶(mei)切(qie)條帶對於(yu)實(shi)驗(yan)結果(guo)會產(chan)生影響(xiang)時(shi)我們(men)應當考慮(lv)星活(huo)性對於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的(de)影響(xiang)。例(li)如：進(jin)行基(ji)因型(xing)、突(tu)變型(xing)分析或克隆時(shi)我們(men)應當避免(mian)星(xing)活性的產(chan)生。避(bi)免(mian)星(xing)活性的有(you)效(xiao)方法(fa)：適(shi)當擴大反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)（較小的反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)容易(yi)造成(cheng)甘油(you)體(ti)積(ji)達到或超(chao)過(guo)總反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)的5%）；不(bu)進(jin)行超(chao)長時(shi)間孵(fu)育（過(guo)夜(ye)消(xiao)化極易產(chan)生星(xing)活(huo)性）。

Q:有(you)哪(na)些關鍵(jian)因素會導致(zhi)星(xing)活性？

A:長(chang)時(shi)間孵(fu)育、過(guo)量(liang)的酶(mei)、高(gao)甘油(you)含量(liang)（通常高(gao)於(yu)5%）、較(jiao)小的反(fan)應(ying)體(ti)系等因素都(dou)會導致(zhi)星(xing)活性的產(chan)生。

Q:未經(jing)純化的(de)PCR產(chan)物直接酶(mei)切(qie)要怎(zen)樣設(she)定體系？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系推(tui)薦由這些內(nei)容組成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應的(de)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊(qi)到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量(liang)根據PCR產(chan)物的(de)濃(nong)度(du)而(er)定，只加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)原(yuan)因是(shi)PCR反(fan)應(ying)中存(cun)在對應(ying)的(de)鹽離(li)子(zi)和金屬離(li)子(zi)，適(shi)當減少反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)用(yong)量(liang)以(yi)保(bao)證(zheng)最(zui)終(zhong)反(fan)應(ying)體(ti)系中的(de)環(huan)境適(shi)宜(yi)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)發(fa)揮(hui)功(gong)能。

Q:限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)簡並性識別位(wei)點壹(yi)定是(shi)回(hui)文(wen)的(de)嗎(ma)？

A:大(da)多(duo)數(shu)二型(xing)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的(de)識別序(xu)列是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，而(er)且是(shi)特定的堿(jian)基(ji)序(xu)列。然(ran)而(er)有(you)些限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)具(ju)有(you)簡並性識別位(wei)點，也(ye)就(jiu)是(shi)說識別位(wei)點中有(you)壹(yi)個(ge)或以(yi)上(shang)的堿(jian)基(ji)對是(shi)非特(te)異(yi)的(de)（例(li)如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這(zhe)樣(yang)的具有(you)簡並性識別位(wei)點的(de)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)，只(zhi)要是(shi)符(fu)合(he)要求的(de)序(xu)列皆(jie)能被(bei)識別並且被(bei)正確地(di)切(qie)割(ge)（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中兩(liang)個(ge)並不(bu)是(shi)回(hui)文(wen)的(de)，仍(reng)然能被(bei)BsrFI識別並且切割(ge)）。