LightNing® BbsI內切(qie)酶(mei)是壹系列(lie)經過基(ji)因(yin)工(gong)程重組的快(kuai)速(su)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)，適用(yong)於(yu)質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物(wu)或基(ji)因(yin)組 DNA 等(deng)的(de)快(kuai)速(su)酶(mei)切。所(suo)有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內切(qie)酶(mei)在通用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具(ju)有(you)優(you)良(liang)的(de)活(huo)性，能(neng)夠在(zai) 5~15 分鐘內完成(cheng)酶(mei)切。

LightNing® BbsI內切(qie)酶(mei)組成(cheng)

特(te)性和(he)用(yong)法

LightNing® BbsI內切(qie)酶(mei)，可(ke)在5~15 min內完成(cheng)反(fan)應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液；

37℃溫育；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速酶(mei)切(qie)流(liu)程"配(pei)制(zhi)反(fan)應(ying)體系。

u失(shi)活(huo)條件(jian)

80℃溫育20 min

u甲(jia)基化敏感性

對(dui) Dam 甲(jia)基化不敏感、對(dui) Dcm 甲(jia)基化不敏感、對(dui) CpG 甲(jia)基化不敏感。

u存(cun)儲條(tiao)件(jian)

-20℃

相(xiang)關問答(da)

Q:為(wei)什(shen)麽在CutOne® Buffer中加入(ru)HSA？

A:壹些酶在反應(ying)過程中需要(yao)HSA的(de)參與(yu)，我(wo)們(men)在(zai)CutOne® Buffer中添加了(le)HSA，避免反(fan)應(ying)中額外添(tian)加組分，使得(de)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)更加便捷。

Q:HSA的(de)添加對(dui)於(yu)雷(lei)霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的功(gong)能(neng)會產(chan)生什(shen)麽樣的(de)影響(xiang)？

A:在(zai)我們(men)的(de)測(ce)試(shi)中未曾發(fa)現(xian)HSA對(dui)於(yu)雷(lei)霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的功(gong)能(neng)有(you)任(ren)何影響(xiang)。在(zai)有(you)些(xie)情(qing)況(kuang)下，對於(yu)部(bu)分的酶切反(fan)應(ying)有(you)促進作(zuo)用(yong)。

Q:我(wo)需要(yao)嚴格遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶切(qie)時間嗎？能(neng)夠延長反應(ying)時間嗎？

A:雷(lei)霆(ting)系列(lie)限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)經過改(gai)造可以(yi)將(jiang)酶(mei)切(qie)時間縮短(duan)至5~15 min。同樣(yang)也消(xiao)除了限(xian)制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的星活性（長時間反應(ying)造成(cheng)的(de)非特(te)異(yi)性消化），在說(shuo)明(ming)書(shu)中告知的星活性出現的時間範(fan)圍(wei)內可(ke)以(yi)適當(dang)延長反應(ying)時間。

Q:我(wo)什(shen)麽時候應(ying)當考(kao)慮星活性對於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的影響(xiang)？

A:如(ru)果(guo)額外的(de)酶切條帶(dai)對於(yu)實(shi)驗(yan)結果(guo)會產(chan)生影響(xiang)時我(wo)們(men)應(ying)當考(kao)慮星活性對於(yu)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)的影響(xiang)。例(li)如(ru)：進行基(ji)因(yin)型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析(xi)或克隆(long)時我(wo)們(men)應(ying)當避免星活性的產(chan)生。避免星活性的有(you)效(xiao)方法：適當(dang)擴大(da)反(fan)應(ying)體積(ji)（較小的(de)反(fan)應(ying)體積(ji)容易(yi)造成(cheng)甘(gan)油體(ti)積(ji)達(da)到或超過總反(fan)應(ying)體積(ji)的5%）；不(bu)進行(xing)超長時間孵(fu)育（過夜消化極易(yi)產(chan)生星活性）。

Q:有(you)哪(na)些(xie)關(guan)鍵(jian)因(yin)素(su)會(hui)導(dao)致(zhi)星活性？

A:長時間孵(fu)育、過量(liang)的酶(mei)、高甘(gan)油(you)含(han)量（通常(chang)高(gao)於(yu)5%）、較小的(de)反(fan)應(ying)體系等(deng)因(yin)素(su)都會(hui)導致(zhi)星活性的產(chan)生。

Q:未經純化的PCR產(chan)物(wu)直(zhi)接酶(mei)切(qie)要(yao)怎樣(yang)設(she)定體系？

A:反(fan)應(ying)體系推(tui)薦由這(zhe)些內容(rong)組成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的限(xian)制(zhi)性內切(qie)酶(mei)、ddH2O補(bu)齊到(dao)30 μl。酶(mei)的用(yong)量根(gen)據PCR產(chan)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)而(er)定，只加入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的(de)原因(yin)是(shi)PCR反(fan)應(ying)中存在(zai)對應(ying)的鹽(yan)離子(zi)和(he)金(jin)屬離(li)子(zi)，適當(dang)減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩沖(chong)液的(de)用(yong)量以(yi)保(bao)證(zheng)最(zui)終反(fan)應(ying)體系中的環(huan)境(jing)適(shi)宜限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)發揮(hui)功能(neng)。

Q:限(xian)制(zhi)性內切(qie)酶(mei)簡並(bing)性識別位(wei)點壹定是回(hui)文的嗎？

A:大(da)多(duo)數二型限制(zhi)性內切(qie)酶(mei)的識(shi)別序(xu)列(lie)是回(hui)文的，而(er)且是(shi)特(te)定的堿基(ji)序(xu)列(lie)。然而(er)有(you)些(xie)限(xian)制(zhi)性內切(qie)酶(mei)具有(you)簡(jian)並(bing)性識別位(wei)點，也(ye)就(jiu)是(shi)說(shuo)識(shi)別(bie)位(wei)點中有(you)壹個或以(yi)上的堿基(ji)對是(shi)非特(te)異(yi)的（例(li)如(ru)：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於(yu)這(zhe)樣的(de)具有(you)簡(jian)並(bing)性識別位(wei)點的(de)限(xian)制(zhi)性內切(qie)酶(mei)，只要(yao)是符合要(yao)求的序(xu)列(lie)皆(jie)能(neng)被(bei)識(shi)別(bie)並(bing)且被(bei)正(zheng)確(que)地切(qie)割（例(li)如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中兩(liang)個(ge)並(bing)不是(shi)回文(wen)的，仍然能(neng)被(bei)BsrFI識(shi)別並(bing)且切(qie)割）。