LightNing® BamHI內(nei)切酶(mei)是(shi)壹系(xi)列(lie)經(jing)過(guo)基(ji)因工(gong)程(cheng)重(zhong)組的(de)快(kuai)速限制性內(nei)切酶(mei)，適(shi)用於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產物或(huo)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等的(de)快(kuai)速酶(mei)切。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速內(nei)切酶(mei)在通(tong)用的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具有(you)優(you)良(liang)的(de)活性，能夠(gou)在 5~15 分(fen)鐘內(nei)完(wan)成酶切。

LightNing® BamHI內(nei)切酶(mei)組(zu)成

特(te)性和用法(fa)

LightNing® BamHI內(nei)切酶(mei)，可(ke)在5~15 min內(nei)完(wan)成反應(ying)

u 建議反(fan)應(ying)條件

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液(ye)；

37℃溫(wen)育；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速酶(mei)切流(liu)程(cheng)"配制(zhi)反應(ying)體(ti)系(xi)。

u 失(shi)活條件

不可(ke)熱(re)失活(huo)，請使用酚氯仿(fang)抽提或(huo)柱(zhu)純(chun)化。

u 存儲條件

-20℃

相(xiang)關問(wen)答(da)

Q:為(wei)什麽在CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶在反應(ying)過(guo)程(cheng)中(zhong)需要HSA的(de)參(can)與，我(wo)們在CutOne® Buffer中(zhong)添加(jia)了HSA，避(bi)免反(fan)應(ying)中(zhong)額外添加(jia)組分(fen)，使得(de)酶(mei)切反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添加(jia)對於雷(lei)霆系(xi)列限制性內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能會(hui)產生(sheng)什(shen)麽樣(yang)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在我(wo)們的(de)測試中(zhong)未曾發現(xian)HSA對於雷(lei)霆系(xi)列限制性內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能有(you)任(ren)何影(ying)響(xiang)。在有些(xie)情(qing)況(kuang)下(xia)，對於部(bu)分(fen)的(de)酶切反(fan)應(ying)有(you)促(cu)進(jin)作用。

Q:我(wo)需要嚴格(ge)遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶切時(shi)間嗎？能夠(gou)延(yan)長反應(ying)時(shi)間嗎？

A:雷(lei)霆系(xi)列限制性內(nei)切酶(mei)經(jing)過(guo)改(gai)造可(ke)以將酶切時(shi)間縮(suo)短(duan)至5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消除(chu)了限制性內(nei)切酶(mei)的(de)星活性(xing)（長(chang)時(shi)間反(fan)應(ying)造(zao)成的(de)非特(te)異(yi)性消化(hua)），在說(shuo)明書(shu)中(zhong)告知(zhi)的(de)星活性(xing)出現(xian)的(de)時間範(fan)圍(wei)內(nei)可(ke)以適當延(yan)長反應(ying)時(shi)間。

Q:我(wo)什麽時(shi)候應(ying)當(dang)考慮(lv)星活性(xing)對於酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如(ru)果額外的(de)酶切條帶對於實(shi)驗結(jie)果會(hui)產生(sheng)影(ying)響(xiang)時我(wo)們應(ying)當(dang)考慮(lv)星活性(xing)對於酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)。例如(ru)：進行(xing)基因型、突變(bian)型分(fen)析或(huo)克隆時我(wo)們應(ying)當(dang)避(bi)免星活性(xing)的(de)產生(sheng)。避(bi)免星活性(xing)的(de)有效(xiao)方法(fa)：適(shi)當(dang)擴(kuo)大反應(ying)體(ti)積（較(jiao)小的(de)反應(ying)體(ti)積容(rong)易(yi)造成甘油體(ti)積達(da)到或(huo)超(chao)過(guo)總(zong)反應(ying)體(ti)積的(de)5%）；不進(jin)行(xing)超(chao)長(chang)時間孵(fu)育（過(guo)夜(ye)消化極(ji)易(yi)產生(sheng)星活性(xing)）。

Q:有(you)哪些(xie)關鍵(jian)因素(su)會(hui)導(dao)致星活性(xing)？

A:長(chang)時間孵(fu)育、過(guo)量(liang)的(de)酶、高(gao)甘油含(han)量（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較(jiao)小的(de)反應(ying)體(ti)系(xi)等(deng)因(yin)素(su)都(dou)會導(dao)致星活性(xing)的(de)產生(sheng)。

Q:未經(jing)純(chun)化的(de)PCR產物直(zhi)接(jie)酶(mei)切要怎樣(yang)設(she)定(ding)體系？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)推(tui)薦(jian)由(you)這些(xie)內(nei)容(rong)組成：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的(de)限制性內(nei)切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用量根(gen)據PCR產物的(de)濃(nong)度而定(ding)，只(zhi)加(jia)入2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)原因是PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存在對應(ying)的(de)鹽離子和金(jin)屬離子，適當減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)用量以保(bao)證最(zui)終反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)的(de)環境適(shi)宜限制性內(nei)切酶(mei)發(fa)揮功(gong)能。

Q:限制性內(nei)切酶(mei)簡並(bing)性識(shi)別位(wei)點壹定(ding)是回(hui)文的(de)嗎？

A:大(da)多(duo)數二(er)型限制性內(nei)切酶(mei)的(de)識(shi)別序(xu)列(lie)是回(hui)文的(de)，而且(qie)是(shi)特(te)定(ding)的(de)堿基序(xu)列(lie)。然而有(you)些(xie)限制性內(nei)切酶(mei)具(ju)有簡並(bing)性識(shi)別位(wei)點，也(ye)就是說(shuo)識(shi)別位(wei)點中(zhong)有壹個(ge)或(huo)以上(shang)的(de)堿基對是非特(te)異(yi)的(de)（例如(ru)：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這樣(yang)的(de)具有簡並(bing)性識(shi)別位(wei)點的(de)限制性內(nei)切酶(mei)，只(zhi)要是符合要求的(de)序(xu)列(lie)皆能被識(shi)別並(bing)且(qie)被(bei)正確(que)地(di)切割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩(liang)個並不是(shi)回(hui)文的(de)，仍然能被(bei)BsrFI識(shi)別並(bing)且(qie)切割(ge)）。