LightNing® AvrII內切(qie)酶(mei)是(shi)壹系(xi)列經過基(ji)因(yin)工(gong)程重(zhong)組的(de)快速限(xian)制性內切(qie)酶(mei)，適用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產物(wu)或基(ji)因(yin)組 DNA 等(deng)的(de)快速酶(mei)切(qie)。所(suo)有 LightNing® 快速內切(qie)酶(mei)在通(tong)用(yong)的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有(you)優(you)良的(de)活性，能夠在 5~15 分鐘(zhong)內完成(cheng)酶(mei)切(qie)。

LightNing® AvrII內切(qie)酶(mei)組成(cheng)

特(te)性和用(yong)法

LightNing® AvrII內切(qie)酶(mei)，可(ke)在(zai)5~15 min內完成(cheng)反(fan)應

u建議反(fan)應條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩沖液(ye)；

37℃溫(wen)育；

參(can)照“DNA 快速酶(mei)切(qie)流程"配(pei)制反(fan)應體(ti)系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

不(bu)可(ke)熱(re)失(shi)活(huo)，請(qing)使(shi)用(yong)酚氯仿(fang)抽(chou)提或柱純化。

u存儲條(tiao)件(jian)

-20℃

相(xiang)關問答(da)

Q:為(wei)什麽在CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入HSA？

A:壹些(xie)酶在(zai)反(fan)應過程中(zhong)需(xu)要(yao)HSA的(de)參(can)與，我(wo)們在CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加了(le)HSA，避免(mian)反(fan)應中(zhong)額外添(tian)加組(zu)分，使(shi)得(de)酶切(qie)反(fan)應更(geng)加便捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加對(dui)於雷霆(ting)系(xi)列限制性內切(qie)酶(mei)的(de)功能會產生(sheng)什麽樣的(de)影響？

A:在(zai)我(wo)們的(de)測(ce)試中(zhong)未(wei)曾(zeng)發現HSA對(dui)於雷霆(ting)系(xi)列限制性內切(qie)酶(mei)的(de)功能有任何(he)影響。在(zai)有(you)些情(qing)況下，對(dui)於部分的(de)酶切(qie)反(fan)應有(you)促進(jin)作用(yong)。

Q:我需(xu)要(yao)嚴格遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶切(qie)時(shi)間(jian)嗎(ma)？能夠(gou)延(yan)長反(fan)應時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷霆(ting)系(xi)列限制性內切(qie)酶(mei)經過改造(zao)可以(yi)將酶(mei)切(qie)時(shi)間(jian)縮短(duan)至5~15 min。同樣也(ye)消除(chu)了(le)限(xian)制性內切(qie)酶(mei)的(de)星活(huo)性（長時(shi)間(jian)反(fan)應造(zao)成(cheng)的(de)非特(te)異性消化），在(zai)說(shuo)明書中(zhong)告(gao)知(zhi)的(de)星活(huo)性出(chu)現的(de)時(shi)間(jian)範(fan)圍(wei)內可以(yi)適當延(yan)長反(fan)應時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什麽時(shi)候(hou)應當(dang)考(kao)慮星活性對(dui)於酶(mei)切(qie)反(fan)應的(de)影響？

A:如(ru)果(guo)額外的(de)酶切(qie)條(tiao)帶(dai)對(dui)於實(shi)驗結(jie)果會產生(sheng)影響時(shi)我(wo)們(men)應當(dang)考(kao)慮星活性對(dui)於酶(mei)切(qie)反(fan)應的(de)影響。例(li)如：進(jin)行(xing)基(ji)因(yin)型、突(tu)變型分析(xi)或(huo)克隆(long)時(shi)我(wo)們(men)應當(dang)避免(mian)星(xing)活性的(de)產生(sheng)。避免(mian)星(xing)活性的(de)有效(xiao)方(fang)法(fa)：適當擴大反(fan)應體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)積(ji)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)甘(gan)油(you)體(ti)積(ji)達(da)到或(huo)超(chao)過總(zong)反(fan)應體(ti)積(ji)的(de)5%）；不(bu)進(jin)行(xing)超(chao)長時(shi)間(jian)孵育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化極(ji)易產生(sheng)星活性）。

Q:有哪(na)些關(guan)鍵因(yin)素會導(dao)致(zhi)星(xing)活(huo)性？

A:長時(shi)間(jian)孵育(yu)、過量(liang)的(de)酶、高(gao)甘(gan)油(you)含(han)量(liang)（通(tong)常高於5%）、較(jiao)小(xiao)的(de)反(fan)應體(ti)系(xi)等因(yin)素都(dou)會導(dao)致(zhi)星(xing)活(huo)性的(de)產生(sheng)。

Q:未經純化的(de)PCR產物(wu)直接(jie)酶切(qie)要(yao)怎(zen)樣設定(ding)體系(xi)？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推(tui)薦(jian)由這些內容(rong)組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的(de)限制性內切(qie)酶(mei)、ddH2O補齊(qi)到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量(liang)根據(ju)PCR產物(wu)的(de)濃度而定(ding)，只(zhi)加入2 μl反(fan)應緩沖液(ye)的(de)原(yuan)因(yin)是(shi)PCR反(fan)應中(zhong)存在對(dui)應的(de)鹽離(li)子(zi)和金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)，適當減(jian)少反(fan)應緩沖液(ye)的(de)用(yong)量(liang)以(yi)保(bao)證最(zui)終(zhong)反(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)的(de)環境(jing)適宜(yi)限(xian)制性內切(qie)酶(mei)發揮功能。

Q:限(xian)制性內切(qie)酶(mei)簡並(bing)性識(shi)別位點壹定(ding)是(shi)回(hui)文的(de)嗎(ma)？

A:大多(duo)數(shu)二(er)型限(xian)制性內切(qie)酶(mei)的(de)識(shi)別序列(lie)是(shi)回(hui)文的(de)，而且(qie)是(shi)特(te)定(ding)的(de)堿(jian)基(ji)序列(lie)。然(ran)而有些限制性內切(qie)酶(mei)具有(you)簡並(bing)性識(shi)別位點，也(ye)就是(shi)說(shuo)識(shi)別位點中(zhong)有(you)壹個或以(yi)上(shang)的(de)堿(jian)基(ji)對(dui)是(shi)非特(te)異的(de)（例(li)如：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對(dui)於這(zhe)樣的(de)具有(you)簡並(bing)性識(shi)別位點的(de)限制性內切(qie)酶(mei)，只(zhi)要是(shi)符(fu)合要求的(de)序列(lie)皆(jie)能被(bei)識(shi)別並(bing)且(qie)被(bei)正(zheng)確地切(qie)割（例(li)如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其中(zhong)兩(liang)個並(bing)不(bu)是(shi)回(hui)文的(de)，仍然(ran)能被(bei)BsrFI識(shi)別並(bing)且(qie)切(qie)割）。