LightNing® AseI內切酶(mei)是壹系列(lie)經過(guo)基(ji)因工(gong)程重(zhong)組(zu)的(de)快(kuai)速(su)限(xian)制性內切酶(mei)，適用於(yu)質(zhi)粒 DNA、PCR 產(chan)物或基(ji)因組(zu) DNA 等的(de)快(kuai)速(su)酶(mei)切。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速(su)內切酶(mei)在通用(yong)的(de) CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具有優良(liang)的(de)活(huo)性，能(neng)夠在 5~15 分鐘內完(wan)成酶(mei)切。

LightNing® AseI內切酶(mei)組(zu)成

特(te)性和用法

LightNing® AseI內切酶(mei)，可在5~15 min內完(wan)成反(fan)應(ying)

u建議(yi)反(fan)應(ying)條件

1× CutOne®緩(huan)沖(chong)液(ye)；

37℃溫育；

參照“DNA 快(kuai)速(su)酶(mei)切流(liu)程"配制反(fan)應(ying)體系。

u失活(huo)條件

80℃溫育20 min。

u甲基(ji)化(hua)敏感(gan)性

對於(yu)被 EcoBI 甲基(ji)化(hua)的(de) DNA，剪切可(ke)能(neng)受(shou)阻。

u存儲(chu)條件

-20℃

相關問答(da)

Q:為什(shen)麽在CutOne® Buffer中加入HSA？

A:壹些酶(mei)在反(fan)應(ying)過程中需要(yao)HSA的(de)參與，我們在CutOne® Buffer中添加(jia)了(le)HSA，避免反(fan)應(ying)中額外(wai)添加(jia)組(zu)分，使得(de)酶(mei)切反(fan)應(ying)更(geng)加便捷。

Q:HSA的(de)添加(jia)對於(yu)雷(lei)霆(ting)系列(lie)限(xian)制性內切酶(mei)的(de)功(gong)能(neng)會(hui)產(chan)生什(shen)麽樣的(de)影(ying)響？

A:在我們的(de)測(ce)試中未(wei)曾發現(xian)HSA對於(yu)雷(lei)霆(ting)系列(lie)限(xian)制性內切酶(mei)的(de)功(gong)能(neng)有任何(he)影響。在有些情(qing)況下(xia)，對於(yu)部(bu)分的(de)酶(mei)切反(fan)應(ying)有促進(jin)作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴格遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶(mei)切時(shi)間(jian)嗎？能(neng)夠延(yan)長反(fan)應(ying)時間(jian)嗎？

A:雷(lei)霆(ting)系列(lie)限(xian)制性內切酶(mei)經過(guo)改(gai)造(zao)可(ke)以(yi)將(jiang)酶(mei)切時(shi)間(jian)縮短至5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消(xiao)除了(le)限(xian)制性內切酶(mei)的(de)星(xing)活(huo)性（長時間(jian)反(fan)應(ying)造成的(de)非(fei)特(te)異性消化(hua)），在說明書(shu)中(zhong)告(gao)知(zhi)的(de)星(xing)活(huo)性出現的(de)時(shi)間(jian)範圍內可以(yi)適當延(yan)長反(fan)應(ying)時間(jian)。

Q:我什(shen)麽時候應(ying)當考慮星(xing)活(huo)性對於(yu)酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響？

A:如果額外(wai)的(de)酶(mei)切條帶對於(yu)實(shi)驗(yan)結果會(hui)產(chan)生影(ying)響時(shi)我(wo)們應(ying)當考慮星(xing)活(huo)性對於(yu)酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響。例(li)如(ru)：進(jin)行(xing)基(ji)因型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析或克隆時(shi)我(wo)們應(ying)當避免星(xing)活(huo)性的(de)產(chan)生。避(bi)免(mian)星(xing)活(huo)性的(de)有效方法：適當擴(kuo)大反(fan)應(ying)體積(ji)（較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體積(ji)容易造(zao)成甘油體積(ji)達到或超(chao)過(guo)總反(fan)應(ying)體積(ji)的(de)5%）；不進(jin)行(xing)超(chao)長時間(jian)孵(fu)育(yu)（過(guo)夜(ye)消(xiao)化(hua)極易產(chan)生星(xing)活(huo)性）。

Q:有哪(na)些(xie)關鍵(jian)因素會導(dao)致(zhi)星(xing)活(huo)性？

A:長時間(jian)孵(fu)育(yu)、過(guo)量(liang)的(de)酶(mei)、高甘油含量(liang)（通常(chang)高於(yu)5%）、較小的(de)反(fan)應(ying)體系等因(yin)素都會導致(zhi)星(xing)活(huo)性的(de)產(chan)生。

Q:未(wei)經純(chun)化(hua)的(de)PCR產(chan)物直(zhi)接酶(mei)切要(yao)怎樣(yang)設定體系？

A:反(fan)應(ying)體系推薦(jian)由(you)這些內容組(zu)成：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限(xian)制性內切酶(mei)、ddH2O補齊到(dao)30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量(liang)根據(ju)PCR產(chan)物的(de)濃(nong)度而定，只加(jia)入2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)原因(yin)是PCR反(fan)應(ying)中存在對應(ying)的(de)鹽(yan)離子(zi)和金(jin)屬離(li)子(zi)，適當減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)的(de)用(yong)量(liang)以(yi)保(bao)證最(zui)終(zhong)反(fan)應(ying)體系中(zhong)的(de)環(huan)境(jing)適宜限(xian)制性內切酶(mei)發揮(hui)功(gong)能(neng)。

Q:限(xian)制性內切酶(mei)簡(jian)並性識別位(wei)點壹定是回文的(de)嗎(ma)？

A:大多數(shu)二(er)型(xing)限(xian)制性內切酶(mei)的(de)識(shi)別序列(lie)是回文的(de)，而且是特(te)定的(de)堿基(ji)序列(lie)。然而有些限(xian)制性內切酶(mei)具有簡(jian)並性識別位(wei)點，也(ye)就是說(shuo)識(shi)別位(wei)點中(zhong)有壹個(ge)或以(yi)上的(de)堿基(ji)對是非(fei)特(te)異的(de)（例(li)如：BsrfI識別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣的(de)具(ju)有簡(jian)並性識別位(wei)點的(de)限(xian)制性內切酶(mei)，只要(yao)是符(fu)合(he)要(yao)求的(de)序列(lie)皆能(neng)被識別(bie)並且被正(zheng)確地(di)切割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中兩個(ge)並不是回文的(de)，仍(reng)然能(neng)被BsrFI識別並且切割(ge)）。