LightNing® BglI內(nei)切(qie)酶是(shi)壹(yi)系(xi)列(lie)經(jing)過基(ji)因(yin)工程(cheng)重(zhong)組的快速限制性(xing)內(nei)切(qie)酶，適(shi)用(yong)於(yu)質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或(huo)基(ji)因(yin)組 DNA 等的快速酶切(qie)。所有(you) LightNing® 快速內(nei)切(qie)酶在(zai)通(tong)用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具(ju)有(you)優(you)良(liang)的活性(xing)，能(neng)夠(gou)在(zai) 5~15 分(fen)鐘(zhong)內(nei)完(wan)成酶切(qie)

LightNing® BglI內切(qie)酶組(zu)成(cheng)

特性(xing)和(he)用(yong)法

LightNing® BglI內切(qie)酶，可在5~15 min內完成反(fan)應(ying)

u建(jian)議反(fan)應(ying)條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩沖液；

37℃溫(wen)育；

參(can)照(zhao)“DNA 快速酶切(qie)流程(cheng)"配(pei)制反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)。

u失(shi)活(huo)條(tiao)件(jian)

80℃溫(wen)育20 min

u甲基(ji)化敏感(gan)性(xing)

對於(yu)被(bei) CpG 甲基(ji)化的 DNA，剪(jian)切(qie)可能(neng)受阻(zu)。

u儲運(yun)條(tiao)件(jian)

-20℃

相關問(wen)答(da)

Q:為什麽(me)在CutOne® Buffer中加入HSA？

A:壹(yi)些酶在(zai)反(fan)應(ying)過程(cheng)中(zhong)需要HSA的參(can)與，我(wo)們在(zai)CutOne® Buffer中添加了(le)HSA，避免(mian)反(fan)應(ying)中(zhong)額外(wai)添加(jia)組分(fen)，使(shi)得酶切(qie)反(fan)應(ying)更加便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添加對於(yu)雷(lei)霆系(xi)列(lie)限制性(xing)內(nei)切(qie)酶的功能會產生(sheng)什麽(me)樣的影響(xiang)？

A:在我(wo)們的測試(shi)中未曾發現HSA對於(yu)雷(lei)霆系(xi)列(lie)限制性(xing)內(nei)切(qie)酶的功能有任(ren)何影(ying)響(xiang)。在有(you)些情況(kuang)下(xia)，對於(yu)部(bu)分(fen)的酶切(qie)反(fan)應(ying)有(you)促進作(zuo)用(yong)。

Q:我(wo)需要嚴格遵(zun)守5~15 min的酶切(qie)時間(jian)嗎？能(neng)夠(gou)延長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷(lei)霆系(xi)列(lie)限制性(xing)內(nei)切(qie)酶經(jing)過改造可以將(jiang)酶切(qie)時間(jian)縮(suo)短至(zhi)5~15 min。同(tong)樣(yang)也消(xiao)除了限制性(xing)內(nei)切(qie)酶的星(xing)活性(xing)（長(chang)時間(jian)反(fan)應(ying)造成的非特異性(xing)消(xiao)化），在(zai)說明書(shu)中告知的星(xing)活性(xing)出(chu)現的時間範(fan)圍內可(ke)以適(shi)當延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什麽(me)時候應當考(kao)慮(lv)星(xing)活性(xing)對於(yu)酶切(qie)反(fan)應(ying)的影響(xiang)？

A:如(ru)果額外(wai)的酶切(qie)條(tiao)帶對於(yu)實(shi)驗結果會產生(sheng)影(ying)響(xiang)時我(wo)們應(ying)當考(kao)慮(lv)星(xing)活性(xing)對於(yu)酶切(qie)反(fan)應(ying)的影響(xiang)。例如(ru)：進行(xing)基(ji)因(yin)型(xing)、突變(bian)型(xing)分(fen)析(xi)或(huo)克(ke)隆(long)時(shi)我(wo)們應(ying)當避免(mian)星(xing)活性(xing)的產生。避免(mian)星(xing)活性(xing)的有效方法(fa)：適(shi)當擴(kuo)大反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)（較(jiao)小的反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)容(rong)易(yi)造成甘(gan)油體(ti)積(ji)達(da)到(dao)或(huo)超過總反(fan)應(ying)體(ti)積(ji)的5%）；不進行(xing)超長(chang)時間(jian)孵育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化極(ji)易(yi)產生星(xing)活性(xing)）。

Q:有哪(na)些關(guan)鍵因(yin)素會導(dao)致(zhi)星(xing)活性(xing)？

A:長(chang)時間(jian)孵育(yu)、過量的酶、高(gao)甘(gan)油含(han)量（通常高(gao)於(yu)5%）、較(jiao)小的反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)等因(yin)素都會導(dao)致(zhi)星(xing)活性(xing)的產生。

Q:未經(jing)純化的PCR產物直(zhi)接(jie)酶切(qie)要怎(zen)樣(yang)設(she)定(ding)體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)推薦(jian)由這些內(nei)容(rong)組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的限制性(xing)內(nei)切(qie)酶、ddH2O補齊到(dao)30 μl。酶的用(yong)量根(gen)據(ju)PCR產物的濃度(du)而定(ding)，只加入2 μl反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液的原因(yin)是(shi)PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存在對應的鹽離子和(he)金(jin)屬(shu)離(li)子(zi)，適(shi)當減(jian)少(shao)反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液的用(yong)量以保證(zheng)最(zui)終(zhong)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中的環境適(shi)宜限制性(xing)內(nei)切(qie)酶發(fa)揮功能。

Q:限制性(xing)內(nei)切(qie)酶簡並性(xing)識(shi)別位點(dian)壹(yi)定(ding)是(shi)回(hui)文(wen)的嗎？

A:大多(duo)數(shu)二(er)型(xing)限制性(xing)內(nei)切(qie)酶的識(shi)別序列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的，而且是(shi)特定(ding)的堿基(ji)序列(lie)。然(ran)而(er)有(you)些限制性(xing)內(nei)切(qie)酶具(ju)有(you)簡並性(xing)識(shi)別位點(dian)，也(ye)就是(shi)說識(shi)別位點(dian)中(zhong)有壹(yi)個或以上(shang)的堿基(ji)對是(shi)非(fei)特異的（例如(ru)：BsrfI識(shi)別5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣的具(ju)有(you)簡並性(xing)識(shi)別位點(dian)的限制性(xing)內(nei)切(qie)酶，只要是(shi)符(fu)合(he)要(yao)求的序列(lie)皆能被(bei)識(shi)別並(bing)且(qie)被(bei)正(zheng)確地(di)切(qie)割（例(li)如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中兩個並不是(shi)回(hui)文(wen)的，仍然能被(bei)BsrFI識(shi)別並(bing)且(qie)切(qie)割）。