NK細胞分選(xuan)試劑盒(he)可(ke)用(yong)於從(cong)小(xiao)鼠(shu)脾(pi)臟(zang)單(dan)細胞懸液中(zhong)分離(li)未經標(biao)記(ji)的NK 細胞。非NK細胞(T細胞、DC 細胞、B細胞、粒細胞、巨噬(shi)細胞、紅系細胞)被生(sheng)物素化(hua)的抗體(ti)和(he)識(shi)別生物素的磁珠(zhu)標(biao)記(ji)通過(guo)去除(chu)這(zhe)些非NK細胞，從(cong)而得到高(gao)純度(du)的NK細胞。

NK細胞分選(xuan)試劑盒(he)可(ke)用(yong)於從(cong)小(xiao)鼠(shu)脾(pi)臟(zang)單(dan)細胞懸液中(zhong)分離(li)未經標(biao)記(ji)的NK 細胞。非NK細胞(T細胞、DC 細胞、B細胞、粒細胞、巨噬(shi)細胞、紅系細胞)被生(sheng)物素化(hua)的抗體(ti)和(he)識(shi)別生物素的磁珠(zhu)標(biao)記(ji)通過(guo)去除(chu)這(zhe)些非NK細胞，從(cong)而得到高(gao)純度(du)的NK細胞。

其分選(xuan)原(yuan)理為(wei)：用(yong)生物素結(jie)合的單(dan)克(ke)隆抗體(ti)混(hun)合物(作為(wei)壹(yi)級(ji)標(biao)記(ji)試劑)和(he)與(yu)磁珠(zhu)結(jie)合的抗生物素單(dan)克(ke)隆抗體(ti)(作為(wei)二級標(biao)記(ji)試劑)對(dui)非(fei)靶(ba)細胞進行(xing)間接磁性標(biao)記(ji)。磁性標(biao)記(ji)的非目(mu)標(biao)細胞在分選(xuan)器(qi)的磁場中(zhong)被保(bao)留(liu)在分選(xuan)柱中(zhong)，而未標(biao)記(ji)的NK 細胞則通過(guo)分選(xuan)柱流(liu)出(chu)。

試劑和(he)儀(yi)器要求(qiu)

緩沖(chong)液（pH7.2 PBS，0.5% BSA、2mM EDTA， 2~8℃）

分選(xuan)柱和(he)分選(xuan)器(qi)。

(可(ke)選(xuan))熒(ying)光偶(ou)聯(lian)的抗體(ti)用(yong)於流式(shi)分析。

(可(ke)選(xuan))PI或(huo)7-AAD可(ke)以(yi)用(yong)於流式(shi)分析中(zhong)排除(chu)死細胞。

(可(ke)選(xuan))死細胞清除(chu)試劑盒(he)用(yong)於死細胞的清除。

(可(ke)選(xuan))預分離(li)過濾(lv)器去除細胞團塊(kuai)。

操作步驟(zhou)

壹、樣(yang)本準備(bei)

使用(yong)手動(dong)方(fang)法(fa)或(huo)組織(zhi)解(jie)離(li)器制(zhi)備(bei)脾臟(zang)單(dan)細胞懸液。

二、磁珠(zhu)標(biao)記(ji)

1.細胞計數(shu)。

2.300xg離(li)心10分鐘(zhong)。去除(chu)上(shang)清(qing)。

3.每(mei)107個細胞總(zong)量(liang)使用(yong) 40μL緩沖(chong)液重(zhong)懸。

4.每(mei)107個細胞總(zong)量(liang)添(tian)加(jia) 10μLNK細胞生物素抗體(ti)混(hun)合物。

5.混(hun)勻，2-8℃孵育(yu)  5分鐘(zhong)。

6.每(mei)107個細胞加入(ru) 2mL緩沖(chong)液洗(xi)滌(di)細胞，300xg離(li)心10分鐘(zhong)，去上(shang)清(qing)。

7.每(mei)107個細胞添加(jia) 80μL 緩沖(chong)液。

8.每(mei)107個細胞添加(jia) 20μL抗生物素磁(ci)珠(zhu)。

9.混(hun)勻，2-8℃孵育(yu) 10分鐘(zhong)。

10.(可(ke)選(xuan))添(tian)加染色(se)抗體(ti)。

11.進行細胞分選(xuan)步(bu)驟。

三(san)、細胞分選(xuan)

xM或(huo)xL分選(xuan)柱進(jin)行(xing)細胞分選(xuan)

1.將(jiang)分選(xuan)柱置(zhi)於相(xiang)對(dui)應的分選(xuan)器(qi)中(zhong)。

2.用(yong)適當體(ti)積(ji)的緩沖(chong)液潤洗(xi)分選(xuan)柱（xM: 500 μL； xL: 3mL）

3.將(jiang)細胞懸液轉(zhuan)移(yi)至(zhi)分選(xuan)柱中(zhong)。收(shou)集(ji)含有未標(biao)記(ji)細胞的流出(chu)液，即 NK細胞。

4.加適(shi)量的緩沖(chong)液，收(shou)集(ji)總(zong)流(liu)出(chu)物，並與步驟 3中(zhong)的流出(chu)液混(hun)合，這(zhe)是(shi)NK細胞。（ xM: 500 μL；xL: 3mL）

5.(可(ke)選(xuan) )將(jiang)分選(xuan)柱從(cong)分選(xuan)器(qi)中(zhong)取出(chu)，並將其放(fang)在合適(shi)的收(shou)集(ji)管上。加適(shi)量(liang)的緩沖(chong)液到分選(xuan)柱中(zhong)，迅(xun)速用(yong)塞(sai)子推下(xia)，得到就是(shi)磁(ci)性標(biao)記(ji)的非NK細胞。（ xM: 1mL；xL: 5mL）

儲存(cun)溫度

2-8℃避光保(bao)存(cun)，請勿冷凍(dong)。有效期見(jian)試劑外(wai)標(biao)簽。

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