LightNing® AluI內(nei)切(qie)酶是(shi)壹系列經過(guo)基(ji)因工(gong)程(cheng)重組(zu)的快(kuai)速限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶，適(shi)用(yong)於(yu)質(zhi)粒 DNA、PCR 產(chan)物(wu)或(huo)基(ji)因組(zu) DNA 等(deng)的(de)快速酶(mei)切(qie)。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速內(nei)切(qie)酶(mei)在通用(yong)的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具(ju)有優(you)良的(de)活性，能(neng)夠(gou)在 5~15 分鐘(zhong)內完成(cheng)酶切(qie)。

LightNing® AluI內切(qie)酶組(zu)成(cheng)

特(te)性和(he)用(yong)法(fa)

LightNing® AluI內切(qie)酶，可(ke)在5~15 min內完(wan)成(cheng)反應(ying)

u建(jian)議反(fan)應(ying)條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參照(zhao)“DNA 快速酶(mei)切(qie)流(liu)程(cheng)"配制(zhi)反(fan)應體系。

u失活(huo)條件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

u甲(jia)基化(hua)敏感(gan)性(xing)

對於(yu)被 EcoBI 甲(jia)基化(hua)的(de) DNA，剪(jian)切可(ke)能(neng)受(shou)阻(zu)。

u存儲(chu)條件(jian)

-20℃

相(xiang)關(guan)問答

Q:為什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入HSA？

A:壹些酶在反應(ying)過程(cheng)中(zhong)需要(yao)HSA的參(can)與，我(wo)們(men)在CutOne® Buffer中(zhong)添加(jia)了HSA，避免(mian)反應中(zhong)額(e)外添加(jia)組(zu)分，使得酶切(qie)反(fan)應更(geng)加便(bian)捷。

Q:HSA的添加(jia)對於雷(lei)霆(ting)系列限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶的(de)功能(neng)會產(chan)生(sheng)什(shen)麽(me)樣(yang)的(de)影(ying)響？

A:在我們(men)的測試(shi)中(zhong)未(wei)曾(zeng)發(fa)現HSA對於(yu)雷(lei)霆(ting)系列限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶的(de)功能(neng)有任(ren)何(he)影(ying)響。在有些(xie)情(qing)況下，對於(yu)部(bu)分的(de)酶切反應(ying)有促進(jin)作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴(yan)格遵守(shou)5~15 min的酶(mei)切時(shi)間(jian)嗎(ma)？能(neng)夠(gou)延(yan)長反(fan)應時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷(lei)霆(ting)系列限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶經過(guo)改(gai)造可(ke)以(yi)將(jiang)酶(mei)切(qie)時(shi)間(jian)縮(suo)短(duan)至5~15 min。同樣(yang)也消除(chu)了限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶的(de)星活性（長時(shi)間(jian)反(fan)應(ying)造成(cheng)的非(fei)特(te)異性(xing)消化(hua)），在說明(ming)書中(zhong)告(gao)知的星活性出現的(de)時(shi)間(jian)範圍內(nei)可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)延(yan)長反(fan)應時(shi)間(jian)。

Q:我什(shen)麽(me)時(shi)候應當(dang)考(kao)慮星活性對於(yu)酶(mei)切(qie)反應(ying)的影(ying)響？

A:如(ru)果額(e)外的酶切(qie)條帶(dai)對於實(shi)驗結果(guo)會產(chan)生(sheng)影(ying)響時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當(dang)考(kao)慮星活性對於(yu)酶(mei)切(qie)反應(ying)的影(ying)響。例如(ru)：進行(xing)基(ji)因型(xing)、突(tu)變(bian)型(xing)分析(xi)或(huo)克(ke)隆(long)時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當(dang)避免(mian)星活性的產(chan)生(sheng)。避免(mian)星活性的有效(xiao)方(fang)法(fa)：適(shi)當(dang)擴大(da)反(fan)應體積（較(jiao)小(xiao)的反(fan)應體積容易造成(cheng)甘油體積達(da)到或(huo)超(chao)過總反(fan)應體積的(de)5%）；不進(jin)行(xing)超(chao)長時(shi)間(jian)孵(fu)育(yu)（過(guo)夜(ye)消化(hua)極易產(chan)生(sheng)星活性）。

Q:有哪(na)些(xie)關鍵(jian)因素會導(dao)致(zhi)星活性？

A:長時(shi)間(jian)孵(fu)育(yu)、過(guo)量的(de)酶、高(gao)甘油含量（通(tong)常高(gao)於(yu)5%）、較小(xiao)的反(fan)應體系等(deng)因素都(dou)會導(dao)致(zhi)星活性的產(chan)生(sheng)。

Q:未(wei)經純(chun)化(hua)的(de)PCR產(chan)物(wu)直(zhi)接酶(mei)切要(yao)怎(zen)樣(yang)設(she)定(ding)體系？

A:反應(ying)體系推(tui)薦(jian)由(you)這些內容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應(ying)的(de)限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶、ddH2O補齊(qi)到30 μl。酶的(de)用(yong)量根據(ju)PCR產(chan)物(wu)的濃(nong)度而定(ding)，只加入(ru)2 μl反應(ying)緩(huan)沖液(ye)的(de)原因是(shi)PCR反應(ying)中(zhong)存(cun)在對應(ying)的鹽(yan)離(li)子(zi)和(he)金屬離(li)子(zi)，適(shi)當(dang)減少反(fan)應(ying)緩(huan)沖液(ye)的(de)用(yong)量以(yi)保證最(zui)終(zhong)反(fan)應(ying)體系中(zhong)的(de)環境適(shi)宜限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶發(fa)揮(hui)功能(neng)。

Q:限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶簡(jian)並性識別(bie)位點壹定(ding)是(shi)回(hui)文(wen)的嗎(ma)？

A:大多(duo)數二(er)型限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶的(de)識別(bie)序(xu)列是(shi)回(hui)文(wen)的，而且是(shi)特(te)定(ding)的堿基(ji)序(xu)列。然而有些(xie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶具(ju)有簡(jian)並性識別(bie)位點，也就是(shi)說識別(bie)位點中(zhong)有壹個或(huo)以(yi)上的堿基(ji)對是(shi)非特(te)異的(de)（例如(ru)：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣(yang)的(de)具(ju)有簡(jian)並性識別(bie)位點的限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶，只(zhi)要(yao)是(shi)符合要(yao)求(qiu)的(de)序(xu)列皆(jie)能(neng)被識別(bie)並且被正(zheng)確(que)地切(qie)割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩(liang)個並不是(shi)回(hui)文(wen)的，仍然能被BsrFI識別(bie)並且切(qie)割）。