LightNing® AgeI內(nei)切酶(mei)是壹(yi)系(xi)列經(jing)過基因(yin)工(gong)程重組(zu)的快速(su)限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)，適用(yong)於(yu)質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物(wu)或基因(yin)組(zu) DNA 等的快速(su)酶(mei)切。所有(you) LightNing® 快(kuai)速(su)內(nei)切酶(mei)在通(tong)用(yong)的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中(zhong)都具(ju)有(you)優良的活性(xing)，能(neng)夠(gou)在 5~15 分鐘內完成(cheng)酶(mei)切。

LightNing® AgeI內(nei)切酶(mei)組(zu)成(cheng)

特(te)性(xing)和用(yong)法

LightNing® AgeI內(nei)切酶(mei)，可在5~15 min內(nei)完成(cheng)反應(ying)

u建(jian)議(yi)反(fan)應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩沖液；

37℃溫(wen)育；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速(su)酶(mei)切流(liu)程"配制(zhi)反應(ying)體(ti)系(xi)。

u失(shi)活條件

80℃溫(wen)育20 min。

u甲基化敏感(gan)性(xing)

對於(yu)被 CpG 甲基化的 DNA，剪(jian)切可能(neng)受阻。

u存(cun)儲條件

-20℃

相(xiang)關(guan)問答(da)

Q:為(wei)什麽在CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些酶(mei)在反(fan)應(ying)過程中(zhong)需要(yao)HSA的參與(yu)，我們(men)在CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加(jia)了HSA，避免(mian)反應(ying)中(zhong)額外(wai)添(tian)加(jia)組(zu)分，使得酶(mei)切反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添(tian)加(jia)對於(yu)雷霆(ting)系(xi)列限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)的功(gong)能(neng)會(hui)產(chan)生什麽樣(yang)的影響(xiang)？

A:在我們(men)的測(ce)試(shi)中(zhong)未(wei)曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於(yu)雷霆(ting)系(xi)列限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)的功(gong)能(neng)有(you)任(ren)何(he)影響(xiang)。在有(you)些(xie)情況(kuang)下，對於(yu)部分的酶(mei)切反(fan)應(ying)有(you)促進(jin)作用(yong)。

Q:我需要(yao)嚴(yan)格遵守(shou)5~15 min的酶(mei)切時間嗎？能(neng)夠(gou)延長反應時間嗎？

A:雷(lei)霆系(xi)列限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)經過改造(zao)可以將(jiang)酶(mei)切時間縮短至5~15 min。同(tong)樣(yang)也(ye)消(xiao)除了限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)的星(xing)活(huo)性(xing)（長時間反應(ying)造(zao)成(cheng)的非特(te)異性(xing)消(xiao)化），在說(shuo)明(ming)書中(zhong)告知的星(xing)活(huo)性(xing)出(chu)現(xian)的時間範圍(wei)內可以適當延長反應時間。

Q:我什麽(me)時候應當(dang)考(kao)慮星(xing)活(huo)性(xing)對於(yu)酶(mei)切反(fan)應(ying)的影響(xiang)？

A:如(ru)果(guo)額外(wai)的酶(mei)切條(tiao)帶(dai)對於(yu)實驗(yan)結(jie)果(guo)會(hui)產(chan)生影響(xiang)時我們(men)應當考慮星(xing)活(huo)性(xing)對於(yu)酶(mei)切反(fan)應(ying)的影響(xiang)。例如(ru)：進(jin)行(xing)基因(yin)型(xing)、突(tu)變(bian)型分析或克(ke)隆(long)時我們(men)應當避免(mian)星(xing)活(huo)性(xing)的產(chan)生。避免(mian)星(xing)活(huo)性(xing)的有效(xiao)方法：適當擴(kuo)大反(fan)應體(ti)積(ji)（較(jiao)小(xiao)的反應(ying)體(ti)積(ji)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)甘油體(ti)積(ji)達(da)到或超(chao)過總反(fan)應體(ti)積(ji)的5%）；不(bu)進(jin)行(xing)超(chao)長時間孵育(yu)（過夜(ye)消(xiao)化極(ji)易(yi)產(chan)生星(xing)活(huo)性(xing)）。

Q:有(you)哪些關(guan)鍵因(yin)素會(hui)導致(zhi)星(xing)活(huo)性(xing)？

A:長時間孵育(yu)、過量的酶(mei)、高(gao)甘油含(han)量（通常(chang)高(gao)於(yu)5%）、較(jiao)小(xiao)的反應(ying)體(ti)系(xi)等(deng)因(yin)素都(dou)會(hui)導致(zhi)星(xing)活(huo)性(xing)的產(chan)生。

Q:未(wei)經(jing)純化的PCR產(chan)物(wu)直接(jie)酶(mei)切要(yao)怎(zen)樣(yang)設定體(ti)系(xi)？

A:反(fan)應體(ti)系(xi)推(tui)薦由(you)這(zhe)些內(nei)容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相(xiang)應的限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊(qi)到30 μl。酶(mei)的用(yong)量根據PCR產(chan)物(wu)的濃度(du)而(er)定，只(zhi)加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應緩沖液的原因(yin)是(shi)PCR反(fan)應中(zhong)存(cun)在對應的鹽(yan)離子(zi)和(he)金(jin)屬(shu)離子(zi)，適當減少反(fan)應緩沖液的用(yong)量以保(bao)證最終(zhong)反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)的環境(jing)適宜(yi)限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)發揮(hui)功(gong)能(neng)。

Q:限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)簡並性(xing)識別(bie)位(wei)點壹(yi)定是(shi)回(hui)文的嗎？

A:大多(duo)數二型限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)的識別(bie)序列是(shi)回(hui)文的，而(er)且是(shi)特(te)定的堿基序列。然(ran)而(er)有些(xie)限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)具(ju)有(you)簡並性(xing)識別(bie)位(wei)點，也就是(shi)說(shuo)識別(bie)位(wei)點中(zhong)有壹(yi)個或(huo)以上的堿基對是非特異(yi)的（例如(ru)：BsrfI識(shi)別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於(yu)這樣(yang)的具(ju)有(you)簡並性(xing)識別(bie)位(wei)點的限(xian)制(zhi)性(xing)內切酶(mei)，只(zhi)要是(shi)符合要求(qiu)的序列皆(jie)能(neng)被識(shi)別(bie)並且(qie)被正確(que)地(di)切割(ge)（例如(ru)5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩個(ge)並(bing)不(bu)是回(hui)文的，仍(reng)然能(neng)被BsrFI識(shi)別(bie)並且(qie)切割(ge)）。