LightNing® AciI內(nei)切酶(mei)是(shi)壹(yi)系(xi)列(lie)經過基(ji)因(yin)工(gong)程(cheng)重(zhong)組(zu)的快速(su)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒(li) DNA、PCR 產(chan)物或(huo)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等的快速(su)酶(mei)切。所(suo)有 LightNing® 快速(su)內切酶(mei)在通(tong)用的 CutOne® 或 CutOne® Color Buffer 中都具(ju)有優良的活性，能(neng)夠(gou)在 5~15 分(fen)鐘內完(wan)成(cheng)酶(mei)切

LightNing® AciI內切酶(mei)組成(cheng)

特(te)性和(he)用(yong)法

LightNing® AciI內切酶(mei)，可在5~15 min內完(wan)成(cheng)反應

u 建議(yi)反應條件(jian)

1× CutOne®緩(huan)沖液(ye)；

37℃溫育(yu)；

參照“DNA 快速(su)酶(mei)切流(liu)程(cheng)"配(pei)制(zhi)反應體系(xi)。

u 失(shi)活條(tiao)件(jian)

80℃溫育(yu)20 min。

u 甲(jia)基(ji)化(hua)敏感性

對於被 CpG 甲(jia)基(ji)化(hua)的 DNA，剪(jian)切可(ke)能(neng)受阻(zu)。

u 存儲(chu)條件(jian)

-20℃

相關問答(da)

Q:為什(shen)麽(me)在CutOne® Buffer中加(jia)入HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在反應過程(cheng)中(zhong)需要(yao)HSA的參與，我們在CutOne® Buffer中添(tian)加(jia)了HSA，避免反應中額(e)外(wai)添(tian)加組(zu)分(fen)，使得(de)酶(mei)切反應更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的添加對於雷霆系(xi)列(lie)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的功能會(hui)產(chan)生什麽(me)樣(yang)的影響？

A:在我(wo)們的測試(shi)中(zhong)未(wei)曾(zeng)發(fa)現(xian)HSA對於雷霆系(xi)列(lie)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的功能有(you)任何(he)影響。在有(you)些(xie)情(qing)況下，對(dui)於部(bu)分(fen)的酶(mei)切反應有促進(jin)作(zuo)用。

Q:我需要(yao)嚴格遵守(shou)5~15 min的酶(mei)切時(shi)間嗎？能夠(gou)延長反應時(shi)間嗎？

A:雷霆系(xi)列(lie)限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)經(jing)過(guo)改(gai)造(zao)可以(yi)將酶(mei)切時(shi)間縮短(duan)至(zhi)5~15 min。同樣(yang)也(ye)消除了限(xian)制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的星活性（長時(shi)間反應造成(cheng)的非特(te)異(yi)性消化(hua)），在說明書中(zhong)告知(zhi)的星活性出(chu)現(xian)的時(shi)間範圍(wei)內(nei)可(ke)以(yi)適當(dang)延長反應時(shi)間。

Q:我什(shen)麽(me)時(shi)候應當考(kao)慮星(xing)活性對(dui)於酶(mei)切反應的影響？

A:如果額外(wai)的酶(mei)切條(tiao)帶(dai)對(dui)於實驗(yan)結果會產(chan)生影響時(shi)我們應當考(kao)慮星(xing)活性對(dui)於酶(mei)切反應的影響。例(li)如：進(jin)行基(ji)因(yin)型(xing)、突(tu)變型分(fen)析或克(ke)隆時(shi)我們應當避(bi)免星活性的產(chan)生。避免星活性的有效(xiao)方法(fa)：適(shi)當擴大(da)反應體積（較小(xiao)的反應體積容易造成(cheng)甘油體積達到(dao)或超過(guo)總反應體積的5%）；不(bu)進(jin)行超(chao)長時(shi)間孵(fu)育(yu)（過(guo)夜消化(hua)極(ji)易產(chan)生星活性）。

Q:有哪(na)些(xie)關(guan)鍵(jian)因(yin)素(su)會導(dao)致(zhi)星(xing)活性？

A:長時(shi)間孵(fu)育(yu)、過(guo)量(liang)的酶(mei)、高(gao)甘油含量（通(tong)常(chang)高(gao)於5%）、較小(xiao)的反應體系(xi)等(deng)因(yin)素(su)都會(hui)導(dao)致(zhi)星活性的產(chan)生。

Q:未(wei)經純化(hua)的PCR產(chan)物直(zhi)接酶(mei)切要(yao)怎樣設定體系(xi)？

A:反應體系(xi)推(tui)薦(jian)由(you)這些(xie)內(nei)容組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應的限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)、ddH2O補齊(qi)到(dao)30 μl。酶(mei)的用量根據(ju)PCR產(chan)物的濃度(du)而(er)定，只(zhi)加入2 μl反應緩(huan)沖液(ye)的原(yuan)因是(shi)PCR反應中存在對(dui)應的鹽離子(zi)和(he)金(jin)屬離子(zi)，適(shi)當減(jian)少反應緩(huan)沖液(ye)的用量以(yi)保證(zheng)最終(zhong)反應體系(xi)中(zhong)的環境(jing)適(shi)宜限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)發(fa)揮(hui)功能。

Q:限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)簡(jian)並性識(shi)別(bie)位點(dian)壹(yi)定是(shi)回(hui)文(wen)的嗎？

A:大(da)多數(shu)二(er)型(xing)限(xian)制(zhi)性內(nei)切酶(mei)的識別序列(lie)是(shi)回(hui)文(wen)的，而(er)且是(shi)特(te)定(ding)的堿基(ji)序列(lie)。然(ran)而(er)有些(xie)限(xian)制(zhi)性內(nei)切酶(mei)具(ju)有簡(jian)並性識(shi)別(bie)位點(dian)，也(ye)就(jiu)是(shi)說識別(bie)位點(dian)中(zhong)有(you)壹(yi)個(ge)或以(yi)上的堿基(ji)對(dui)是(shi)非特(te)異(yi)的（例如：BsrfI識別(bie)5’RCCGGY, R=A/G, Y=C/T）。對於這樣(yang)的具(ju)有簡(jian)並性識(shi)別(bie)位點(dian)的限制(zhi)性內(nei)切酶(mei)，只(zhi)要是(shi)符(fu)合(he)要(yao)求的序列(lie)皆(jie)能(neng)被識別(bie)並且被(bei)正確地(di)切割（例如5’ ACCGGC, 5’ ACCGGT, 5’ GCCGGC, 和(he)5’ GCCGGT，其(qi)中(zhong)兩(liang)個(ge)並不(bu)是(shi)回(hui)文(wen)的，仍然(ran)能(neng)被(bei)BsrFI識別(bie)並且切割）。