LightNing® AccI內(nei)切酶(mei)是(shi)壹系列(lie)經(jing)過基(ji)因工程重(zhong)組(zu)的(de)快(kuai)速限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)，適(shi)用(yong)於質(zhi)粒 DNA、PCR 產(chan)物(wu)或(huo)基因組(zu) DNA 等的(de)快(kuai)速酶(mei)切。所(suo)有 LightNing® 快(kuai)速內(nei)切酶(mei)在通(tong)用(yong)的(de) CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具有優良(liang)的(de)活(huo)性，能(neng)夠(gou)在 5~15 分鐘內(nei)完成(cheng)酶(mei)切。

LightNing® AccI內(nei)切酶(mei)組(zu)成(cheng)

特(te)性(xing)和用(yong)法

LightNing® AccI內(nei)切酶(mei)，可(ke)在5~15 min內(nei)完成(cheng)反(fan)應(ying)

建(jian)議反(fan)應(ying)條(tiao)件(jian)

1× CutOne®緩沖(chong)液(ye)；

37℃溫(wen)育(yu)；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速酶(mei)切流(liu)程(cheng)"配制(zhi)反(fan)應(ying)體系。

失(shi)活(huo)條件(jian)

80℃溫(wen)育(yu)20 min。

甲(jia)基化(hua)敏感(gan)性(xing)

對(dui)於被 CpG 甲(jia)基化(hua)的(de) DNA，剪切可(ke)能(neng)受阻(zu)。

存儲條件(jian)

-20℃

相關(guan)問答(da)

Q:為什麽在CutOne® Buffer中(zhong)加(jia)入(ru)HSA？

A:壹(yi)些(xie)酶(mei)在反(fan)應(ying)過程(cheng)中(zhong)需要(yao)HSA的(de)參(can)與(yu)，我(wo)們(men)在CutOne® Buffer中(zhong)添(tian)加(jia)了HSA，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)中(zhong)額(e)外添(tian)加(jia)組分，使得酶(mei)切反(fan)應(ying)更(geng)加(jia)便(bian)捷(jie)。

Q:HSA的(de)添(tian)加(jia)對於雷霆系列(lie)限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能(neng)會(hui)產(chan)生什麽樣的(de)影(ying)響(xiang)？

A:在我(wo)們(men)的(de)測(ce)試(shi)中(zhong)未(wei)曾發(fa)現HSA對(dui)於雷霆系列(lie)限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)功(gong)能(neng)有任何(he)影響(xiang)。在有些(xie)情況下(xia)，對(dui)於部分的(de)酶(mei)切反(fan)應(ying)有促進作(zuo)用(yong)。

Q:我(wo)需要(yao)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守(shou)5~15 min的(de)酶(mei)切時(shi)間(jian)嗎(ma)？能(neng)夠(gou)延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)嗎(ma)？

A:雷(lei)霆系列(lie)限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)經(jing)過改造(zao)可(ke)以將(jiang)酶(mei)切時(shi)間(jian)縮短至(zhi)5~15 min。同樣(yang)也消除(chu)了(le)限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)的(de)星活(huo)性（長(chang)時(shi)間(jian)反(fan)應(ying)造(zao)成(cheng)的(de)非特異(yi)性(xing)消(xiao)化(hua)），在說明書(shu)中(zhong)告(gao)知(zhi)的(de)星活(huo)性出(chu)現(xian)的(de)時(shi)間(jian)範圍(wei)內(nei)可以(yi)適(shi)當延(yan)長(chang)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)。

Q:我(wo)什麽時候應(ying)當考(kao)慮星活(huo)性對(dui)於酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)？

A:如果額(e)外的(de)酶(mei)切條(tiao)帶(dai)對(dui)於實驗結(jie)果(guo)會產生影(ying)響(xiang)時(shi)我(wo)們(men)應(ying)當考(kao)慮星活(huo)性對(dui)於酶(mei)切反(fan)應(ying)的(de)影(ying)響(xiang)。例(li)如：進行基(ji)因型(xing)、突變(bian)型分析或(huo)克隆(long)時我(wo)們(men)應(ying)當避(bi)免(mian)星活(huo)性的(de)產(chan)生。避(bi)免(mian)星活(huo)性的(de)有效方(fang)法：適(shi)當擴大反(fan)應(ying)體積(ji)（較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體積(ji)容(rong)易(yi)造(zao)成(cheng)甘油(you)體積(ji)達(da)到或超(chao)過總(zong)反(fan)應(ying)體積(ji)的(de)5%）；不(bu)進行超(chao)長時間孵育(yu)（過夜消化(hua)極易(yi)產生星活(huo)性）。

Q:有哪(na)些(xie)關(guan)鍵因素(su)會(hui)導(dao)致(zhi)星活(huo)性？

A:長(chang)時(shi)間孵育、過量的(de)酶(mei)、高甘油(you)含量（通(tong)常高於5%）、較小(xiao)的(de)反(fan)應(ying)體系等因素(su)都(dou)會導(dao)致(zhi)星活(huo)性的(de)產(chan)生。

Q:未(wei)經純(chun)化的(de)PCR產(chan)物(wu)直接酶(mei)切要(yao)怎(zen)樣設(she)定(ding)體系？

A:反(fan)應(ying)體系推薦(jian)由這(zhe)些(xie)內(nei)容(rong)組(zu)成(cheng)：10 μl PCR產(chan)物(wu)、2 μl 10×CutOneTM Buffer、1~2 μl相應(ying)的(de)限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)、ddH2O補(bu)齊(qi)到30 μl。酶(mei)的(de)用(yong)量根據(ju)PCR產(chan)物(wu)的(de)濃度而定(ding)，只加(jia)入(ru)2 μl反(fan)應(ying)緩沖(chong)液(ye)的(de)原(yuan)因是(shi)PCR反(fan)應(ying)中(zhong)存在對(dui)應(ying)的(de)鹽(yan)離(li)子和金(jin)屬(shu)離(li)子，適當減少(shao)反(fan)應(ying)緩沖(chong)液(ye)的(de)用(yong)量以保證(zheng)最終反(fan)應(ying)體系中(zhong)的(de)環境(jing)適(shi)宜限制(zhi)性(xing)內(nei)切酶(mei)發(fa)揮功(gong)能(neng)。