ApaLI內切(qie)酶（ApaLI restriction enzyme）是(shi)壹種(zhong)常(chang)用(yong)的限(xian)制性內切(qie)酶，屬(shu)於Ⅱ型內切(qie)酶家(jia)族(zu)。ApaLI內切(qie)酶能(neng)夠識(shi)別(bie)並切(qie)割(ge)DNA中特定(ding)的核苷酸(suan)序(xu)列，具(ju)有特定(ding)的切(qie)割(ge)位置(zhi)和特異(yi)性。LightNing® 快速(su)內切(qie)酶是(shi)壹系(xi)列經(jing)過(guo)基(ji)因(yin)工(gong)程(cheng)重(zhong)組(zu)的快速(su)限(xian)制性內切(qie)酶，適用於質(zhi)粒 DNA、PCR 產(chan)物(wu)或(huo)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等(deng)的快速(su)酶切(qie)。

ApaLI內切(qie)酶

ApaLI內切(qie)酶（ApaLI restriction enzyme）是(shi)壹種(zhong)常(chang)用(yong)的限(xian)制性內切(qie)酶，屬(shu)於Ⅱ型內切(qie)酶家(jia)族(zu)。ApaLI內切(qie)酶能(neng)夠識(shi)別(bie)並切(qie)割(ge)DNA中特定(ding)的核苷酸(suan)序(xu)列，具(ju)有特定(ding)的切(qie)割(ge)位置(zhi)和特異(yi)性。本(ben)文(wen)將(jiang)對ApaLI內切(qie)酶的基(ji)本(ben)特性、作用機制、應(ying)用領(ling)域(yu)等方(fang)面(mian)進行詳(xiang)細介(jie)紹(shao)。

ApaLI內切(qie)酶 的基(ji)本(ben)特性：

ApaLI內切(qie)酶主要(yao)識(shi)別(bie)並切(qie)割(ge)DNA中的5'-GTGCAC-3'序(xu)列，切(qie)位(wei)為該序(xu)列的ApaLI酶切(qie)位(wei)點。該酶切(qie)位(wei)點的特異(yi)性使ApaLI內切(qie)酶在(zai)DNA分子中具(ju)有高度(du)特異(yi)性，能夠精確切(qie)割(ge)含(han)有特定(ding)序(xu)列的DNA片段(duan)。ApaLI內切(qie)酶的活性受(shou)到環(huan)境因(yin)素(su)（如(ru)pH值(zhi)、離(li)子濃度(du)等(deng)）的影響(xiang)，因(yin)此(ci)在(zai)實(shi)驗(yan)操作中(zhong)需(xu)要註(zhu)意(yi)調(tiao)節(jie)適宜(yi)的反(fan)應(ying)條(tiao)件。

ApaLI內切(qie)酶的作用機制：

ApaLI內切(qie)酶是(shi)壹種(zhong)雙(shuang)鏈(lian)DNA內切(qie)酶，通(tong)過識(shi)別(bie)特定(ding)的核苷酸(suan)序(xu)列，在(zai)該序(xu)列的特定(ding)位(wei)置(zhi)引發DNA鏈(lian)的切(qie)割(ge)反(fan)應(ying)。ApaLI內切(qie)酶在(zai)酶切(qie)位(wei)點周圍(wei)與DNA分(fen)子形(xing)成復合(he)物(wu)，通過水解作用將(jiang)DNA鏈(lian)切(qie)斷(duan)，產生兩個具(ju)有粘性末端的DNA片段(duan)。這(zhe)些粘(zhan)性末端可(ke)用(yong)於DNA片段(duan)的連(lian)接、重組等進壹步(bu)實驗(yan)操作。

ApaLI內切(qie)酶的應(ying)用領(ling)域(yu)：

ApaLI內切(qie)酶在(zai)分子生物(wu)學領(ling)域(yu)廣泛(fan)應(ying)用於DNA片段(duan)的切(qie)割(ge)、重組、連(lian)接等實驗操作中(zhong)。通過(guo)ApaLI內切(qie)酶的作用，可(ke)以在DNA分(fen)子中特異(yi)性地切(qie)割(ge)出含(han)有目標(biao)序(xu)列的片段(duan)，進而進行進壹步(bu)的DNA克隆、測序(xu)、PCR等(deng)實(shi)驗(yan)操作。ApaLI內切(qie)酶還(hai)常(chang)用(yong)於構(gou)建(jian)重(zhong)組(zu)質(zhi)粒、定(ding)向(xiang)基(ji)因(yin)突(tu)變等(deng)研(yan)究領域(yu)，為研究人員提(ti)供了強(qiang)大(da)的工具(ju)和手段(duan)。

LightNing® 快(kuai)速(su)內切(qie)酶是(shi)壹系(xi)列經(jing)過(guo)基(ji)因(yin)工(gong)程(cheng)重(zhong)組(zu)的快速(su)限(xian)制性內切(qie)酶，適用於質(zhi)粒 DNA、PCR 產(chan)物(wu)或(huo)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 等(deng)的快速(su)酶切(qie)。所(suo)有 LightNing® 快速(su)內切(qie)酶在(zai)通用的 CutOne® 或(huo) CutOne® Color Buffer 中(zhong)都(dou)具(ju)有優(you)良的活性，能夠在 5~15 分鐘(zhong)內完(wan)成酶切(qie)。此(ci)外，百時(shi)美(mei)去磷(lin)酸(suan)化(hua)、連(lian)接試劑在(zai) CutOne® Buffer 中(zhong)均具(ju)有 100% 活性，支持壹管(guan)化(hua)反(fan)應(ying)，提(ti)升(sheng)“酶切(qie) - 修(xiu)飾(shi) - 連(lian)接"的體(ti)驗。

CutOne® Color Buffer包(bao)括(kuo)紅色和黃色示(shi)蹤(zong)染(ran)料(liao)，可(ke)將(jiang)產物(wu)直接用於凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳。CutOne® Color Buffer 的紅色染料(liao)與 2500 bp 雙(shuang)鏈(lian) DNA 片段(duan)在(zai) 1% 瓊脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)中(zhong)遷(qian)移速(su)率(lv)接近(jin)；黃色染(ran)料(liao)與 10 bp 雙(shuang)鏈(lian) DNA 片段(duan)在(zai) 1% 瓊脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)中(zhong)遷(qian)移速(su)率(lv)接近(jin)。

特性和用(yong)法(fa)

ApaLI 內切(qie)酶可(ke)以快速(su)內切(qie)酶，可(ke)在(zai)5~15 min內完(wan)成反(fan)應(ying)

建(jian)議(yi)反(fan)應(ying)條(tiao)件

1× CutOne®緩(huan)沖液；

37℃溫(wen)育；

參(can)照(zhao)“DNA 快(kuai)速(su)酶切(qie)流(liu)程(cheng)"配(pei)制反(fan)應(ying)體(ti)系。

失(shi)活條(tiao)件

80℃溫(wen)育20 min。

甲基(ji)化(hua)敏感性

對於被 CpG 甲基(ji)化(hua)的 DNA，剪(jian)切(qie)可(ke)能(neng)受(shou)阻(zu)，對於被 EcoKI 甲基(ji)化(hua)的 DNA，剪(jian)切(qie)可(ke)能(neng)受(shou)阻(zu)。

產品組成(cheng)