CRISPR基(ji)因(yin)敲除試劑(ji)盒(he)(Cas9x3.0)包(bao)含2個(ge)Cas9X™算(suan)法(fa)優化(hua)的(de) gRNA序(xu)列(lie)載體(ti)和(he)特(te)異(yi)的(de)同(tong)源(yuan)DNA片(pian)段(duan)，DNA片(pian)段(duan)含有抗性和(he)GFP 熒光(guang)，並攜(xie)帶有壹段(duan)特(te)殊(shu)同(tong)源(yuan)序列(lie)，不僅可(ke)為(wei)後(hou)續基因(yin)敲除細胞的(de)篩選提供藥物(wu)抗性，也可(ke)以(yi)通過(guo)流式篩選獲得，包(bao)括(kuo)了人(ren)(Human) 和(he)小(xiao)鼠(Mouse)的(de)所(suo)有基因(yin)的(de)敲(qiao)除。

CRISPR基因(yin)敲除試劑(ji)盒(he)

| 產(chan)品(pin)名(ming)稱(cheng)：CRISPR基因(yin)敲除試劑(ji)盒(he)

| 產(chan)品(pin)貨(huo)號(hao)：Cas9x3.0

| 產(chan)品(pin)介(jie)紹

該(gai)試劑(ji)盒(he)(Cas9x3.0)是(shi)海(hai)星(xing)生(sheng)物(wu)在(zai)多(duo)年基因(yin)編(bian)輯服(fu)務的(de)基(ji)礎(chu)上研(yan)發(fa)的(de)高效(xiao)快捷(jie)的(de)基(ji)因(yin)敲除試劑(ji)盒(he)。包(bao)括(kuo)了人(ren)(Human) 和(he)小(xiao)鼠(Mouse)的(de)所(suo)有基因(yin)的(de)敲(qiao)除。

Cas9x3.0試劑(ji)盒(he)包(bao)含2個(ge)Cas9X™算(suan)法(fa)優化(hua)的(de) gRNA序(xu)列(lie)載體(ti)和(he)特(te)異(yi)的(de)同(tong)源(yuan)DNA片(pian)段(duan)，DNA片(pian)段(duan)含有抗性和(he)GFP 熒光(guang)，並攜(xie)帶有壹段(duan)特(te)殊(shu)同(tong)源(yuan)序列(lie)，不僅可(ke)為(wei)後(hou)續基因(yin)敲除細胞的(de)篩選提供藥物(wu)抗性，也可(ke)以(yi)通過(guo)流式篩選獲得敲(qiao)除細胞。

Cas9x3.0試劑(ji)盒(he)對分(fen)裂(lie)細胞和(he)非(fei)分(fen)裂(lie)細胞都有非常(chang)高的(de)敲(qiao)除效率(lv)。

| 產(chan)品(pin)特(te)點(dian)

敲除高效(xiao)率(lv)——比病(bing)毒(du)敲除方式更實(shi)惠(hui)、更(geng)穩定、更(geng)安(an)全(quan)

實(shi)驗(yan)超簡單(dan)——操(cao)作流程簡單(dan)，能(neng)養(yang)好細胞就能(neng)做(zuo)基因(yin)敲除

| 產(chan)品(pin)構(gou)成(cheng)

| 產(chan)品(pin)原理

Cas9x3.0試劑(ji)盒(he)依(yi)據(ju)HDR和(he) NHEJ修(xiu)復原理進行(xing)產(chan)品(pin)開發(fa)。

優(you)化(hua)的(de)gRNA引(yin)導(dao)Cas9蛋白(bai)對特定位(wei)點(dian)進行切(qie)割，產(chan)生(sheng)DNA 雙(shuang)鏈(lian)斷(duan)裂(lie)（Double-Strand Break, DSB），並(bing)誘導(dao)同(tong)源(yuan)線性化(hua)DNA片(pian)段(duan)（攜(xie)帶抗性基(ji)因(yin)和(he)熒光(guang)基因(yin)）整合(he)到(dao)該(gai)位點(dian)，再(zai)通過(guo)抗性藥物(wu)（puroR ）或熒光(guang)（GFP）進行(xing)篩選，從而(er)獲得基(ji)因(yin)敲除的(de)細胞和(he)單(dan)克(ke)隆。

該(gai)試劑(ji)盒(he) (Cas9x3.0) 的(de)敲(qiao)除效率(lv)是(shi)傳統(tong)基因(yin)敲除策略(lve)的(de)2~5倍(bei)。因(yin)為的(de)除策略(lve)是(shi)通過(guo)在基(ji)因(yin)位導(dao)入(ru) Donor DNA（ puroR & GFP ）從而(er)達(da)到(dao)敲除目的(de)蛋(dan)白(bai)效(xiao)果(guo)，同(tong)時也可(ke)以(yi)在DSB位點(dian)導(dao)入(ru)序(xu)列(lie)移碼(ma)，導(dao)致蛋(dan)白翻(fan)譯提前(qian)終(zhong)止(zhi)。這(zhe)兩個(ge)原理的(de)疊加，可(ke)以(yi)輕(qing)松獲得“等(deng)位基(ji)因(yin)"純(chun)合(he)敲(qiao)除細胞株(zhu)。

| 應(ying)用(yong)流程

該(gai)基因(yin)敲除試劑(ji)盒(he) (Cas9x3.0)操(cao)作步(bu)驟(脂(zhi)質體(ti)轉(zhuan)染法(fa))：

本(ben)試劑(ji)盒(he)建議(yi)采用(yong)轉(zhuan)染試劑(ji)是(shi)Lipofectamine® 2000 Reagent (cat#11668-030)，具(ju)體(ti)參照轉(zhuan)染試劑(ji)說(shuo)明(ming)材(cai)料。不同(tong)類型(xing)的(de)轉(zhuan)染試劑(ji)，請(qing)按照制造(zao)商(shang)的(de)操(cao)作說明(ming)進(jin)行(xing)轉(zhuan)染。

註(zhu)意(yi)：懸(xuan)浮細胞不推薦(jian)使用(yong)脂質(zhi)體(ti)轉(zhuan)染法(fa)。

基因(yin)敲除試劑(ji)盒(he) (Cas9x3.0)操(cao)作步(bu)驟(電(dian)轉(zhuan)化法(fa))：

本(ben)試劑(ji)盒(he)推薦(jian)Neon轉(zhuan)染系(xi)統(tong)，具(ju)體(ti)參照設(she)備對每種細胞參數(shu)。不同(tong)類型(xing)的(de)電(dian)轉(zhuan)設備(bei)，請按照制造(zao)商(shang)的(de)操(cao)作說明(ming)進(jin)行(xing)優(you)化。

註意(yi)：懸(xuan)浮細胞推薦(jian)使用(yong)電轉(zhuan)化法(fa)。

該(gai)基因(yin)敲除試劑(ji)盒(he) (Cas9x3.0)配有eGFP對照DNA，可(ke)以(yi)按照實(shi)際使用(yong)的(de)方法(fa)和(he)細胞情(qing)況(kuang)，進行實(shi)驗(yan)摸索(suo)，建議(yi)48小(xiao)時後(hou)的(de)目的(de)細胞的(de)eGFP的(de)陽(yang)性率(lv)不低於50%， Cas9x3.0試劑(ji)盒(he)才(cai)能(neng)獲得良(liang)好的(de)敲(qiao)除效果(guo)。