天(tian)根DNA純化膠(jiao)回收(shou)試劑(ji)盒 DP214采用緩(huan)沖(chong)體系和離心吸(xi)附(fu)柱，既(ji)可(ke)從TAE 或TBE 瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)中(zhong)回收(shou)DNA 片(pian)段(duan)，又可(ke)用於(yu)直接(jie)純化PCR 產物(wu)，能(neng)夠滿(man)足多(duo)種實驗(yan)需(xu)要(yao)。溶膠(jiao)液PC 中(zhong)含有(you)pH 指(zhi)示劑，可(ke)根(gen)據顏(yan)色來判斷(duan)溶膠(jiao)狀(zhuang)態。使用本產品(pin)可(ke)回(hui)收(shou)100 bp- 8 kb 大(da)小的DNA 片(pian)段(duan)，回收(shou)率(lv) 可(ke)達(da)80%。使用本試劑(ji)盒回收(shou)的(de)DNA 可(ke)直接(jie)用於(yu)連接(jie)、轉化、酶切、測序等(deng)分(fen)子(zi)生(sheng)物學(xue)實(shi)驗(yan)。

天根(gen)DNA純化膠(jiao)回收(shou)試劑(ji)盒 DP214

產品(pin)簡介(jie)：

本(ben)試劑(ji)盒采用緩(huan)沖(chong)體系和離心吸(xi)附(fu)柱，既(ji)可(ke)從TAE 或TBE 瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)中(zhong)回收(shou)DNA 片(pian)段(duan)，又可(ke)用於(yu)直接(jie)純化PCR 產物(wu)，能(neng)夠滿(man)足多(duo)種實驗(yan)需(xu)要(yao)。溶膠(jiao)液PC 中(zhong)含有(you)pH 指(zhi)示劑，可(ke)根(gen)據顏(yan)色來判斷(duan)溶膠(jiao)狀(zhuang)態。使用本產品(pin)可(ke)回(hui)收(shou)100 bp- 8 kb 大(da)小的DNA 片(pian)段(duan)，回收(shou)率(lv) 可(ke)達(da)80%。使用本試劑(ji)盒回收(shou)的(de)DNA 可(ke)直接(jie)用於(yu)連接(jie)、轉化、酶切、測序等(deng)分(fen)子(zi)生(sheng)物學(xue)實(shi)驗(yan)。

產(chan)品(pin)特點(dian)：

■ 兼(jian)容(rong)性(xing)強：既(ji)可(ke)用作DNA 產(chan)物直接(jie)純化，又可(ke)用作DNA 凝膠(jiao)回收(shou)。

■ 操(cao)作簡便、可(ke)回(hui)收(shou)膠(jiao)體積大(da)：可(ke)按(an)照膠(jiao)塊(kuai)與溶膠(jiao)液等比進行(xing)溶膠(jiao)。

■ 穩定(ding)、可(ke)靠(kao)：配(pei)有(you)指(zhi)示劑，可(ke)直觀(guan)判斷(duan)影響(xiang)DNA 吸(xi)附(fu)的(de)pH 值(zhi)，又可(ke)判斷(duan)DNA 與膜(mo)是(shi)否(fou)充分(fen)結(jie)合，提(ti)高(gao)回收(shou)效率(lv)。

天根(gen)DNA純化膠(jiao)回收(shou)試劑(ji)盒 DP214

產品(pin)組成：

DP214-02 (50 preps)：

溶液(ye)PC(Buffer PC) 25 ml

平(ping)衡液(ye)BL(Buffer BL) 30 ml

漂(piao)洗液PW(Buffer PW) 15 ml

洗脫緩(huan)沖(chong)液EB(Buffer EB) 15 ml 

吸(xi)附(fu)柱CB2(Spin Columns CB2)50個(ge) 50個 5 個

收(shou)集管(guan)(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切(qie)膠(jiao)器(qi)(Gel Cutter) 。

DP214-03 (200preps)：

溶液(ye)PC(Buffer PC) 100 ml

平(ping)衡液(ye)BL(Buffer BL) 120 ml

漂(piao)洗液PW(Buffer PW) 50 ml

洗脫緩(huan)沖(chong)液EB(Buffer EB) 30 ml 

吸(xi)附(fu)柱CB2(Spin Columns CB2) 200個(ge) 200個 20個

收(shou)集管(guan)(2 ml)(Collection Tubes (2 ml)) 切(qie)膠(jiao)器(qi)(Gel Cutter) 。

天根(gen)DNA純化膠(jiao)回收(shou)試劑(ji)盒 DP214

儲 存(cun) 條(tiao) 件

 該(gai)試劑(ji)盒所有(you)組分(fen)置(zhi)於(yu)室(shi)溫(15-30℃)幹燥條(tiao)件下，可(ke)保(bao)存(cun)12個(ge)月(yue)。若(ruo)溶液(ye)產(chan)生(sheng)沈(chen) 澱(dian)，使(shi)用前可(ke)在37℃水(shui)浴中(zhong)預熱10min以(yi)溶解(jie)沈(chen)澱(dian)，不(bu)影(ying)響(xiang)效果。

產(chan) 品(pin) 簡 介(jie)

本(ben)試劑(ji)盒采用離心吸(xi)附(fu)柱，既(ji)能從TAE或TBE瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)中(zhong)回收(shou)DNA片(pian)段(duan)，又 能用於(yu)直接(jie)純化PCR產物(wu)，滿(man)足多(duo)種實驗(yan)需(xu)要(yao)。溶液(ye)PC中(zhong)含有(you)pH指(zhi)示劑，可(ke)根(gen)據顏(yan)色來 判斷(duan)溶膠(jiao)或PCR產(chan)物(wu)回收(shou)是(shi)否(fou)達到(dao)最(zui)佳狀(zhuang)態。使用本產品(pin)可(ke)回(hui)收(shou)100 bp-8 kb大(da)小的DNA 片(pian)段(duan)，回收(shou)率(lv)可(ke)達(da)80%,大於(yu)8 kb的(de)DNA片段(duan)純化建議使用我公(gong)司(si)的(de)瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)回收(shou)試劑(ji) 盒DP208/209或DNA產(chan)物(wu)純化試劑(ji)盒DP203/204。每個離心吸(xi)附(fu)柱每次(ci)可(ke)吸(xi)附(fu)的(de)DNA量(liang)為 10   μg。

使(shi)用本試劑(ji)盒回收(shou)的(de)DNA可(ke)適(shi)用於(yu)各種常規(gui)操作，包括(kuo)酶切、PCR、測序、文庫(ku)篩(shai)選(xuan)、 連接(jie)和轉化等實(shi)驗(yan)。

註 意(yi) 事(shi)  項(xiang)    請務必在使用本試劑(ji)盒之(zhi)前閱(yue)讀(du)此註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)。

1. 平衡液(ye)BL的(de)加(jia)入能夠改(gai)善(shan)吸(xi)附(fu)柱的(de)吸(xi)附(fu)能(neng)力(li)並提高(gao)吸(xi)附(fu)柱的(de)均壹性(xing)和穩定(ding)性(xing)，消除(chu)高(gao)溫 /潮(chao)濕或其(qi)他(ta)不良(liang)環境因素(su)對(dui)吸(xi)附(fu)柱造成的(de)影(ying)響(xiang)。使用前請先檢(jian)查(zha)平(ping)衡液(ye)BL是(shi)否(fou)出現(xian)渾(hun) 濁(zhuo)，如(ru)有(you)混濁(zhuo)現(xian)象，可(ke)在37℃水(shui)浴中(zhong)加(jia)熱幾分(fen)鐘，即(ji)可(ke)恢(hui)復澄清(qing)。

2. 溶液(ye)PC含(han)有(you)pH指(zhi)示劑，為黃(huang)色，指(zhi)示pH≤7.5。

天根(gen)試劑(ji)盒-DNA純化膠(jiao)回收(shou)試劑(ji)盒-DP214操 作 步(bu) 驟(zhou)

使用前請先在漂洗液PW中(zhong)加(jia)入無(wu)水(shui)乙醇(chun)，加(jia)入體積請(qing)參(can)照(zhao)瓶(ping)上(shang)的標簽(qian)。

壹 、從 瓊 脂(zhi) 糖 凝 膠(jiao) 中(zhong) 回 收(shou) D N A 片(pian) 段(duan)

1. 柱平(ping)衡步(bu)驟(zhou)：向吸(xi)附(fu)柱CB2中(zhong)(  吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)) 加(jia)入500μl平衡液(ye)BL,12 .000 rpm  (~13.400×g )離(li)心1 min,倒掉(diao)收(shou)集管(guan)中(zhong)的廢液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱重(zhong)新放回(hui)收(shou)集管(guan)中(zhong)。   （請 使 用 當(dang)天(tian)處(chu)理過的(de)柱子(zi))

2. 將(jiang)單 壹(yi) 的目(mu)的DNA條(tiao)帶從瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)中(zhong)切下 l盡量(liang)切(qie)除(chu)多(duo)余(yu)部(bu)分(fen)) 放入幹凈(jing)的(de)離心(xin)管(guan) 中(zhong)，稱取(qu)重(zhong)量。

註意(yi)：使用切膠(jiao)器(qi)(OSE-GC)切(qie)膠(jiao)時，切膠(jiao)器(qi)口(kou)對準瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)中(zhong)

的DNA條帶下壓切割(ge)。切膠(jiao)完成後，推動(dong)中(zhong)心桿，將(jiang)膠(jiao)塊(kuai)推入幹凈(jing)

的(de)離心(xin)管(guan)中(zhong)。根據凝膠(jiao)膠(jiao)孔寬(kuan)度(du)可(ke)進(jin)行單次(ci)和連續切(qie)割(ge)。

3. 向膠(jiao)塊(kuai)中(zhong)加(jia)入等倍(bei)體積溶液(ye)PC(如(ru)果凝膠(jiao)重為0.1 g,其(qi)體積可(ke)視(shi)為100 μl,則(ze)加(jia)入100 μl PC溶液(ye)。使(shi)用切膠(jiao)器(qi)切(qie)割(ge)1%的瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)，單塊(kuai)重量約為0.06 g,實(shi)際(ji)膠(jiao)塊(kuai)重量與凝膠(jiao) 濃度(du)及厚度(du)相(xiang)關),50℃水(shui)浴放(fang)置(zhi)10 min左右(you)，其(qi)間不斷溫和地上(shang)下(xia)翻(fan)轉離(li)心(xin)管(guan)，以(yi)確 保(bao)膠(jiao)塊(kuai)充分(fen)溶解(jie)。  ( 若膠(jiao)塊(kuai)的體積過大(da)，可(ke)事(shi)先將(jiang)膠(jiao)塊(kuai)切成碎(sui)塊(kuai))

註意(yi)：對於(yu)回(hui)收(shou)<150 bp的(de)小片段(duan)可(ke)將(jiang)溶液(ye)PC的(de)體積增(zeng)加(jia)到(dao)3倍以(yi)提(ti)高(gao)回收(shou)率(lv)；膠(jiao)塊(kuai)溶解(jie)後最(zui)好將(jiang)溶液(ye)溫(wen)度(du)降(jiang)至(zhi)室溫再上柱，因(yin)為吸(xi)附(fu)柱在室溫(wen)時結(jie)合DNA的(de)能力(li)較(jiao)強。凝膠(jiao)融解(jie)後應(ying)呈現(xian)黃(huang)色(se)，即(ji)可(ke)進(jin)行後續操(cao)作。如(ru)果膠(jiao)融解(jie)後溶液(ye)的(de)顏(yan)色為桔(ju)紅色(se) 或紫(zi)色(se)，請使(shi)用10 μl 3M乙酸(suan)鈉(na)(pH 5.0)將(jiang)溶液(ye)的(de)顏(yan)色調(tiao)為黃(huang)色後再進行(xing)後續操(cao)作。

(溶液(ye)PC中(zhong)含有(you)pH指(zhi)示劑，當(dang)pH≤7.5時溶液(ye)的(de)顏(yan)色為黃(huang)色，此(ci)時DNA才能(neng)夠有(you)效的與(yu) 膜結(jie)合，當(dang)pH值(zhi)偏高(gao)時溶液(ye)的(de)顏(yan)色變為桔(ju)紅色(se)和紫色，需(xu)要(yao)進(jin)行調(tiao)整。)

4. 將(jiang)上壹(yi) 步所(suo)得(de)溶液(ye)加(jia)入壹個(ge)吸(xi)附(fu)柱CB2中(zhong)( 吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)) ,12,000  rpm(~13,400×g)離心1 min,倒掉(diao)收(shou)集管(guan)中(zhong)的廢液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)。

5. 向吸(xi)附(fu)柱CB2中(zhong)加(jia)入600 μl漂洗液PW(使(shi)用前請先檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)已加(jia)入無(wu)水(shui)乙醇(chun)) ,12.000  rpm (~13,400×g)離(li)心1 min,倒(dao)掉(diao)收(shou)集管(guan)中(zhong)的廢液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)。

註意(yi)：如(ru)果回(hui)收(shou)的(de)DNA是(shi)用於(yu)鹽(yan)敏感的(de)實(shi)驗，例如(ru)平(ping)末(mo)端(duan)連接(jie)實驗(yan)或直接(jie)測序，建(jian)議PW 加(jia)入後靜置(zhi)2-5 min再離(li)心(xin)。

6. 重(zhong)復操作步(bu)驟(zhou)5

7. 將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量(liang)除(chu)去(qu)漂洗液。將(jiang) 吸(xi)附(fu)柱置(zhi)於(yu)室(shi)溫放置(zhi)數(shu)分(fen)鐘，晾(liang)幹(gan)。

註(zhu)意(yi)：漂洗液中(zhong)乙醇(chun)的(de)殘留會(hui)影(ying)響(xiang)後續的(de)酶反(fan)應(ying)(酶切、PCR等(deng))實驗。

8. 將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)入壹個(ge)幹(gan)凈離(li)心管(guan)中(zhong)， 向吸(xi)附(fu)膜(mo)中(zhong)間位置(zhi)懸空滴(di)加(jia)適量(liang)) 的洗脫緩(huan)沖(chong)液 EB,    (如(ru)果回(hui)收(shou)的(de)目(mu)的片(pian)段(duan)>4 kb,則洗脫緩(huan)沖(chong)液EB應(ying)置(zhi)於(yu)65-70℃水(shui)浴預(yu)熱),室(shi)溫(wen)放 置(zhi)2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心(xin)2 min,收(shou)集DNA溶液(ye)。

註(zhu)意(yi)：洗脫液的(de)體積不(bu)應(ying)少於(yu)30  ,體積過少(shao)會(hui)影(ying)響(xiang)回收(shou)的(de)效率(lv)。洗脫 液的(de)pH值(zhi)對於(yu) 洗脫效率(lv)有(you)較(jiao)大影(ying)響(xiang)。若(ruo)後續做(zuo)測序，需(xu)使(shi)用ddH2O做(zuo)洗脫液，並保(bao)證其(qi)pH值(zhi)在7.0-8.5  範圍內(nei)，pH值(zhi)低於(yu)7.0會(hui)降(jiang)低(di)洗脫效率(lv)；且(qie)DNA產物(wu)應(ying)保(bao)存(cun)在-20℃,以防DNA降(jiang)解(jie)。為

1  了(le)提高(gao)DNA的回(hui)收(shou)量(liang)，可(ke)將(jiang)離心(xin)得到(dao)的溶液(ye)重(zhong)新加(jia)回離(li)心吸(xi)附(fu)柱中(zhong)，室溫放置(zhi)2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心(xin)2 min,將(jiang)DNA溶液(ye)收(shou)集到(dao)離心(xin)管(guan)中(zhong)。

二 、 從 P C R 反(fan) 應(ying) 液 或 酶 切 反(fan) 應(ying) 液 中(zhong) 回 收(shou) D N A

1. 柱平(ping)衡步(bu)驟(zhou)：向吸(xi)附(fu)柱CB2中(zhong)(吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong))加(jia)入500 μl的平(ping)衡液(ye)BL,12,000 rpm (~13,400×g )離(li)心1 min,倒掉(diao)收(shou)集管(guan)中(zhong)的廢液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱重(zhong)新放回(hui)收(shou)集管(guan)中(zhong)。(請使用 當(dang)天(tian)處(chu)理過的(de)柱子(zi))

2. 估計PCR反(fan)應(ying)液或酶切反(fan)應(ying)液的(de)體積，向(xiang)其(qi)中(zhong)加(jia)入等倍(bei)體積溶液(ye)PC,充分(fen)混勻(無(wu)需(xu)去(qu) 除石蠟油或礦(kuang)物(wu)油)。

註意(yi)：對於(yu)回(hui)收(shou)<150 bp的(de)小片段(duan)可(ke)將(jiang)溶液(ye)PC的(de)體積增(zeng)加(jia)到(dao)3倍以(yi)提(ti)高(gao)回收(shou)率(lv)；溶液(ye)混勻 後應(ying)呈現(xian)黃(huang)色(se)，即(ji)可(ke)進(jin)行後續操(cao)作。如(ru)果溶液(ye)的(de)顏(yan)色為桔(ju)紅色(se)或紫(zi)色(se)，請使(shi)用10 μl 3M乙 酸(suan)鈉(na)(pH 5.0)將(jiang)溶液(ye)的(de)顏(yan)色調(tiao)為黃(huang)色後再進行(xing)後續操(cao)作。

3. 將(jiang)上 壹(yi) 步所(suo)得(de)溶液(ye)加(jia)入 壹 個(ge)吸(xi)附(fu)柱CB2中(zhong)(吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)),室溫放2 min, 12,000 rpm(~13,400×g)離心(xin)1 min,倒(dao)掉(diao)收(shou)集管(guan)中(zhong)的廢液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)。

註意(yi)：吸(xi)附(fu)柱容(rong)積(ji)為800 μl,若(ruo)樣品(pin)體積大(da)於(yu)800p可(ke)分(fen)批(pi)加(jia)入。

4. 向吸(xi)附(fu)柱CB2中(zhong)加(jia)入600 ul漂洗液PW (使(shi)用前請先檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)已加(jia)入無(wu)水(shui)乙醇(chun)) ,12.000   rpm (~13,400×g)離(li)心1 min,倒(dao)掉(diao)收(shou)集管(guan)中(zhong)的廢液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)。

註意(yi)：如(ru)果純化的DNA是(shi)用於(yu)鹽(yan)敏感的(de)實(shi)驗，例如(ru)平(ping)末(mo)端(duan)連接(jie)實驗(yan)或直接(jie)測序，建(jian)議PW 加(jia)入後靜置(zhi)2-5 min再離(li)心(xin)。

5. 重(zhong)復操作步(bu)驟(zhou)4.

6. 將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)回收(shou)集管(guan)中(zhong)，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,盡量(liang)除(chu)去(qu)漂洗液。將(jiang) 吸(xi)附(fu)柱CB2置(zhi)於(yu)室(shi)溫放置(zhi)數(shu)分(fen)鐘，晾(liang)幹(gan)。

註(zhu)意(yi)：漂洗液中(zhong)乙醇(chun)的(de)殘留會(hui)影(ying)響(xiang)後續的(de)酶反(fan)應(ying)(酶切、PCR等(deng))實驗。

7. 將(jiang)吸(xi)附(fu)柱CB2放(fang)入壹個(ge)幹(gan)凈的(de)離心管(guan)中(zhong)，向吸(xi)附(fu)膜(mo)中(zhong)間位置(zhi)懸空滴(di)加(jia)適量(liang)的洗脫緩(huan)沖(chong)液

EB,(如(ru)果回(hui)收(shou)的(de)目(mu)的片(pian)段(duan)>4 kb,則洗脫緩(huan)沖(chong)液EB應(ying)置(zhi)於(yu)65-70℃水(shui)浴預(yu)熱),室(shi)溫(wen)放

置(zhi)2 min 。12,000 rpm(~13,400×g)離心(xin)2 min收(shou)集DNA溶液(ye)。

註(zhu)意(yi)：洗脫液的(de)體積不(bu)應(ying)少於(yu)30  μl,體積過少(shao)會(hui)影(ying)響(xiang)回收(shou)的(de)效率(lv)。洗脫液的(de)pH值(zhi)對於(yu) 洗脫效率(lv)有(you)較(jiao)大影(ying)響(xiang)。若(ruo)後續做(zuo)測序，需(xu)使(shi)用ddH₂O做(zuo)洗脫液，並保(bao)證其(qi)pH值(zhi)在7.0-

8.5範圍內(nei)，且(qie)DNA產物(wu)應(ying)保(bao)存(cun)在-20℃,以防DNA降(jiang)解(jie)。為了(le)提高(gao)DNA的回(hui)收(shou)量(liang)，可(ke)將(jiang) 離心(xin)得到(dao)的溶液(ye)重(zhong)新加(jia)回離(li)心吸(xi)附(fu)柱中(zhong)，室溫放置(zhi)2 min,12,000 rpm(~13,400×g)離  心(xin)2 min,將(jiang)DNA溶液(ye)收(shou)集到(dao)離心(xin)管(guan)中(zhong)。