天(tian)根(gen)試劑快(kuai)速質(zhi)粒(li)小提試劑盒(he)采用(yong)矽(gui)膠(jiao)膜(mo)吸附技術(shu)，結合(he)質(zhi)粒(li)DNA，操(cao)作簡單(dan)、快(kuai)速(su)。每次處理(li)1-4 ml 過(guo)夜培養的(de)細菌(jun)培養液(ye)，僅需(xu) 8 min 即(ji)可(ke)提(ti)取多(duo)至(zhi)24 μg 的(de)質(zhi)粒(li)DNA。使(shi)用(yong)本(ben)試劑盒(he)提取的(de)質(zhi)粒(li)DNA 可(ke)適(shi)用於(yu)各(ge)種常規(gui)操作，包括酶切(qie)、PCR、測(ce)序(xu)、連(lian)接(jie)、轉(zhuan)化(hua)、 文(wen)庫篩選(xuan)、體外翻譯、轉(zhuan)染(ran)壹些常規(gui)的(de)傳代細(xi)胞(bao)等(deng)。

天(tian)根(gen)試劑快(kuai)速質(zhi)粒(li)小提試劑盒(he) DP105

產(chan)品(pin)簡(jian)介

天(tian)根(gen)試劑-快(kuai)速質(zhi)粒(li)小提試劑盒(he)-DP105采用(yong)矽(gui)膠(jiao)膜(mo)吸附技術(shu)，結合(he)質(zhi)粒(li)DNA，操(cao)作簡單(dan)、快(kuai)速(su)。每次處理(li)1-4 ml 過(guo)夜培養的(de)細菌(jun)培養液(ye)，僅需(xu) 8 min 即(ji)可(ke)提(ti)取多(duo)至(zhi)24 μg 的(de)質(zhi)粒(li)DNA。使(shi)用(yong)本(ben)試劑盒(he)提取的(de)質(zhi)粒(li)DNA 可(ke)適(shi)用於(yu)各(ge)種常規(gui)操作，包括酶切(qie)、PCR、測(ce)序(xu)、連(lian)接(jie)、轉(zhuan)化(hua)、 文(wen)庫篩選(xuan)、體外翻譯、轉(zhuan)染(ran)壹些常規(gui)的(de)傳代細(xi)胞(bao)等(deng)。

天(tian)根(gen)試劑快(kuai)速質(zhi)粒(li)小提試劑盒(he) DP105 特(te)點(dian)

■ 快速：步(bu)驟(zhou)少，操作簡單(dan)，僅需(xu)8 min。

■ 高(gao)效：可(ke)提(ti)取菌(jun)體(ti)85% 以上(shang)質(zhi)粒(li)DNA。

■ 配(pei)備(bei)了TIANRed 試劑，可(ke)以清(qing)晰(xi)辨(bian)明(ming)抽(chou)提過(guo)程中樣本(ben)的(de)裂

解程度(du)，確(que)保得(de)到(dao)高效率(lv)、高純度(du)的(de)質(zhi)粒(li)DNA。

提(ti)取得(de)率(lv)

快(kuai)速質(zhi)粒(li)提(ti)取試劑盒(he)顏(yan)色變化(hua)

天(tian)根(gen)試劑快(kuai)速質(zhi)粒(li)小提試劑盒(he) DP105

使(shi)用(yong)註意事項

 請(qing)務(wu)必(bi)在使用(yong)本(ben)試劑盒(he)之前(qian)閱讀(du)此(ci)註意事項。 

1．溶(rong)液(ye)P1在使用(yong)前(qian)先加入(ru)RNase A和(he)TIANRed（將試劑盒(he)中提供(gong)的(de)RNase A和(he)TIANRed全 部(bu)加入(ru)），混(hun)勻，置(zhi)於(yu)2-8℃保(bao)存(cun)。 2．使(shi)用(yong)前(qian)請(qing)先(xian)檢查(zha)溶(rong)液(ye)P2和(he)P5是(shi)否出(chu)現(xian)渾(hun)濁(zhuo)，如(ru)有混(hun)濁現(xian)象，可在37℃水浴中加熱(re)幾(ji)分鐘(zhong)，即(ji)可(ke)恢(hui)復澄清。 

3．註意不要直(zhi)接(jie)接觸溶(rong)液(ye)P2和(he)P5，使用(yong)後(hou)應立(li)即(ji)蓋(gai)緊(jin)蓋(gai)子(zi)。 

4．所有離(li)心步(bu)驟(zhou)均為(wei)使用(yong)常規(gui)臺(tai)式(shi)離心機(ji)室溫(wen)下(xia)進行離心，速(su)度(du)為(wei)12,000 rpm (~13,400×g )。

5．提取的(de)質(zhi)粒(li)量(liang)與(yu)細菌(jun)培養濃(nong)度(du)、質(zhi)粒(li)拷(kao)貝(bei)數等(deng)因素(su)有關(guan)。

 6． TIANRed的(de)使用方(fang)法(fa)： TIANRed是(shi)壹種指(zhi)示劑(ji)，用以指(zhi)示整(zheng)個操(cao)作的(de)正(zheng)確(que)性，對(dui)人(ren)體(ti)無(wu) 害。使用時按(an)照TIANRed:溶(rong)液(ye)P1=1:200進(jin)行混(hun)合(he)，顛(dian)倒(dao)混(hun)勻，混(hun)勻後(hou)的(de)溶(rong)液(ye)為(wei)澄清(qing) 的(de)紅(hong)色。將混(hun)勻後(hou)的(de)溶(rong)液(ye)加入(ru)到(dao)收集好的(de)菌(jun)體(ti)中混(hun)勻，由於(yu)菌(jun)體(ti)的(de)存(cun)在，混(hun)勻後(hou)的(de)溶(rong)液(ye)為(wei)渾(hun)濁(zhuo)的(de)紅(hong)色；添(tian)加溶(rong)液(ye)P2之(zhi)後(hou)混(hun)勻後(hou)，溶(rong)液(ye)的(de)顏(yan)色為(wei)澄清(qing)的(de)紫色，則說(shuo)明(ming)充 分裂解；再(zai)添加溶(rong)液(ye)P5至(zhi)混(hun)勻後(hou)，溶(rong)液(ye)為(wei)澄清(qing)的(de)黃色，說(shuo)明(ming)中和(he)復性充分。 

實驗操作步(bu)驟(zhou)說(shuo)明(ming)：

 使用(yong)前(qian)請(qing)先(xian)在漂(piao)洗(xi)液(ye)PWT中加入(ru)CH2O6，加入(ru)體(ti)積請(qing)參(can)照瓶(ping)上(shang)的(de)標簽。

 1. 取1-4 ml過(guo)夜培養的(de)菌(jun)液(ye)，加入(ru)離(li)心管(guan)中，使用(yong)常規(gui)臺(tai)式(shi)離心機(ji)，12,000 rpm (~13,400×g )離心1 min，盡(jin)量(liang)吸除(chu)上(shang)清（菌(jun)液(ye)較(jiao)多(duo)時可(ke)以通(tong)過(guo)多(duo)次離心將菌(jun)體(ti)沈澱收集 到壹個離(li)心管(guan)中）。

 2. 向留有菌(jun)體(ti)沈澱的(de)離心管(guan)中加入(ru)150 μl溶(rong)液(ye)P1（請(qing)先(xian)檢查(zha)是(shi)否已加入(ru)RNase A和(he) TIANRed），使用(yong)移(yi)液(ye)器(qi)或(huo)渦旋振蕩器(qi)懸(xuan)浮細(xi)菌(jun)沈(chen)澱。 註意：如(ru)果有未(wei)混(hun)勻的(de)菌(jun)塊(kuai)，會(hui)影響(xiang)裂解，導致(zhi)提取量和(he)純度(du)偏(pian)低(di)。 

TIANRed試劑的(de)加入(ru)對(dui)於(yu)後(hou)續(xu)PCR、酶切(qie)和(he)測序(xu)都沒(mei)有影響(xiang)。使用時按(an)照TIANRed:溶(rong)液(ye) P1=1:200進(jin)行混(hun)合(he)，顛(dian)倒(dao)混(hun)勻，混(hun)勻後(hou)的(de)溶(rong)液(ye)為(wei)澄清(qing)的(de)紅(hong)色。將混(hun)勻後(hou)的(de)溶(rong)液(ye)加入(ru) 到(dao)收集好的(de)菌(jun)體(ti)中混(hun)勻，由於(yu)菌(jun)體(ti)的(de)存(cun)在，混(hun)勻後(hou)的(de)溶(rong)液(ye)為(wei)渾(hun)濁(zhuo)的(de)紅(hong)色。 

3. 向(xiang)離(li)心管(guan)中加入(ru)150 μl溶(rong)液(ye)P2，溫(wen)和(he)地(di)上(shang)下(xia)翻轉(zhuan)6-8次使菌(jun)體(ti)充分裂解。 註意：溫(wen)和(he)地(di)混(hun)合(he)，不要劇(ju)烈震蕩，以免(mian)汙(wu)染基因組(zu)DNA。此(ci)時菌(jun)液(ye)應變得(de)清(qing)亮粘(zhan)稠，如(ru)果 未(wei)變得(de)清(qing)亮，可能由於(yu)菌(jun)體(ti)過(guo)多(duo)，裂解不，應減(jian)少菌(jun)體(ti)量。 由於(yu)使(shi)用(yong)了TIANRed，添(tian)加溶(rong)液(ye)P2混(hun)勻後(hou)，溶(rong)液(ye)的(de)顏(yan)色為(wei)澄清(qing)的(de)紫色。如(ru)果在紫色中 混(hun)雜(za)有渾(hun)濁(zhuo)的(de)紅(hong)色，則說(shuo)明(ming)裂解不充分，繼續(xu)混(hun)勻直(zhi)至溶(rong)液(ye)顏(yan)色變為(wei)澄清(qing)的(de)紫色。 

4. 向(xiang)離(li)心管(guan)中加入(ru)350 μl溶(rong)液(ye)P5，立(li)即(ji)快(kuai)速(su)地(di)上(shang)下(xia)顛(dian)倒(dao)混(hun)勻12-20次，混(hun)勻，此(ci)時將出(chu) 現(xian)絮狀沈(chen)澱(dian)。12,000 rpm (~13,400×g ) 離心2 min。

 註意：加入(ru)溶(rong)液(ye)P5後(hou)應立(li)即(ji)混(hun)合(he)，應快(kuai)速上下(xia)顛(dian)倒(dao)混(hun)勻，避(bi)免(mian)產(chan)生局部沈(chen)澱(dian)。上(shang)清中含 有少量微(wei)小白色沈(chen)澱(dian)對(dui)後(hou)續(xu)實驗沒(mei)有任(ren)何(he)影響(xiang)。如(ru)果上(shang)清中存(cun)在大量微(wei)小白色沈(chen)澱(dian)，可 再(zai)次離心後(hou)取上清。由於(yu)使(shi)用(yong)了TIANRed，添(tian)加溶(rong)液(ye)P5混(hun)勻後(hou)，溶(rong)液(ye)為(wei)澄清(qing)的(de)黃 色，如(ru)果在黃色中混(hun)有紫(zi)色，則說(shuo)明(ming)復性不充分，繼續(xu)混(hun)勻至(zhi)溶(rong)液(ye)顏(yan)色變為(wei)澄清(qing)的(de) 黃色。 

5. 將上壹步(bu)收集的(de)上清液(ye)用(yong)移(yi)液(ye)器(qi)轉(zhuan)移(yi)到吸附柱(zhu)CP3中（吸附柱(zhu)放入(ru)收集管中），註意盡(jin)量不要吸出(chu)沈澱(dian)。12,000 rpm (~13,400×g) 離(li)心30 sec，倒(dao)掉收集管中的(de)廢(fei)液(ye)，將吸附柱(zhu) CP3放入(ru)收集管中。

6. 向吸附柱(zhu)CP3中加入(ru)300 μl漂(piao)洗(xi)液(ye)PWT，12,000 rpm (~13,400×g) 離(li)心30 sec，倒(dao)掉收集管中的(de)廢(fei)液(ye)，將吸附柱(zhu)CP3放入(ru)收集管中。 

7. 將吸附柱(zhu)CP3放入(ru)收集管中, 12,000 rpm (~13,400×g) 離心1 min，目(mu)的(de)是(shi)將吸附柱(zhu)中殘 余(yu)的(de)漂(piao)洗(xi)液(ye)去(qu)除(chu)。

8. 將吸附柱(zhu)CP3置於(yu)壹個幹凈的(de)離心管(guan)中，向吸附膜(mo)的(de)中間部(bu)位(wei)滴(di)加50-100 μl洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液(ye) TB，12, 000 rpm (~13,400×g) 離(li)心30 sec將質(zhi)粒(li)溶(rong)液(ye)收集到離(li)心管(guan)中。 

註意：洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)體(ti)積不應少於(yu)50 μl，體(ti)積過(guo)小影響(xiang)回(hui)收效率(lv)。洗(xi)脫(tuo)液(ye)的(de)pH值對(dui)於(yu)洗(xi)脫(tuo)效率(lv)有較(jiao)大影響(xiang)。