western blot 天能(neng)Tanon ECL化(hua)學發(fa)光(guang)液 是(shi)壹(yi)種(zhong)高敏(min)的(de)檢測辣(la)根過氧化(hua)物(wu)（H RP）的(de)化(hua)學發(fa)光(guang)底物(wu)。 主(zhu)要應(ying)用於蛋白免疫印(yin)跡westen blot 實驗的(de)發(fa)光顯色(se)。

western blot 天能(neng)Tanon ECL化(hua)學發(fa)光(guang)液簡介

western blot 天能(neng)Tanon ECL化(hua)學發(fa)光(guang)液是(shi)壹(yi)種(zhong)高敏(min)的(de)檢測辣(la)根過氧化(hua)物(wu)（H RP）的化(hua)學發(fa)光(guang)底物(wu)。 

規格

180-501  Tanon ™ ECL 化(hua)學發(fa)光(guang)底物(wu) 100ml

180-5001 Tanon ™ ECL 化(hua)學發(fa)光(guang)底物(wu) 500ml 

應用範圍

用於免疫印(yin)跡實驗的(de)發(fa)光顯色(se)。

保(bao)存條件(jian)

2~8℃可保(bao)存24個(ge)月(yue)

天能(neng)Tanon ECL化(hua)學發(fa)光(guang)液的性能(neng)特(te)點：

• 靈敏度(du)高(gao)：能(neng)檢測pg級(ji)的(de)抗原(yuan)含(han)量(liang)，使(shi)HRP 的檢測更(geng)容(rong)易(yi)。

• 穩定性(xing)好(hao)：能(neng)反復進(jin)行壓片(pian)或化(hua)學發(fa)光(guang)成像檢測，獲(huo)得(de)良(liang)好(hao)結(jie)果。

• 信噪比(bi)高：樣品發光(guang)信號(hao)強，背(bei)景信(xin)號(hao)低。

• 線性度(du)好(hao)：隨(sui)樣(yang)品濃(nong)度(du)變(bian)化(hua)，能(neng)表(biao)現(xian)良(liang)好(hao)的線(xian)性，真實反映樣(yang)品的實際狀(zhuang)況。

蛋白質印(yin)跡技術（免疫印(yin)跡實驗）又(you)稱為Western Blot。它(ta)是(shi)分子生物(wu)學、生物(wu)化(hua)學和免疫遺傳(chuan)學中(zhong)常(chang)用的壹(yi)種(zhong)實驗方法。Western Blot主要用於檢測或分析蛋白，應(ying)用領域(yu)集(ji)中在(zai)基因表(biao)達(da)研究(jiu)、抗體活(huo)性檢測和疾病(bing)診(zhen)斷(duan)等。

01  蛋白質印(yin)跡基本(ben)流程(cheng)圖
 

02 western blot步(bu)驟
樣(yang)品準備(bei)：

• Tanon 連(lian)續梯(ti)度預(yu)制膠(jiao)（4-20% 10 孔/15 孔/17 孔）；  （4-12% 10 孔/15 孔/17 孔）

• Tanon Mops/MES 電泳(yong)緩沖(chong)液（粉劑）

• Tanon 預(yu)染(ran)蛋白 Marker

• Tanon 4×LDS Loading Buffer

• Tanon 快速(su)蛋白染(ran)液

• 預(yu)制膠(jiao)規格的(de)選擇

    在(zai)不使(shi)用預(yu)制膠(jiao)的情況下(xia)，需要自(zi)行(xing)配(pei)置(zhi)適合(he)蛋白電泳(yong)SDS膠，采取自(zi)制膠(jiao)的方法從加入(ru)緩沖(chong)液到(dao)制膠(jiao)完(wan)成這(zhe)壹(yi)過程(cheng)大概需(xu)要花(hua)費將近1個(ge)小(xiao)時(shi)。並且(qie)由(you)於配(pei)比(bi)過程(cheng)中的(de)認為誤(wu)差容易(yi)產生濃(nong)度(du)不均壹(yi)，穩定性(xing)差，已出現(xian)外(wai)八(ba)型、笑(xiao)臉(lian)型等條帶。采用天能(neng)系(xi)列預(yu)制膠(jiao)具有較(jiao)高(gao)的穩(wen)定性(xing)和均壹(yi)性，使(shi)蛋白電泳(yong)條帶更(geng)清晰銳利，使(shi)得(de)條(tiao)帶(dai)更(geng)加均勻(yun)。還(hai)有重(zhong)要的(de)壹(yi)點就(jiu)是(shi)可以(yi)免去(qu)制膠(jiao)的時(shi)間(jian)，大大提升了(le)實驗效率。

蛋白轉印(yin)使(shi)用天能(neng)VE-586轉移電泳(yong)槽(cao)主(zhu)要優(you)勢在(zai)於:它(ta)可以(yi)在(zai)不埋(mai)冰(bing)的(de)情(qing)況完(wan)成的蛋白電泳(yong)，如果配(pei)合(he)快速(su)轉膜液，整個(ge)電泳(yong)過程(cheng)只需(xu)不到(dao)30分鐘(zhong)，可同時(shi)轉印(yin)4塊(kuai)膠，操(cao)作(zuo)方法也(ye)比(bi)較(jiao)簡便(bian)。在(zai)縮短(duan)轉印(yin)時(shi)間(jian)的同時(shi)，實現(xian)了(le)蛋白樣(yang)品的高(gao)效轉印(yin)。

03  蛋白電泳(yong)
目前(qian)常用的是(shi)SDS-PAGE（十二(er)烷(wan)基硫(liu)酸鈉-聚丙烯酰胺凝(ning)膠(jiao)電泳(yong)），蛋白質會根據分子量(liang)大小分(fen)開(kai)，分(fen)子量(liang)的(de)蛋白會(hui)留(liu)在(zai)膠的(de)下(xia)部(bu)，分(fen)子量(liang)大的會(hui)在(zai)膠的(de)頂(ding)部(bu)。

 04 轉膜
轉膜主要是(shi)將蛋白質從凝(ning)膠(jiao)轉移到(dao)膜上，常用的是(shi)NC膜和PVDF（聚偏(pian)氟乙(yi)烯），由(you)於膜與(yu)蛋白質高度(du)親和的能(neng)力，所(suo)以(yi)更(geng)容(rong)易(yi)與(yu)蛋白結(jie)合(he)。為(wei)了(le)便(bian)於觀察(cha)電泳(yong)效果和轉膜效果，可以(yi)使(shi)用蛋白預(yu)染(ran)Marker，以(yi)方便(bian)判(pan)斷(duan)蛋白分(fen)子量(liang)大小。

蛋白預(yu)染(ran)的傳(chuan)統方法是(shi)膜將置於脫色搖(yao)床上，用1×麗春(chun)紅(hong)染液振蕩預(yu)染(ran)5min。然後用水(shui)沖(chong)洗(xi)掉(diao)沒染上(shang)的(de)染液就可看到(dao)膜上的蛋白。

蛋白轉印(yin)使(shi)用天能(neng)VE-586轉移電泳(yong)槽(cao)主(zhu)要優(you)勢在(zai)於:它(ta)可以(yi)在(zai)不埋(mai)冰(bing)的(de)情(qing)況完(wan)成的蛋白電泳(yong)，如果配(pei)合(he)快速(su)轉膜液，整個(ge)電泳(yong)過程(cheng)只需(xu)不到(dao)30分鐘(zhong)，可同時(shi)轉印(yin)4塊(kuai)膠，操(cao)作(zuo)方法也(ye)比(bi)較(jiao)簡便(bian)。在(zai)縮短(duan)轉印(yin)時(shi)間(jian)的同時(shi)，實現(xian)了(le)蛋白樣(yang)品的高(gao)效轉印(yin)。

 05 封閉(bi)
轉印(yin)完(wan)成後，為(wei)阻止抗體的(de)非特異(yi)性(xing)結(jie)合(he)，需(xu)要用脫脂牛(niu)奶(nai)或者牛(niu)血(xue)清蛋白（BSA）作(zuo)為緩沖(chong)液來(lai)填充(chong)封閉(bi)空白結(jie)合(he)位點。

加入(ru)二(er)抗稀釋(shi)液（壹(yi)般(ban)1:1000甚(shen)至(zhi)1:10000用TBST稀釋(shi)），放(fang)在(zai)搖(yao)床上，室(shi)溫(wen)下(xia)孵育1h後，用TBST在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)脫色搖(yao)床上洗(xi)兩(liang)次，每次10min；再(zai)用TBS洗(xi)壹(yi)次，10min，即可進(jin)行化(hua)學發(fa)光(guang)反應。

註(zhu)意：二(er)抗孵育之後也(ye)要註(zhu)意充(chong)分(fen)洗(xi)滌(di)，壹(yi)般(ban)30min左(zuo)右(you)為宜(yi)，如果洗(xi)膜不夠充(chong)分(fen)，顯(xian)影(ying)時(shi)會(hui)造成雜(za)色(se)背景。

06 ECL化(hua)學發(fa)光(guang)反應：
在(zai)工作(zuo)臺(tai)上鋪(pu)壹(yi)張保(bao)鮮(xian)膜，將PVDF膜置於保(bao)鮮(xian)膜上。將ECL的A和B兩種(zhong)試(shi)劑在(zai)EP管(guan)內等體積(ji)混合(he)（註(zhu)意吸(xi)完(wan)A試(shi)劑後吸(xi)B試(shi)劑前(qian)要更(geng)換(huan)槍頭(tou)），然(ran)後均勻(yun)滴(di)在(zai)PVDF膜的蛋白面(mian)，反應1~2min後，將(jiang)PVDF膜上多(duo)余(yu)的(de)ECL發光液吸幹，進(jin)行固定。

 07凝(ning)膠(jiao)圖(tu)象(xiang)分析
將膠(jiao)片(pian)進(jin)行掃(sao)描或(huo)拍(pai)照，使(shi)用凝(ning)膠(jiao)成像儀(yi)進(jin)行成像分(fen)析。常用的凝(ning)膠(jiao)成像儀(yi)有天能(neng)系(xi)列的T4600，T5200等系列。

     蘇州阿爾(er)法生物(wu)實驗器(qi)材有限(xian)公司成立於2008年(nian)，位於蘇(su)州園區(qu)生物(wu)納米園（Biobay）A5幢(zhuang)301室(shi)。公司管(guan)理團(tuan)隊專(zhuan)註(zhu)於科(ke)學儀(yi)器(qi)行(xing)業(ye)十三年，擁(yong)有(you)專(zhuan)業的技術團(tuan)隊與(yu)完(wan)善的(de)售(shou)後服(fu)務(wu)體(ti)系，目前(qian)已為300余(yu)家(jia)實驗室(shi)提(ti)供(gong)優質產品和服務(wu)，涵蓋(gai)各大高校(xiao)、醫(yi)療機(ji)構、檢測中心、科(ke)研機(ji)構、制藥企(qi)業等13個(ge)群體(ti)。提(ti)供(gong)的實驗室(shi)儀(yi)器(qi)主(zhu)要包(bao)括(kuo)振蕩培養(yang)箱，PCR儀(yi)，移液器(qi)，生物(wu)反應器(qi)，發(fa)酵(jiao)罐(guan)，移液器(qi)，超(chao)低溫(wen)冰(bing)箱，醫(yi)用冰箱，液氮罐(guan)，高(gao)壓滅(mie)菌器(qi)，超(chao)純(chun)水(shui)機(ji)，天平(ping)，離心(xin)機(ji)，離心(xin)濃(nong)縮(suo)儀,生物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)等。

   廠商企(qi)業授(shou)權(quan)包(bao)括(kuo)知楚儀器(qi)、朗(lang)基、中科(ke)美菱，梅特勒(le)，樂(le)楓(feng)，搏(bo)旅(lv)、NEST、天能(neng)、天根、奧盛在(zai)內的80個(ge)余(yu)廠家。  在(zai)提供(gong)產品的同(tong)時(shi)也(ye)為(wei)您(nin)提(ti)供(gong)生物(wu)實驗室(shi)常(chang)用的耗(hao)材試(shi)劑，以(yi)及(ji)實驗室(shi)整(zheng)體(ti)搬遷(qian)、第三(san)方檢測、計量(liang)與(yu)校(xiao)準(zhun)，二(er)手(shou)儀(yi)器(qi)調(tiao)劑等服務(wu)。完(wan)整的(de)實驗室(shi)壹(yi)站式(shi)體(ti)驗(yan)使(shi)您(nin)的(de)選擇更(geng)加方便(bian)、快捷(jie)、靈(ling)活(huo)。  

 阿爾(er)法性價(jia)比(bi)：壹(yi)級(ji)代理；壹(yi)手(shou)貨(huo)源(yuan)；進(jin)口品質，國產價(jia)格； 

 阿爾(er)法交貨(huo)期(qi)：自有倉庫(ku)，標(biao)準品有庫(ku)存，常規(gui)試(shi)劑耗(hao)材備(bei)有(you)現(xian)貨(huo)；  

 阿爾(er)法服務(wu)項目：實驗室(shi)現(xian)場(chang)規(gui)劃，提(ti)供(gong)選型(xing)建議(yi)，合(he)理(li)化(hua)配(pei)置(zhi);    

 阿爾(er)法售(shou)後服(fu)務(wu)：及(ji)時(shi)響(xiang)應，2小(xiao)時(shi)給(gei)出解(jie)決方案(an)，12小時(shi)內響(xiang)應服(fu)務(wu)。  

 阿爾(er)法增值服(fu)務(wu)：免費供(gong)樣機(ji)體驗(yan)，免費提供(gong)樣品試(shi)用，免費安(an)裝(zhuang)指(zhi)導(dao)，免費技術指(zhi)導(dao)    

 阿爾(er)法質保(bao)期(qi)：終身質保(bao)，免費更(geng)換(huan)配(pei)件(jian)