生(sheng)物反(fan)應器培(pei)養(yang)中支原(yuan)體汙(wu)染(ran)對(dui)細胞(bao)有(you)什麽影響(xiang)？

 支(zhi)原體抗體又稱(cheng)Mollicutes，它(ta)是壹種微(wei)小(xiao)的並可(ke)以 自(zi)我復(fu)制的細菌（直(zhi)徑 0.1–0.3 µm），壹(yi)般(ban)在(zai)生(sheng)物反(fan)應器 哺(bu)乳動(dong)物細胞(bao)培養(yang)物中很(hen)難(nan)進行檢(jian)測(ce)和(he)去除(chu)。支原體由於缺(que)乏(fa)細(xi)胞(bao)壁，使它(ta)們可(ke)以輕(qing)易穿(chuan)過(guo)0.1 µm–0.22 µm 的除(chu)菌過(guo)濾(lv)器 或(huo)濾(lv)膜。由(you)於支(zhi)原體具有(you)較小的基(ji)因組(zu)， 難(nan)以進行選(xuan)擇復(fu)制和(he)代(dai)謝，所以， 通常(chang)需要(yao)宿(xiu)主(zhu)細(xi)胞才(cai)能生(sheng)存。某些(xie)支原(yuan)體物種已引起(qi)細(xi)胞培養(yang)物的隱匿(ni)性汙(wu)染(ran)，尤其(qi)是在(zai)基(ji)礎(chu)研究環(huan)境中(zhong)，對(dui)細胞(bao)健康或(huo)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)性能的可(ke)見變化(hua)很(hen)小(xiao)。然而，支(zhi)原(yuan)體抗體可(ke)以通過(guo)幾(ji)種潛(qian)在(zai)機(ji)制以(yi)更微(wei)妙(miao)的方(fang)式改變培(pei)養(yang)性能和(he)產(chan)品質量(liang)，包(bao)括(kuo)競(jing)爭(zheng)培(pei)養(yang)營養(yang)物、通過(guo)入(ru)侵(qin)或(huo)與(yu)宿(xiu)主(zhu)細(xi)胞融(rong)合誘導(dao)異常(chang)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)和(he)細(xi)胞病變效應，以及(ji)改變宿(xiu)主(zhu)細(xi)胞表達譜(pu) 等(deng) 。

   生(sheng)物反(fan)應器培(pei)養(yang)中支原(yuan)體汙(wu)染(ran)對(dui)細胞(bao)的影響(xiang)？使用(yong)生(sheng)物反(fan)應器進行細(xi)胞(bao)培養(yang)，既可(ke)以監(jian)測和(he)控(kong)制工藝(yi)參(can)數(shu)，也(ye)可(ke)以灌註(zhu)新鮮培(pei)養(yang)基(ji)來去除(chu)廢料(liao)。因(yin)此(ci)，對(dui)於制藥(yao)工藝(yi)上(shang)遊來說，生(sheng)物反(fan)應器可(ke)以提(ti)供較為穩(wen)定(ding)的細胞(bao)培(pei)養(yang)環(huan)境。但(dan)是(shi)支原體的存在(zai)，不僅會(hui)降(jiang)低哺乳動(dong)物細胞(bao)培養(yang)物中生(sheng)長(chang)的能力，還會(hui)給接(jie)受(shou)可(ke)註射(she)生(sheng)物藥物的人(ren)帶(dai)來(lai)風(feng)險(xian)。所(suo)以(yi)，當(dang)企業(ye)在(zai)其(qi)培養(yang)物中發(fa)現支(zhi)原(yuan)體時，他們會(hui)在(zai)抽取(qu)有(you)限數(shu)量(liang)的培養(yang)物樣本(ben)進行規格(ge)化(hua)並測(ce)試(shi)原材料(liao)樣本(ben)以(yi)追(zhui)蹤(zong)汙(wu)染(ran)源後(hou)立即進行去汙(wu)。在(zai)細胞(bao)培養(yang)瓶、搖(yao)瓶、轉(zhuan)瓶中(zhong)培養(yang)哺乳動(dong)物細胞(bao)也(ye)常(chang)常(chang)會(hui)受到支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)，由此(ci)可(ke)見防止支原(yuan)體汙(wu)染(ran)是細(xi)胞培養(yang)的關(guan)鍵。

細胞(bao)支(zhi)原體汙(wu)染(ran)檢測(ce)方(fang)法(fa) 

生(sheng)物制藥(yao)設備中的支原(yuan)體汙(wu)染(ran)，可(ke)能會(hui)導致(zhi)直(zhi)接(jie)的生(sheng)產(chan)損失和(he)昂(ang)貴(gui)的清理費用(yong)。壹(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia)，支原體的常(chang)規檢(jian)測(ce)需要(yao) 14-28 天完(wan)成(cheng)，並且(qie)這是(shi)屬於勞(lao)動(dong)密集(ji)型(xing)操(cao)作(zuo)。為(wei)了(le)加(jia)快(kuai)檢(jian)測速度，壹(yi)些(xie)制藥(yao)企業(ye)開(kai)始采(cai)用(yong)核(he)酸(suan)檢(jian)測(ce) (NAT) 方(fang)法(fa)以及(ji)其(qi)他快速(su)微(wei)生(sheng)物技(ji)術(shu)。

由(you)於支(zhi)原體可(ke)以在(zai)哺乳(ru)動(dong)物細胞(bao)培養(yang)物中存活(huo)，直(zhi)徑多(duo)數(shu)在(zai) 0.1µm–0.3 µm之(zhi)間(jian)，所(suo)以使用(yong) 0.22 µm的 過(guo)濾(lv)器對(dui)收獲(huo)的細胞(bao)培(pei)養(yang)液進行初(chu)級(ji)澄清(qing)過(guo)濾(lv)還是很(hen)有(you)必要(yao)的。      

    基(ji)於培(pei)養(yang)細胞和(he)基(ji)於指示(shi)細(xi)胞的支原(yuan)體檢測(ce)雖然準確(que)，但(dan)可(ke)能需要(yao)長(chang)達 28 天才(cai)能完(wan)成(cheng)，並且(qie)不能用(yong)於生(sheng)物制造(zao)過(guo)程(cheng)中的實時決(jue)策。為(wei)保證(zheng)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)的實時測量(liang)，近(jin)年(nian)來(lai)，支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)考(kao)試(shi)探索使用(yong)核(he)酸(suan)檢(jian)測(ce)的方(fang)法(fa)。

在(zai)壹些(xie)實驗(yan)中，實驗(yan)團(tuan)隊(dui)通過(guo)將(jiang)支原體引入(ru)生(sheng)物反(fan)應器的實驗(yan)來進行研究、探(tan)索支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran)在(zai)細胞(bao)培養(yang)環(huan)境中(zhong)的影響(xiang)因(yin)素及(ji)變量(liang)。比如(ru)：在(zai)通過(guo)生(sheng)物反(fan)應器培(pei)養(yang)CHO（ DG44） 細胞系(xi)（用(yong)來(lai)表達模(mo)型(xing)單(dan)克隆免疫球(qiu)蛋(dan)白(bai) G1 (IgG1) 抗體） 過(guo)程(cheng)中，使用(yong)精(jing)氨(an)酸支原(yuan)體引入(ru)到壹(yi)次性灌註(zhu)生(sheng)物反(fan)應器中(zhong)。然後(hou)通過(guo)細(xi)胞培養(yang)的方(fang)式來(lai)實時觀(guan)察支原(yuan)體的生(sheng)長(chang)狀態(tai)，以(yi)及支原體對(dui)哺乳(ru)動(dong)物細胞(bao)健康(kang)、新(xin)陳(chen)代謝和(he)生(sheng)產(chan)力的影響(xiang)。

在(zai)生(sheng)物反(fan)應器中(zhong)實時進行工藝(yi)參(can)數(shu)設(she)定(ding)和(he)控(kong)制，包(bao)括(kuo)溶氧(yang)參(can)數(shu)、通氣量(liang)參(can)數(shu)PH參(can)數(shu)值(zhi)等(deng)。這些(xie)參(can)數(shu)變化(hua)都(dou)可(ke)以作(zuo)為(wei) CHO 細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)物中支(zhi)原體汙(wu)染(ran)的指示(shi)參(can)考(kao)。   

 通過(guo)研究發(fa)現(xian)，支(zhi)原(yuan)體在(zai)不同(tong)時間(jian)段(duan)對(dui) CHO 細胞(bao)的生(sheng)長(chang)曲線(xian)、細(xi)胞活(huo)力、培養(yang)基(ji)消(xiao)耗、耗氧(yang)量(liang)及(ji)廢物產生(sheng)也(ye)各不(bu)相(xiang)同。從(cong)而詳(xiang)細(xi)地了解支(zhi)原體汙(wu)染(ran)與 CHO 細(xi)胞濃(nong)度、灌註(zhu)速率(lv)之(zhi)間(jian)的關(guan)系(xi)。