PCR 基(ji)因(yin)擴增檢(jian)驗實驗室(shi)的設備及(ji)技術驗收

壹、目的

二(er)、適(shi)用範圍

三、職(zhi)責分(fen)工(gong)

1. 實(shi)驗室(shi)負責人：統籌協調(tiao)整個(ge)驗收工(gong)作(zuo)，確(que)保(bao)驗收工(gong)作(zuo)按計(ji)劃進行，對(dui)驗收結果進行(xing)審核和批準。

2. 設備驗收小組(zu)：由實驗室(shi)技術人員、設備工(gong)程(cheng)師等(deng)組(zu)成，負責對(dui)實驗室(shi)各類設備進(jin)行詳(xiang)細(xi)的(de)檢(jian)查(zha)、測(ce)試和評(ping)估。

3. 技術驗收小組(zu)：由具(ju)有豐(feng)富 PCR 技(ji)術經驗的專業人員組(zu)成，對(dui)實驗室(shi)的技(ji)術文件、操作規程(cheng)、人員技能(neng)等(deng)進行審查和考核。

四(si)、設備驗收

（壹）PCR 儀(yi)

1. 外(wai)觀(guan)檢(jian)查(zha)

• 檢查儀(yi)器外(wai)殼是否(fou)有破(po)損、劃痕、變(bian)形等(deng)情況(kuang)。

• 查(zha)看儀(yi)器的顯(xian)示屏、按鍵(jian)、指示(shi)燈(deng)等(deng)是否(fou)正常(chang)顯(xian)示和工(gong)作(zuo)。

• 確(que)認(ren)儀(yi)器的標識、型號(hao)、序列號(hao)等(deng)信(xin)息是否(fou)清晰、準確(que)。

2. 性能(neng)測(ce)試

• 溫度(du)準確(que)性：使(shi)用高(gao)精(jing)度(du)溫度(du)傳(chuan)感器在(zai) PCR 儀(yi)的反(fan)應(ying)孔(kong)內(nei)測(ce)量(liang)不(bu)同(tong)溫度(du)設定下的(de)實(shi)際溫度(du)，記(ji)錄(lu)偏(pian)差。例(li)如，分(fen)別(bie)設定 55℃、72℃、95℃等(deng)常用溫度(du)，每(mei)個溫度(du)點測(ce)量(liang) 3 次，要(yao)求溫度(du)偏(pian)差在(zai) ±0.5℃以內(nei)5。

• 溫度(du)均(jun)勻性(xing)：在(zai) PCR 儀(yi)的不(bu)同(tong)位(wei)置(zhi)（如邊(bian)緣、中間(jian)等(deng)）放置(zhi)溫度(du)傳(chuan)感器，測(ce)量(liang)同(tong)壹溫度(du)設定下各位置(zhi)的溫度(du)差異(yi)。同(tong)樣(yang)設定上(shang)述常(chang)用溫度(du)，要(yao)求溫度(du)均(jun)勻性(xing)差異(yi)在(zai) ±1℃以內(nei)。

• 升(sheng)降(jiang)溫速(su)率(lv)：記(ji)錄(lu) PCR 儀(yi)從壹個溫度(du)上(shang)升(sheng)或下降(jiang)到(dao)另壹個溫度(du)所需(xu)的(de)時間(jian)，與(yu)儀(yi)器說明(ming)書(shu)中的(de)指標進(jin)行對(dui)比(bi)。壹般來說，升(sheng)溫速(su)率(lv)應(ying)能(neng)達到(dao) 3 - 5℃/s，降(jiang)溫速(su)率(lv)應(ying)能(neng)達到(dao) 2 - 4℃/s。

• 擴增準確(que)性：使(shi)用已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)和序列的標準 DNA 模(mo)板(ban)，按照(zhao)儀(yi)器推(tui)薦的(de) PCR 反(fan)應(ying)條(tiao)件進行擴增，通過瓊脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠電泳(yong)或熒光(guang)定(ding)量檢測(ce)等(deng)方法，驗證(zheng)擴增產(chan)物的特(te)異(yi)性(xing)和準確(que)性。擴增產(chan)物的條(tiao)帶位(wei)置(zhi)應(ying)與(yu)預期(qi)相(xiang)符(fu)，熒光(guang)定量(liang)結果的 Ct 值(zhi)偏(pian)差應(ying)在(zai) ±1 以內(nei)。

3. 軟(ruan)件功能檢查(zha)

• 檢(jian)查(zha) PCR 儀(yi)配(pei)套軟(ruan)件的操作界面(mian)是否(fou)友好，易於操作。

• 測(ce)試軟(ruan)件的程(cheng)序編輯(ji)、保(bao)存、調(tiao)用功能(neng)，確保(bao)能夠(gou)準確(que)設置(zhi)和執行不(bu)同(tong)的(de) PCR 反(fan)應(ying)程(cheng)序。

• 驗證(zheng)軟(ruan)件的數據存儲(chu)、分(fen)析(xi)和報告(gao)生(sheng)成功(gong)能(neng)，檢查(zha)能否(fou)正確(que)記錄(lu)和處理(li)實(shi)驗數據，並(bing)生(sheng)成規(gui)範的報告(gao)。

（二(er)）核酸提取儀(yi)

1. 外(wai)觀(guan)及(ji)機(ji)械性能(neng)檢(jian)查

• 檢查(zha)儀(yi)器的整(zheng)體(ti)外(wai)觀(guan)，包(bao)括(kuo)外(wai)殼、蓋(gai)子、軌道(dao)等(deng)部件是否(fou)完好無損。

• 觀(guan)察儀(yi)器在(zai)運(yun)行過(guo)程(cheng)中機(ji)械部件的運(yun)動是否(fou)平穩(wen)，有無(wu)異(yi)常(chang)噪音或卡(ka)頓現(xian)象(xiang)。

• 檢查(zha)加(jia)樣(yang)針的(de)準確(que)性和重復性(xing)，可(ke)通過吸(xi)取和排(pai)出壹定體(ti)積(ji)的(de)液(ye)體(ti)，測(ce)量(liang)實際體(ti)積(ji)與(yu)設定體(ti)積(ji)的(de)偏(pian)差，要(yao)求偏(pian)差在(zai) ±5% 以內(nei)。

2. 提取效率(lv)和純度(du)檢(jian)測(ce)

• 使(shi)用已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)和純度(du)的(de)標準核酸樣(yang)本，按照(zhao)儀(yi)器的操作說明(ming)書(shu)進行(xing)核酸提取。

• 采用紫(zi)外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)測(ce)量(liang)提取核酸的濃(nong)度(du)和純度(du)，A260/A280 比(bi)值(zhi)應(ying)在(zai) 1.8 - 2.0 之間(jian)，A260/A230 比(bi)值(zhi)應(ying)大(da)於 2.0。同(tong)時，與(yu)理(li)論提取量進(jin)行(xing)對(dui)比(bi)，計(ji)算(suan)提取效率(lv)，要(yao)求提取效率(lv)達到(dao) 80% 以上(shang)。

• 通過瓊脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠電泳(yong)觀(guan)察提取核酸的完(wan)整性(xing)，條(tiao)帶應(ying)清(qing)晰、無明(ming)顯(xian)降(jiang)解(jie)。

（三）離(li)心(xin)機

1. 外(wai)觀(guan)及(ji)安(an)全(quan)檢(jian)查(zha)

• 檢(jian)查離心機的(de)外(wai)殼是否(fou)有損壞(huai)，門(men)鎖裝(zhuang)置(zhi)是否(fou)正常(chang)工(gong)作(zuo)，以(yi)確(que)保(bao)在(zai)運(yun)行過(guo)程(cheng)中不(bu)會發生(sheng)意(yi)外(wai)開(kai)蓋(gai)。

• 查看離(li)心(xin)機(ji)的通風(feng)口是否(fou)暢(chang)通，散熱(re)風(feng)扇(shan)是否(fou)正常(chang)運(yun)轉。

• 確(que)認(ren)離心(xin)機(ji)的(de)接(jie)地(di)是否(fou)良好，以保障操作人員的安(an)全(quan)。

2. 性(xing)能(neng)測(ce)試

• 轉(zhuan)速(su)準確(que)性：使(shi)用轉速(su)測(ce)試儀(yi)測(ce)量(liang)離心機在(zai)不(bu)同(tong)設定轉(zhuan)速下的(de)實(shi)際轉(zhuan)速，記錄(lu)偏(pian)差。要(yao)求實際(ji)轉(zhuan)速(su)與(yu)設定轉(zhuan)速的(de)偏(pian)差在(zai) ±5% 以內(nei)。

• 離(li)心力(li)均勻性(xing)：在(zai)離心(xin)機(ji)的不(bu)同(tong)位(wei)置(zhi)放置(zhi)相(xiang)同(tong)重(zhong)量的(de)樣(yang)品，離心後(hou)檢(jian)查(zha)樣(yang)品的沈降(jiang)情(qing)況(kuang)，應(ying)基(ji)本(ben)壹致，表(biao)明(ming)離(li)心(xin)力(li)均勻性(xing)良好。

• 溫度(du)控(kong)制(zhi)（若(ruo)有制(zhi)冷(leng)功(gong)能）：對(dui)於具(ju)有制(zhi)冷(leng)功(gong)能的離心機(ji)，設定不(bu)同(tong)的(de)溫度(du)，測(ce)量(liang)離心腔內(nei)的(de)實(shi)際溫度(du)，要(yao)求溫度(du)偏(pian)差在(zai) ±2℃以內(nei)。

（四(si)）移液(ye)器

1. 外(wai)觀(guan)及(ji)操作性檢查(zha)

• 檢(jian)查(zha)移液(ye)器的外(wai)觀(guan)是否(fou)完好，刻(ke)度(du)是否(fou)清晰，按鈕(niu)操作是否(fou)靈活。

• 檢查移液(ye)器的吸(xi)頭(tou)安裝(zhuang)和拆卸(xie)是否(fou)方便、牢(lao)固。

2. 準確(que)性和重復性(xing)檢(jian)測(ce)

• 使(shi)用電子(zi)天(tian)平對(dui)移液(ye)器進行(xing)重(zhong)量(liang)法校準。選(xuan)擇不(bu)同(tong)量(liang)程(cheng)的移(yi)液(ye)器，分(fen)別(bie)吸(xi)取壹定體(ti)積(ji)（如(ru) 10μL、50μL、100μL 等(deng)）的蒸餾水，測(ce)量(liang)其重量，根(gen)據水(shui)的(de)密(mi)度(du)計(ji)算(suan)實際(ji)體(ti)積(ji)。每(mei)個體(ti)積(ji)點測(ce)量(liang) 10 次，計(ji)算(suan)平均值(zhi)和標準差。準確(que)性要(yao)求實際(ji)體(ti)積(ji)與(yu)設定體(ti)積(ji)的(de)偏(pian)差在(zai) ±2% 以內(nei)，重(zhong)復性(xing)要(yao)求標準差小於 1%。

（五）其(qi)他(ta)設備

1. 電泳(yong)儀(yi)：檢查(zha)輸出(chu)電壓(ya)、電流(liu)的(de)準確(que)性和穩(wen)定性(xing)，電泳(yong)槽(cao)的密(mi)封(feng)性(xing)和電極(ji)的(de)導電性(xing)。通過電泳(yong)已(yi)知(zhi)分(fen)子(zi)量(liang)的標準 DNA Marker，驗證(zheng)電泳(yong)條(tiao)帶的(de)分(fen)離(li)效(xiao)果是否(fou)符(fu)合(he)預期。

2. 凝(ning)膠成像(xiang)系統：檢(jian)查成像(xiang)清(qing)晰度(du)、分(fen)辨(bian)率(lv)，以及圖(tu)像(xiang)采(cai)集(ji)和處理(li)軟(ruan)件的功能。拍(pai)攝(she)不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)的(de) DNA 凝(ning)膠圖(tu)片(pian)，評(ping)估系統對(dui)條(tiao)帶的(de)識別(bie)和分(fen)析(xi)能(neng)力(li)。

3. 冰(bing)箱(xiang)、冰(bing)櫃(gui)：檢(jian)查溫度(du)控(kong)制(zhi)的(de)準確(que)性，溫度(du)波動範圍應(ying)在(zai)設定溫度(du)的(de) ±2℃以內(nei)。查看(kan)制(zhi)冷(leng)效(xiao)果，確保(bao)能(neng)夠(gou)維(wei)持低(di)溫環(huan)境，以保(bao)存試劑(ji)和樣(yang)本。

五(wu)、技(ji)術驗收

（壹）文件審查

1. 實(shi)驗室(shi)管(guan)理(li)制(zhi)度(du)：檢(jian)查是否(fou)制(zhi)定(ding)完善的(de)實驗室(shi)人員管(guan)理(li)、設備管(guan)理(li)、試劑(ji)管(guan)理(li)、樣(yang)本管(guan)理(li)、質(zhi)量管(guan)理(li)等(deng)制(zhi)度(du)，確(que)保實(shi)驗室(shi)運(yun)行有(you)章可循(xun)。

2. 操作規程(cheng)：審核 PCR 基(ji)因(yin)擴增檢(jian)驗的標準操作規程(cheng)（SOP），包(bao)括(kuo)樣(yang)本采(cai)集(ji)、核酸提取、PCR 擴增、結果分(fen)析(xi)等(deng)各個環(huan)節的詳(xiang)細(xi)操作步驟、註意事(shi)項、質(zhi)量控(kong)制(zhi)要(yao)求等(deng)。操作規程(cheng)應(ying)符(fu)合(he)相(xiang)關(guan)行(xing)業標準和規範，且(qie)具(ju)有可(ke)操作性。

3. 質(zhi)量控(kong)制(zhi)文(wen)件：檢查是否(fou)建立(li)質(zhi)量控(kong)制(zhi)計(ji)劃，包(bao)括(kuo)室(shi)內質(zhi)量控(kong)制(zhi)（IQC）和室(shi)間質(zhi)量評(ping)價（EQA）的(de)實(shi)施(shi)方案(an)、記錄(lu)和報告(gao)。IQC 應(ying)定(ding)期進(jin)行，使用已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)的(de)標準樣(yang)本進(jin)行(xing)檢測(ce)，繪(hui)制(zhi)質(zhi)控圖(tu)，監(jian)控(kong)檢測(ce)過(guo)程(cheng)的穩(wen)定性(xing)。EQA 應(ying)參(can)加(jia)機(ji)構(gou)組(zu)織的室(shi)間比(bi)對(dui)活動，確保實驗室(shi)檢測(ce)結果的準確(que)性和可比(bi)性。

（二(er)）人員技能(neng)考(kao)核

1. 理(li)論知識考(kao)核：對(dui)實驗室(shi)操作人員進行(xing) PCR 技(ji)術相(xiang)關(guan)的(de)理(li)論知識考(kao)試，內(nei)容(rong)包(bao)括(kuo) PCR 的(de)基(ji)本(ben)原(yuan)理(li)、儀(yi)器設備的(de)工(gong)作(zuo)原(yuan)理(li)、試劑(ji)的作(zuo)用、質(zhi)量控(kong)制(zhi)方法等(deng)。考試成績(ji)應(ying)達到(dao) 80 分(fen)以(yi)上(shang)為(wei)合(he)格。

2. 操作技能考(kao)核：安(an)排(pai)操作人員進行(xing)實(shi)際的 PCR 實(shi)驗操作，包(bao)括(kuo)樣(yang)本處(chu)理(li)、核酸提取、PCR 反(fan)應(ying)體(ti)系配(pei)制(zhi)、儀(yi)器操作、結果分(fen)析(xi)等(deng)環(huan)節。考核人員根(gen)據操作的規範性、準確(que)性、熟(shu)練程(cheng)度(du)等(deng)進行評(ping)分(fen)，要(yao)求操作技能考(kao)核成績(ji)達到(dao) 85 分(fen)以(yi)上(shang)為(wei)合(he)格。

（三）模(mo)擬實驗驗證(zheng)

1. 樣(yang)本模(mo)擬：準備(bei)已(yi)知(zhi)濃(nong)度(du)和基(ji)因(yin)型的(de)模(mo)擬樣(yang)本，包(bao)括(kuo)陽(yang)性樣(yang)本、陰(yin)性(xing)樣(yang)本和臨界值(zhi)樣(yang)本，按照(zhao)實(shi)驗室(shi)的操作規程(cheng)進行(xing)檢測(ce)。

2. 結果評(ping)估：對(dui)模(mo)擬實驗的檢測(ce)結果進行(xing)分(fen)析(xi)和評(ping)估，判(pan)斷(duan)實驗室(shi)的檢(jian)測(ce)結果是否(fou)準確(que)、可靠(kao)。陽(yang)性樣(yang)本應(ying)能(neng)準確(que)擴增出(chu)預期的條(tiao)帶或(huo)得(de)到(dao)相(xiang)應(ying)的(de)熒光(guang)信(xin)號(hao)，陰(yin)性樣(yang)本應(ying)無(wu)擴增產(chan)物或熒光信(xin)號(hao)，臨界值(zhi)樣(yang)本的(de)檢(jian)測(ce)結果應(ying)在(zai)可接(jie)受(shou)的誤差範圍內(nei)。

六(liu)、驗收報告(gao)

1. 驗收記錄(lu)：在(zai)驗收過程(cheng)中，設備驗收小組(zu)和技術驗收小組(zu)應(ying)詳(xiang)細(xi)記(ji)錄(lu)各項檢(jian)查(zha)和測(ce)試的(de)結果，包(bao)括(kuo)儀(yi)器設備的(de)型號(hao)、規(gui)格、編(bian)號(hao)、檢(jian)查項目、實測(ce)數據、結論等(deng)信(xin)息。

2. 報告(gao)撰(zhuan)寫(xie)：驗收工(gong)作(zuo)完(wan)成後(hou)，由(you)驗收負責人根(gen)據驗收記錄(lu)撰(zhuan)寫(xie)驗收報告(gao)。報告(gao)應(ying)包(bao)括(kuo)實(shi)驗室(shi)基(ji)本(ben)信(xin)息、驗收目的、驗收依據(ju)、驗收內容(rong)、驗收結果、存在(zai)問題(ti)及(ji)整改建(jian)議等(deng)內容。

3. 報告(gao)審核與(yu)批(pi)準：驗收報告(gao)撰(zhuan)寫(xie)完(wan)成後(hou)，先(xian)由實(shi)驗室(shi)負責人進行(xing)審核，審核通過後(hou)提交給上(shang)級(ji)主(zhu)管(guan)部門(men)或(huo)相(xiang)關(guan)審批機(ji)構(gou)進(jin)行(xing)批準。只(zhi)有(you)驗收報告(gao)批(pi)準通過後(hou)，PCR 基(ji)因(yin)擴增檢(jian)驗實驗室(shi)才(cai)能(neng)正(zheng)式(shi)投(tou)入(ru)使用。

七、整改措施(shi)

1. 問(wen)題匯(hui)總：對(dui)驗收過程(cheng)中發現(xian)的(de)設備和技術問題進(jin)行分(fen)類匯(hui)總，明(ming)確問題的性(xing)質(zhi)、嚴重(zhong)程(cheng)度(du)和影響範圍。

2. 整(zheng)改計(ji)劃制(zhi)定(ding)：針對(dui)匯(hui)總的(de)問題，由實驗室(shi)負責人組(zu)織相(xiang)關(guan)人員制(zhi)定(ding)詳(xiang)細(xi)的(de)整(zheng)改計(ji)劃，明確整改責任人、整改措施(shi)、整(zheng)改期(qi)限(xian)等(deng)內容。

3. 整改實(shi)施(shi)與(yu)跟蹤(zong)：整改責任人按照(zhao)整(zheng)改計(ji)劃實施(shi)整(zheng)改措施(shi)，在(zai)整改過(guo)程(cheng)中應(ying)定(ding)期向(xiang)實(shi)驗室(shi)負責人匯(hui)報整(zheng)改進(jin)展(zhan)情況(kuang)。實(shi)驗室(shi)負責人對(dui)整改過(guo)程(cheng)進行(xing)跟蹤(zong)和監(jian)督，確保(bao)整改工(gong)作(zuo)按時完(wan)成。

4. 整(zheng)改驗收：整改完(wan)成後(hou)，由(you)驗收小組(zu)對(dui)整改情(qing)況(kuang)進(jin)行再(zai)次(ci)檢(jian)查(zha)和驗收，確認(ren)問題(ti)已(yi)得(de)到(dao)有效(xiao)解決。只(zhi)有(you)所有(you)整(zheng)改問(wen)題(ti)都(dou)通過驗收後(hou)，PCR 基(ji)因(yin)擴增檢(jian)驗實驗室(shi)才(cai)能(neng)正(zheng)式(shi)投(tou)入(ru)使用。

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