細胞(bao)復蘇(su)全(quan)過(guo)程：
細胞(bao)復蘇(su)是(shi)將休眠(mian)的(de)細胞(bao)重(zhong)新(xin)活化，使之重(zhong)新(xin)生(sheng)長，進(jin)入細胞(bao)周(zhou)期，進(jin)而(er)分(fen)裂(lie)產生(sheng)子(zi)細胞(bao)的(de)過(guo)程(cheng)。細胞(bao)復蘇(su)後，可(ke)進(jin)入細胞(bao)周(zhou)期，重(zhong)新(xin)獲得細胞(bao)類(lei)型(xing)特(te)異(yi)的(de)生(sheng)物(wu)學功能(neng)。
實驗(yan)開(kai)始前，將無菌培養(yang)瓶(ping)，15ml 離(li)心(xin)管(guan)、移(yi)液(ye)管(guan)、移(yi)液(ye)槍(qiang)、槍(qiang)頭(tou)等放入無菌超凈工(gong)作臺(tai)，以紫外(wai)線(xian)照(zhao)射 30min。然後，采用通(tong)風機(ji)通風 3min。以 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)操(cao)作臺(tai)和雙手。
將離心(xin)機調節(jie)至 800rpm，5min。水浴箱(xiang)調節(jie)至 37 度恒(heng)溫(wen)。取(qu)細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)，放於(yu)水(shui)浴箱(xiang)中(zhong)預(yu)熱。
消毒(du)雙手和超(chao)凈臺(tai)。取(qu)約(yue) 10ml 細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)放於(yu) 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)。
實(shi)驗(yan)前備(bei)冰盒，快速(su)由液(ye)氮(dan)中取(qu)出(chu)凍存的(de)細胞(bao)，置(zhi)於(yu)冰盒內。然後迅速(su)將凍存管(guan)投入到(dao)已經預(yu)熱到(dao) 37 度的(de)水(shui)浴(yu)鍋中迅速(su)解凍，並要(yao)不(bu)斷的(de)搖動，使管(guan)中(zhong)的(de)液(ye)體(ti)迅(xun)速(su)融化，註意管(guan)口(kou)處(chu)高於水面，以免進(jin)入導致(zhi)汙(wu)染。整(zheng)個(ge)解凍過程(cheng)最(zui)好在 1 分鐘以內，以防融化過(guo)程(cheng)中(zhong)產生(sheng)大(da)量冰晶損(sun)傷(shang)細胞(bao)，約(yue) 1min 後(hou)凍存管(guan)內液(ye)體(ti)溶解，取(qu)出(chu)用酒(jiu)精(jing)噴(pen)拭(shi)凍存管(guan)的(de)外(wai)壁(bi)，立(li)即(ji)拿(na)入超凈臺(tai)內。
二(er)、制(zhi)備(bei)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)
以無菌槍頭(tou)吸取(qu)細胞(bao)凍存液(ye)，置(zhi)於(yu)已放入細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，上(shang)下(xia)吹打 5 次，使(shi)凍存液(ye)與(yu)培養(yang)基(ji)充分混(hun)勻(yun)，盡量減(jian)少凍存液(ye)中(zhong) DMSO 的(de)濃度，減(jian)輕(qing)細胞(bao)損(sun)傷(shang)。以封口膜(mo)封好管(guan)口(kou)。
配(pei)平離心：采用(yong)天(tian)平配(pei)平兩端(duan)，800rpm，室溫(wen)離(li)心(xin) 5min。
三(san)、細胞(bao)計(ji)數(shu)
采(cai)用細胞(bao)計(ji)數(shu)儀(yi) 快速(su)細胞(bao)計(ji)數(shu)及(ji)活率分析儀進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。加入 10ml CASY-ton 至以標記 viable 的(de)管(guan)子(zi)中(zhong)，加入 100ul 細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，顛(dian)倒(dao)混(hun)勻(yun)三(san)次，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。可(ke)見(jian)每(mei)毫升(sheng)懸(xuan)液(ye)中(zhong)有(you)活細胞(bao) 2 乘(cheng) 10 的(de) 5 次(ci)方(fang).
四(si)、細胞(bao)培(pei)養(yang)
離(li)心後(hou)，吸棄上(shang)清液(ye)，不(bu)要(yao)吸到(dao)底部(bu)的(de)細胞(bao)沈澱(dian)。根(gen)據計數(shu)結果，向離心管(guan)內的(de)細胞(bao)沈澱(dian)加入 10ml海星細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)，反復吹打制(zhi)成(cheng)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，吹打過程(cheng)中盡量(liang)不(bu)要(yao)產生(sheng)氣泡。符(fu)合(he)細胞(bao)計(ji)數(shu)要(yao)求(qiu)的(de)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)分(fen)裝入培養(yang)瓶(ping)內，左右(you)輕輕(qing)搖動培養(yang)瓶(ping)，把(ba)細胞(bao)搖均勻，將NEST培養(yang)瓶(ping)放入 37℃，5％CO2 的(de)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)， 2-4 小(xiao)時或者 24-48 小(xiao)時後換液(ye)繼(ji)續(xu)培養(yang)，換液(ye)的(de)時(shi)間由(you)細胞(bao)情況(kuang)而(er)定(ding)，壹(yi)般(ban)以大(da)部(bu)分(fen)細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時換液(ye)為(wei)宜(yi)，比(bi)如(ru)超過(guo)半(ban)數(shu)的(de)細胞(bao)貼壁(bi)，
1、取(qu)凍存管(guan)要(yao)做好保護措(cuo)施(shi)
取(qu)細胞(bao)的(de)過(guo)程(cheng)中未(wei)帶(dai)好防凍手套(tao)，護目(mu)鏡(jing)。此(ci)項尤為(wei)重要(yao)，細胞(bao)凍存管(guan)可(ke)能漏入液(ye)氮(dan)，解凍時凍存管(guan)中(zhong)的(de)氣溫(wen)急劇上(shang)升(sheng)，可(ke)導致(zhi)爆(bao)炸(zha),當(dang)然，選擇好的(de)凍存管(guan)此(ci)狀(zhuang)況(kuang)壹(yi)般(ban)不(bu)會發生(sheng)。
在(zai)常溫(wen)下(xia)，凍存液(ye)中(zhong)的(de) DMSO 對(dui)細胞(bao)的(de)毒(du)副(fu)作較(jiao)大(da)，因此(ci)，必(bi)須(xu)在(zai)壹(yi)到(dao)兩分(fen)鐘內使凍存液(ye)融(rong)化(hua)。如(ru)果復蘇(su)溫(wen)度太(tai)慢，會造成(cheng)細胞(bao)的(de)損(sun)傷(shang)。
壹般(ban)凍存細胞(bao)解(jie)凍時 1ml 細胞(bao)液(ye)要(yao)加 10ml－15ml 培(pei)養(yang)液(ye)，培(pei)養(yang)基(ji)加入過多(duo)，造成(cheng)細胞(bao)濃度過(guo)低(di)，不(bu)利(li)於細胞(bao)的(de)貼壁(bi)，所以進(jin)行(xing)細胞(bao)的(de)計(ji)數(shu)尤為(wei)重要(yao)。
4、壹次(ci)復蘇(su)細胞(bao)不(bu)宜(yi)過(guo)多(duo)
細胞(bao)在(zai)解(jie)凍時，水(shui)浴鍋(guo)內凍存管(guan)太(tai)多(duo)，導致(zhi)傳熱不(bu)佳(jia)，使融化時(shi)間延(yan)長(chang)。正
規(gui)來(lai)說(shuo)，需要(yao)迅速(su)將凍存管(guan)投入到(dao)已經預(yu)熱的(de)水(shui)浴(yu)鍋中迅速(su)解凍，並要(yao)不(bu)斷的(de)搖動，使管(guan)中(zhong)的(de)液(ye)體(ti)迅(xun)速(su)融化。並且壹次(ci)復蘇(su)細胞(bao)過(guo)多(duo)，容易忘(wang)記更換吸頭(tou)和吸管(guan)，導(dao)致(zhi)細胞(bao)交叉(cha)汙(wu)染。
更(geng)多(duo)防止(zhi)細胞(bao)汙(wu)染實(shi)驗(yan)室(shi) 儀(yi)器(qi)設(she)備(bei) > 幹式(shi)細胞(bao)復蘇(su)儀
幹(gan)式(shi)細胞(bao)復蘇(su)儀
幹(gan)式(shi)細胞(bao)復蘇(su)儀采(cai)用(yong)無水加熱(re)方(fang)式(shi)，可(ke)在(zai) GMP 環(huan)境(jing)下(xia)使用，能降(jiang)低(di)傳統復蘇(su)的(de)汙(wu)染風險或潛在危險，且在細胞(bao)活率上(shang)達(da)到(dao)與(yu)傳統水(shui)浴(yu)鍋相媲(pi)美的(de)水(shui)準(zhun).。
幹式(shi)細胞(bao)復蘇(su)儀：安(an)全(quan)智能的(de)細胞(bao)復蘇(su)解決(jue)方(fang)案
幹式(shi)細胞(bao)復蘇(su)儀這(zhe)個(ge)實驗(yan)室(shi)儀(yi)器(qi)采用(yong)無水加熱(re)方(fang)式(shi)，可(ke)在(zai) GMP 環(huan)境(jing)下(xia)使用，能降(jiang)低(di)傳統復蘇(su)的(de)汙(wu)染風險或潛在危險，且在細胞(bao)活率上(shang)達(da)到(dao)與(yu)傳統水(shui)浴(yu)鍋相媲(pi)美的(de)水(shui)準(zhun)，展(zhan)現(xian)出(chu)良好的(de)技(ji)術創(chuang)新(xin)力，從根(gen)本(ben)上(shang)規(gui)避(bi)了(le)水(shui)源(yuan)對(dui)細胞(bao)的(de)潛(qian)在(zai)汙(wu)染風險，確保實驗(yan)環(huan)境(jing)的(de)純(chun)凈與(yu)安全(quan)。
來(lai)源(yuan)：蘇(su)州阿(e)爾(er)法(fa)生物(wu)
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更新時間：2025-08-08
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