幹(gan)細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)的配(pei)制與(yu)保(bao)存

　　幹(gan)細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)的制備和使用(yong)是(shi)幹細(xi)胞(bao)培養(yang)成(cheng)功(gong)的關(guan)鍵(jian)，但在實際(ji)操(cao)作中(zhong)需要註(zhu)意多(duo)個細(xi)節(jie)以(yi)確保(bao)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)、穩定性和實驗可重(zhong)復性。

　　壹(yi)、幹(gan)細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)配制與(yu)保(bao)存：

　　1.嚴(yan)格(ge)遵(zun)循(xun)配(pei)方(fang)

　　根(gen)據幹細(xi)胞(bao)類型(xing)選擇(ze)專(zhuan)用(yong)培養(yang)基(ji)配方(fang)，不(bu)可隨意替(ti)換(huan)成(cheng)分(fen)或調(tiao)整比例（如生長因(yin)子(zi)濃(nong)度、血清批(pi)號）。

　　例(li)：多(duo)能幹(gan)細(xi)胞(bao)依賴(lai)bFGF和LIF維持未(wei)分(fen)化狀(zhuang)態(tai)，神(shen)經(jing)幹細(xi)胞(bao)需要EGF/FGF-2組合(he)。

　　2.無菌操(cao)作

　　全(quan)程(cheng)在超(chao)凈工作(zuo)臺(tai)內(nei)操(cao)作，避免微(wei)生物汙(wu)染(ran)（尤其血清、添(tian)加(jia)劑易(yi)滋(zi)生細(xi)菌(jun)）。

　　分(fen)裝後的培養(yang)基(ji)需抽(chou)樣檢(jian)測無菌(jun)性（如(ru)細(xi)菌(jun)培養(yang)試驗）。

　　3.現(xian)配(pei)現(xian)用(yong)原則

　　生長因(yin)子(zi)和活(huo)性(xing)成(cheng)分(fen)需現(xian)配(pei)現(xian)用(yong)，避免反(fan)復凍(dong)融失(shi)效。

　　長期儲(chu)存需(xu)冷凍(dong)，使用(yong)時(shi)快(kuai)速(su)解(jie)凍(dong)並壹(yi)次性(xing)用(yong)完(wan)。

　　4.過(guo)濾(lv)除(chu)菌

　　使用(yong)濾(lv)膜(mo)正壓過(guo)濾(lv)，避免高(gao)壓滅菌(jun)（高溫會破(po)壞(huai)生長因(yin)子(zi)和蛋白(bai)質成(cheng)分(fen)）。

　　5.保(bao)存條件

　　短期保(bao)存：4℃冷(leng)藏(zang)（≤1周(zhou)），避免反(fan)復開(kai)蓋(gai)汙染(ran)。

　　長期儲(chu)存：分(fen)裝後-20℃~-80℃冷凍(dong)，標(biao)註(zhu)名稱(cheng)、濃(nong)度和日期。

　　幹細(xi)胞(bao)培養(yang)基(ji)關(guan)鍵(jian)註(zhu)意事項(xiang)：

　　1.無(wu)菌操(cao)作

　　全(quan)程(cheng)在超(chao)凈工作(zuo)臺(tai)內(nei)完(wan)成(cheng)，避免微(wei)生物汙(wu)染(ran)（尤其血清和添加劑易(yi)滋(zi)生細(xi)菌(jun)）。

　　分(fen)裝後培養(yang)基(ji)可抽(chou)樣檢(jian)測無菌(jun)性（如(ru)細(xi)菌(jun)培養(yang)試驗）。

　　2.成(cheng)分(fen)穩定性

　　生長因(yin)子(zi)、β-ME等(deng)活(huo)性(xing)成(cheng)分(fen)需現(xian)配(pei)現(xian)用(yong)，避免反(fan)復凍(dong)融。

　　長期儲(chu)存需(xu)冷凍(dong)，使用(yong)時(shi)快(kuai)速(su)解(jie)凍(dong)並壹(yi)次性(xing)用(yong)完(wan)。

　　3.批次壹(yi)致(zhi)性(xing)

　　不同批(pi)次的血(xue)清或(huo)基(ji)礎(chu)培養(yang)基(ji)可能(neng)存在差(cha)異(yi)，需通過(guo)預(yu)實(shi)驗驗證穩定性。

　　建(jian)議(yi)使用(yong)同壹(yi)批(pi)號血(xue)清，並記(ji)錄詳(xiang)細(xi)信(xin)息(xi)（如(ru)供(gong)應商(shang)、生產日期）。