懸(xuan)浮細胞293T 和(he)貼(tie)壁細(xi)胞293T細(xi)胞生(sheng)物(wu)反(fan)應器片狀(zhuang)載體培養(yang)方法(fa)

 貼壁(bi)293T細(xi)胞和(he)懸(xuan)浮293T細(xi)胞在生(sheng)物(wu)反(fan)應器中的(de)高密度培養具(ju)有廣泛(fan)的(de)應用(yong)價(jia)值(zhi)。實驗中(zhong)，我(wo)們使(shi)用(yong)片狀(zhuang)載體分別對293T貼壁細(xi)胞和(he)懸(xuan)浮293T細(xi)胞在固(gu)定床生(sheng)物(wu)反(fan)應器中進行高(gao)密度培養。我(wo)們在實驗過(guo)程(cheng)中采(cai)用(yong)連(lian)續灌(guan)流培養(yang)的(de)方法(fa)，並(bing)借(jie)助(zhu)片(pian)狀(zhuang)載體來支(zhi)撐(cheng)細胞的(de)生長(chang)。通過連(lian)續觀(guan)察(cha)葡(pu)萄(tao)糖消耗，我們(men)評估了(le)細胞培(pei)養(yang)的(de)增殖(zhi)能力(li)和細胞密度的(de)變(bian)化。

實驗方(fang)法(fa)概要：

1. 需要的(de)實驗室儀器和試劑：

   - 3.5L固(gu)定床生(sheng)物(wu)反(fan)應器 x 2

   - 150g 片狀(zhuang)載體

   - 貼壁(bi)293T細胞

   - 懸(xuan)浮(fu)293T細胞

   - DMEM培(pei)養(yang)基

   - 葡萄(tao)糖溶(rong)液

   - 無菌培養皿(min)

   - 離心管

   - 顯(xian)微(wei)鏡

2. 貼壁(bi)293T細(xi)胞的(de)培養(yang)：

   a. 在培(pei)養皿(min)中加(jia)入(ru)足(zu)夠的(de)DMEM培養(yang)基，並(bing)補充(chong)10%的(de)胎牛血(xue)清。

   b. 將(jiang)貼(tie)壁(bi)293T細(xi)胞接(jie)種在培(pei)養皿(min)中，使其達(da)到(dao)對(dui)數(shu)生長期(qi)。

   c. 用(yong)0.25%胰蛋(dan)白(bai)酶-EDTA溶(rong)液將(jiang)細(xi)胞從(cong)培(pei)養皿(min)中解離。

   d. 離心細(xi)胞，去(qu)除(chu)上(shang)清液，用(yong)DMEM培養(yang)基洗滌細(xi)胞。

   e. 鑒定細胞數(shu)目(mu)並(bing)調(tiao)整細胞濃度至2.5×107個(ge)/mL。

3. 懸浮293T細胞的(de)培養(yang)：

   a. 在培(pei)養皿(min)中加(jia)入(ru)足(zu)夠的(de)DMEM培養(yang)基，並(bing)補充(chong)10%的(de)胎牛血(xue)清。

   b. 將(jiang)懸(xuan)浮(fu)293T細(xi)胞接(jie)種在培(pei)養皿(min)中，使其達(da)到(dao)對(dui)數(shu)生長期(qi)。

   c. 用(yong)0.25%胰蛋(dan)白(bai)酶-EDTA溶(rong)液將(jiang)細(xi)胞從(cong)培(pei)養皿(min)中解離。

   d. 離心細(xi)胞，去(qu)除(chu)上(shang)清液，用(yong)DMEM培養(yang)基洗滌細(xi)胞。

   e. 鑒定細胞數(shu)目(mu)並(bing)調(tiao)整細胞濃度至2.3×107個(ge)/mL。

4. 固定床生(sheng)物(wu)反(fan)應器的(de)裝填(tian)：

   a. 準(zhun)備2個(ge)3.5L固定床生(sheng)物(wu)反(fan)應器。

   b. 在每(mei)個(ge)生物(wu)反(fan)應器中加(jia)入(ru)75g片(pian)狀(zhuang)載體。

   c. 用(yong)無菌操作(zuo)將(jiang)貼(tie)壁(bi)293T細(xi)胞接(jie)種在壹個(ge)生物(wu)反(fan)應器中，將(jiang)懸(xuan)浮(fu)293T細(xi)胞接(jie)種在另(ling)壹個(ge)生物(wu)反(fan)應器中。

5. 連(lian)續灌(guan)流培養(yang)：

   a. 連(lian)續灌(guan)流培養(yang)開始(shi)前(qian)，將(jiang)生(sheng)物(wu)反(fan)應器和培(pei)養(yang)基預熱至37℃。

   b. 確保(bao)培(pei)養(yang)基通過生(sheng)物(wu)反(fan)應器的(de)速度為1個(ge)床體(ti)積/小(xiao)時。

   c. 每(mei)隔(ge)12小(xiao)時，取(qu)出(chu)壹定量的(de)培養(yang)基樣品，用(yong)離心管離心10分(fen)鐘。

   d. 分(fen)離上清液並(bing)測定葡萄(tao)糖濃度。

   e. 根(gen)據葡萄(tao)糖消耗情況(kuang)來調(tiao)整培養(yang)基的(de)流速，以(yi)維持葡萄(tao)糖濃度在合(he)適(shi)範(fan)圍內。

   f. 持續進行連(lian)續灌(guan)流培養(yang)6天，每(mei)天觀(guan)察(cha)細胞生(sheng)長(chang)情況(kuang)和細胞密度的(de)變(bian)化。

結果(guo)：

貼(tie)壁(bi)293T細(xi)胞和(he)懸(xuan)浮293T細(xi)胞均能在固(gu)定床生(sheng)物(wu)反(fan)應器中生(sheng)長(chang)。6天後，貼(tie)壁(bi)293T細胞的(de)細胞密度達到2.5×107個(ge)/mL，懸浮293T細胞的(de)細胞密度達到2.3×107個(ge)/mL，細胞的(de)增殖(zhi)約為50倍(bei)。

討(tao)論與(yu)結論：

本(ben)實驗結果(guo)表(biao)明貼壁(bi)293T細(xi)胞和(he)懸(xuan)浮293T細(xi)胞在固(gu)定床生(sheng)物(wu)反(fan)應器中均能實現(xian)高(gao)密度培養。貼(tie)壁293T細(xi)胞的(de)細胞密度稍高於懸(xuan)浮(fu)293T細胞，但(dan)差異(yi)不(bu)明顯(xian)。固(gu)定床式(shi)生(sheng)物(wu)反(fan)應器的(de)連(lian)續灌(guan)流培養(yang)方法(fa)適(shi)用(yong)於兩種細胞的(de)培養(yang)，為(wei)後續的(de)生物(wu)工(gong)程(cheng)研(yan)究提供(gong)了(le)可行的(de)培養(yang)工(gong)藝。該(gai)實驗方(fang)法(fa)可為進壹步研(yan)究和(he)應用(yong)貼壁(bi)和懸浮(fu)293T細(xi)胞的(de)生物(wu)反(fan)應器培養(yang)提供(gong)參考。

蘇(su)州(zhou)阿爾法(fa)生(sheng)物(wu)實驗器材(cai)有限(xian)公司(si)是(shi)壹家(jia)專(zhuan)註於提供(gong)實驗室設備、實驗耗材(cai)和實驗試劑的(de)綜(zong)合(he)性公司(si)。

除(chu)了(le)日(ri)常供(gong)應的(de)實驗室設備主(zhu)要(yao)包(bao)括：冷(leng)凍(dong)離心機、低速離心機、微量離心機、大容(rong)量離心機、 迷妳(ni)離心機移液(ye)器、移液(ye)槍(qiang)、Rainin移液器、 液體(ti)處(chu)理(li)工作(zuo)站(zhan)、移(yi)液(ye)工(gong)作(zuo)站(zhan)、 磁(ci)力(li)攪拌器、加(jia)熱(re)攪(jiao)拌器、 電(dian)動(dong)攪(jiao)拌器、 恒(heng)溫攪拌器、恒(heng)速攪(jiao)拌器、 多(duo)功(gong)能(neng)攪(jiao)拌器、 搖床 恒(heng)溫振蕩器、 氣浴振蕩(dang)器、水浴振蕩(dang)器、 調(tiao)速振(zhen)蕩(dang)器、 回旋(xuan)振(zhen)蕩器、 漩渦(wo)振(zhen)蕩器、 混(hun)勻(yun)振蕩器、 微量振(zhen)蕩器、 大容(rong)量振(zhen)蕩器、 多(duo)功(gong)能(neng)振(zhen)蕩(dang)器、 凝(ning)膠電(dian)泳(yong)儀(yi)、電(dian)泳(yong)儀(yi)、電(dian)泳(yong)槽、 核酸(suan)純(chun)化系統(tong)、核(he)酸(suan)提取儀、 PCR儀、 基因測序儀(yi)、 電(dian)穿(chuan)孔儀(yi)、基因導(dao)入(ru)儀、 DNA合(he)成(cheng)儀、 蛋(dan)白質純(chun)化系統(tong)、 細(xi)胞融(rong)合(he)儀、 蛋白印跡儀、 化學發光(guang)儀、流式(shi)細(xi)胞儀(yi)、生(sheng)物(wu)反(fan)應器、固定床式(shi)反(fan)應器、細胞分(fen)析(xi)儀、細(xi)胞計(ji)數(shu)儀、 超凈(jing)工(gong)作(zuo)臺、 生(sheng)物(wu)安(an)全(quan)櫃(gui)、 發酵罐(guan)、 細(xi)胞破(po)碎(sui)儀、 細(xi)胞生(sheng)物(wu)反(fan)應器、 生化培(pei)養箱、 光(guang)照(zhao)培(pei)養箱、 恒(heng)溫培養箱、 電(dian)熱(re)培(pei)養(yang)箱、 隔(ge)水(shui)式(shi)培(pei)養箱、 CO2培(pei)養(yang)箱、 冷(leng)凍(dong)培(pei)養箱、 振(zhen)蕩(dang)培(pei)養箱、 低(di)溫(wen)培(pei)養箱、人工氣候(hou)箱、 黴(mei)菌培養箱、 培(pei)養(yang)搖(yao)床、 多(duo)功(gong)能(neng)培(pei)養(yang)箱、厭(yan)氧(yang)培(pei)養箱、 粉(fen)碎(sui)機、 破碎(sui)機、 研磨(mo)儀(yi)、球(qiu)磨(mo)機、組織研磨器等核(he)心(xin)產品。

我(wo)們還提供(gong)梅特(te)勒(le)瑞(rui)寧Rainin吸頭(tou)，以其(qi)穩定的(de)和可靠性贏得(de)了(le)廣泛(fan)的(de)認可。不(bu)僅如(ru)此(ci)，我(wo)們還引(yin)進了(le)耐思Nest品牌(pai)的(de)細胞培(pei)養(yang)耗材(cai)、PCR耗材(cai)、搖瓶、細胞工(gong)廠、離心管等豐(feng)富系列產品。這些(xie)產品采(cai)用(yong)耐用(yong)的(de)材(cai)料(liao)和(he)精確的(de)制造(zao)工(gong)藝，確保(bao)了(le)實驗的(de)穩定性和準(zhun)確性。

   此(ci)外(wai)，我們(men)還提供(gong)天根(gen)核酸(suan)提取試劑盒(he)、PCR Taq酶以(yi)及各(ge)種酶等生(sheng)物(wu)試劑。我(wo)們(men)的(de)產品經過(guo)嚴(yan)格(ge)的(de)質量控制，確保(bao)了(le)其在實驗過(guo)程(cheng)中的(de)穩定性和可靠性。碧雲(yun)天生(sheng)化試劑和(he)Biosharp生(sheng)化試劑則(ze)是(shi)我(wo)們(men)配(pei)套(tao)的(de)實驗試劑，可滿足您在生(sheng)物(wu)研(yan)究(jiu)過(guo)程中的(de)各(ge)種需求(qiu)。

為了(le)保(bao)證實驗環境的(de)清潔與(yu)安(an)全，我們提供(gong)了(le)哈爵(jue)雅消毒劑系列產品，包(bao)括乙醇消毒液(ye)、異丙醇消毒液(ye)、過氧(yang)化氫(qing)消毒液(ye)、復方(fang)季銨鹽(L)消毒液(ye)、復方(fang)過(guo)氧(yang)化物(wu)消毒液(ye)等等。這些(xie)產品能(neng)夠有效地殺滅(mie)細(xi)菌和病毒，保(bao)護實驗器材(cai)和樣(yang)本的(de)安全(quan)。

 除(chu)了(le)耗材(cai)外，我(wo)們還提供(gong)國(guo)產CHO細胞、HEK細(xi)胞、393T細(xi)胞、腫瘤(liu)細(xi)胞株(zhu)等細(xi)胞產品服(fu)務(wu)，致力(li)於為(wei)生(sheng)物(wu)領(ling)域(yu)的(de)科學家(jia)提供(gong)解決方(fang)案。