RAW264.7細胞(bao)系(xi)在(zai)破骨(gu)細胞(bao)培養(yang)中(zhong)的(de)應(ying)用(yong)

破骨(gu)細胞(bao)是骨(gu)吸收的主要功(gong)能細胞(bao)，在(zai)骨發(fa)育、生長(chang)、修(xiu)復、重建中起(qi)著(zhe)重要的作用(yong)。由(you)於破(po)骨(gu)細胞(bao)在(zai)體(ti)內數(shu)量(liang)較(jiao)少且(qie)分離困難(nan)，目(mu)前常(chang)用的誘(you)導(dao)法(fa)之壹是(shi)利用(yong)RAW264.7細胞(bao)系(xi)進行(xing)破骨(gu)細胞(bao)培養(yang)。本(ben)文重點介紹(shao)了RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)法，以(yi)及(ji)調節信(xin)號(hao)通路(lu)中(zhong)起(qi)關(guan)鍵(jian)作(zuo)用(yong)的細胞(bao)因子(zi)。

破骨(gu)細胞(bao)是調節骨(gu)組織代(dai)謝(xie)的(de)重要細胞(bao)類型，在(zai)骨發(fa)育、生長(chang)、修(xiu)復和(he)重建中起(qi)著(zhe)至關(guan)重要的作用(yong)。然(ran)而，由(you)於破(po)骨(gu)細胞(bao)在(zai)體(ti)內數(shu)量(liang)少(shao)且(qie)分離困難(nan)，研(yan)究者需(xu)要(yao)尋找合(he)適(shi)的方(fang)法(fa)來進行(xing)破骨細胞(bao)的培(pei)養(yang)。近(jin)年來，利用(yong)RAW264.7細胞(bao)系(xi)進行(xing)破骨(gu)細胞(bao)培養(yang)的(de)方(fang)法(fa)逐(zhu)漸被(bei)廣(guang)泛(fan)采用。本(ben)文將著(zhe)重介紹(shao)RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)法，並(bing)重點探(tan)討(tao)在(zai)誘導(dao)過程(cheng)中(zhong)起(qi)關(guan)鍵(jian)作(zuo)用(yong)的調節信(xin)號(hao)通路(lu)中(zhong)的(de)細胞(bao)因子(zi)。

RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)培(pei)養(yang)破骨(gu)細胞(bao)的步驟(zhou)：

RAW264.7細胞(bao)系(xi)是壹種(zhong)乳(ru)腺腺癌(ai)細胞(bao)系(xi)，廣(guang)泛(fan)用於巨噬細胞(bao)相關(guan)研(yan)究。采用RAW264.7細胞(bao)系(xi)進行(xing)破骨(gu)細胞(bao)培養(yang)需(xu)要(yao)添加(jia)適當(dang)的(de)細胞(bao)因子(zi)來誘導(dao)其(qi)分(fen)化(hua)為功(gong)能成(cheng)熟(shu)的破骨(gu)細胞(bao)。使用(yong)RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)法的(de)關鍵步驟(zhou)：

1. 細胞(bao)的預(yu)處理：將RAW264.7細胞(bao)系(xi)培養(yang)至合(he)適的(de)濃度(du)，將細胞(bao)接種(zhong)於培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，培(pei)養(yang)至細胞(bao)充(chong)分附(fu)著並(bing)達到(dao)80%以(yi)上(shang)的密(mi)度(du)。

2. 細胞(bao)的誘(you)導與刺激(ji)：將培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)的血(xue)清(qing)濃度(du)減(jian)少至1%以(yi)下(xia)，添加(jia)誘導(dao)因子(zi)，如M-CSF、RANKL等，使(shi)細胞(bao)進入(ru)破骨(gu)細胞(bao)分化(hua)的途(tu)徑。

3. 培養(yang)條件的調節：為了增(zeng)強(qiang)細胞(bao)分化(hua)和提高(gao)破(po)骨細胞(bao)生成(cheng)的效率，還可以(yi)調節培(pei)養(yang)條件、

4. 細胞(bao)的培(pei)養(yang)時間：在(zai)誘導(dao)過程(cheng)中(zhong)，需(xu)要(yao)根據(ju)實(shi)驗(yan)的(de)需(xu)求和細胞(bao)反應(ying)的特(te)點確定合適的培養(yang)時間。通常(chang)情況下(xia)，誘(you)導(dao)時間為4-7天。在(zai)培養(yang)期間，細胞(bao)的形(xing)態(tai)和功(gong)能會(hui)發生明(ming)顯(xian)的變(bian)化(hua)，可以(yi)通(tong)過顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細胞(bao)的巨噬細胞(bao)樣形(xing)態(tai)特征(zheng)來判定破骨細胞(bao)的分(fen)化(hua)程(cheng)度(du)。

5. 細胞(bao)的檢(jian)測與鑒(jian)定：在(zai)培養(yang)後(hou)期，使用(yong)特定染色劑(ji)（如骨(gu)質黏著素(su)（tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP）染色）來檢(jian)測破骨細胞(bao)的存(cun)在(zai)和活性(xing)。此外，還可以(yi)通(tong)過其(qi)他(ta)方(fang)法(fa)如免(mian)疫(yi)熒光染色或酶(mei)聯免疫(yi)吸附(fu)實驗(yan)（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）來檢(jian)測破骨細胞(bao)特異(yi)性(xing)標(biao)誌物(wu)的表達水(shui)平(ping)。

6. 數據(ju)分(fen)析與結果(guo)解讀(du)：通過(guo)對(dui)破骨細胞(bao)的形(xing)態(tai)特征(zheng)、特(te)異(yi)性(xing)標(biao)誌物(wu)的表達以(yi)及(ji)功(gong)能活性(xing)的(de)檢(jian)測，可以(yi)評估(gu)RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)法的(de)成(cheng)功(gong)程(cheng)度(du)，並(bing)進壹步研(yan)究破骨細胞(bao)的功(gong)能和作(zuo)用(yong)機(ji)制。

RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)法是(shi)壹種(zhong)常(chang)用的破(po)骨(gu)細胞(bao)培養(yang)方(fang)法(fa)，通(tong)過(guo)加(jia)入適(shi)當(dang)的(de)誘(you)導因子(zi)，可(ke)以(yi)促使RAW264.7細胞(bao)系(xi)分化(hua)為破骨(gu)細胞(bao)。然(ran)而，需(xu)要(yao)註意的(de)是(shi)，RAW264.7細胞(bao)系(xi)雖(sui)然(ran)具(ju)有(you)壹定的相似性，但(dan)與體(ti)內破(po)骨(gu)細胞(bao)還存(cun)在(zai)壹定的差異(yi)。因(yin)此，在(zai)使用(yong)RAW264.7細胞(bao)系(xi)進行(xing)研(yan)究時，需(xu)要(yao)結合(he)其(qi)他(ta)實(shi)驗方(fang)法(fa)和(he)體(ti)內實(shi)驗(yan)證(zheng)據(ju)進(jin)行(xing)結果(guo)的解讀(du)和驗(yan)證(zheng)。

RAW264.7細胞(bao)系(xi)誘導(dao)法是(shi)研(yan)究破骨細胞(bao)的重要方(fang)法(fa)之壹。通(tong)過(guo)添加(jia)適當(dang)的(de)誘(you)導因子(zi)和(he)優(you)化(hua)培養(yang)條件，可以(yi)使(shi)RAW264.7細胞(bao)系(xi)分化(hua)為具(ju)有(you)破(po)骨(gu)細胞(bao)特征(zheng)和功(gong)能的細胞(bao)群。此方(fang)法(fa)為骨代(dai)謝(xie)機(ji)制的(de)研(yan)究以(yi)及(ji)代(dai)謝(xie)性(xing)骨(gu)疾病的研(yan)究提供了有(you)力(li)工(gong)具(ju)，並(bing)有(you)望(wang)為骨相(xiang)關醫學(xue)研(yan)究提供新的思路(lu)和(he)策(ce)略。

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參考文獻(xian)：

1. Zhou Z, et al. (2020). RAW264.7 Macrophage-Derived Exosomal miR-155 Regulates Osteoclastogenesis and Bone Resorption via Targeting SOCS1. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 8: 614.

2. Boyce BF, et al. (2015). Osteoclasts and Their Differentiation. In: Bone Research Protocols, Methods in Molecular Biology, vol. 1130. Humana Press.

3. Takayanagi H, et al. (2021). Signaling Pathways in Osteoclasts and the Role in Bone Homeostasis. Trends in Molecular Medicine, 27(5): 443-459.