瓊(qiong)脂(zhi)糖凝(ning)膠(jiao)電泳影(ying)響凝膠聚(ju)合(he)的因素(su)有(you)哪(na)些(xie)

  對於壹般(ban)的分(fen)析(xi)工(gong)作，特(te)別是定量(liang)分(fen)析(xi)工(gong)作來(lai)講，人們強(qiang)調制備的凝膠(jiao)要(yao)有很好的可(ke) 重(zhong)復性。如果制備得(de)到的凝膠(jiao)本(ben)身(shen)沒有重(zhong)復性(xing)，比如孔(kong)徑前(qian)後兩次(ci)凝(ning)膠(jiao)相(xiang)差頗(po)大，那(na)麽(me)在(zai) 這(zhe)樣的條(tiao)件(jian)下(xia)，所(suo)得(de)到的分(fen)析(xi)結(jie)果，其(qi)可(ke)信性(xing)就(jiu)有(you)問(wen)題(ti)，往往(wang)會使幾次(ci)結(jie)果不能(neng)重(zhong)復。所(suo) 以(yi)，為了(le)要(yao)獲得(de)可(ke)靠的分(fen)析(xi)結(jie)果，在制膠時(shi)對能(neng)影(ying)響凝膠聚(ju)合(he)的種種(zhong)因(yin)素必須(xu)加以(yi)控(kong)制。 有哪(na)些(xie)主要(yao)因素(su)，又怎(zen)樣來(lai)控(kong)制它們的條(tiao)件(jian)，分(fen)別簡(jian)述(shu)如下：
(1) 制備凝(ning)膠用(yong)的主要(yao)試(shi)劑

• 丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)、甲叉雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)至少(shao)是分(fen)析(xi)純級的試(shi)劑。存(cun)放時(shi)間壹般(ban)不(bu)超(chao)過1年, 如(ru)果存放(fang)時間過長，丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)受潮(chao)水(shui)解，丙(bing)烯(xi)酸含(han)量(liang)增(zeng)多。若(ruo)利(li)用(yong)它為單(dan)體,聚(ju)合(he)時(shi)孔(kong)徑很 不均(jun)壹，表(biao)現現象是聚(ju)合(he)時(shi)間延(yan)長，甚至很難(nan)聚(ju)合(he)，這(zhe)就(jiu)必(bi)須(xu)重結(jie)晶。對於定量分(fen)析(xi)工(gong)作壹(yi) 般(ban)都(dou)要(yao)求對單(dan)體進行重結(jie)晶。

丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)和甲叉雙丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺(an)應放(fang)在棕色(se)瓶(ping)屮(cao)，幹(gan)燥(zao)，低(di)溫( + 4C)條(tiao)件(jian)下(xia)保(bao)存(cun)。丙(bing)烯(xi)酰(xian) 胺(an)經(jing)陽光(guang)照(zhao)射(she)，自身(shen)會聚(ju)合(he)成長鏈(lian)，酰(xian)胺(an)基也會(hui)縮合(he)形(xing)成亞胺(an)橋,從(cong)而影(ying)響交聯結(jie)果。
配制成的貯存(cun)液，也應(ying)盛(sheng)於棕色(se)瓶(ping)中(zhong)，於+ 4 C保(bao)存(cun)，時間不超(chao)過1個月(yue)。

• TEMED應密封(feng)置(zhi)於(yu)冰箱(xiang)中(zhong)貯存(cun)，使用(yong)的量應(ying)使(shi)凝膠能(neng)在(zai)30〜60分(fen)鐘(zhong)內(nei)聚(ju)合(he)完 成，如前(qian)述(shu)不再重(zhong)復。

• 過硫酸鉉(xuan)應(ying)在(zai)臨(lin)用前(qian)配制。配制好的溶液應(ying)在(zai)冰(bing)箱(xiang)中(zhong)存(cun)放,使用(yong)期(qi)不超(chao)過1星(xing) 期(qi)。存放1星(xing)期(qi)後的過硫酸鉉(xuan)，可(ke)能(neng)仍會(hui)起(qi)作用(yong)，但(dan)不適(shi)用(yong)來(lai)作精(jing)細(xi)的分(fen)析(xi)工(gong)作。

(2) 溫度(du)
必須(xu)保(bao)持(chi)聚(ju)合(he)溫度(du)的恒定(ding)。聚(ju)合(he)速度(du)與(yu)溫度(du)有關(guan)，壹(yi)般(ban)是溫度(du)高聚(ju)合(he)快(kuai)，而聚(ju)合(he)的快 慢(man)影(ying)響交聯孔(kong)徑的大小(xiao)，所以(yi)，必(bi)須(xu)保(bao)持(chi)恒(heng)定溫度(du)。通常(chang)都(dou)固(gu)定在與(yu)電泳相(xiang)同(tong)的溫度(du)。凝 膠(jiao)的聚(ju)合(he)反應是壹個(ge)放熱(re)反應，所以(yi)必(bi)須(xu)有效(xiao)地(di)散熱(re)。壹般(ban)用(yong)薄(bo)壁(bi)玻(bo)璃(li)管(guan)在流通空(kong)氣(qi)中進 行凝膠(jiao)聚(ju)合(he)，便(bian)能(neng)達(da)到散熱(re)的目的°
(3) 氧氣(qi)
氧(yang)是凝膠(jiao)鏈合(he)成反應的終(zhong)止(zhi)劑(ji)。所(suo)以(yi)，制膠前(qian)必須(xu)充分(fen)抽(chou)氣(qi)，使(shi)02降(jiang)低(di)到壹定(ding)水(shui)平 以(yi)下(xia)或(huo)者(zhe)充以(yi)惰(duo)性氣體(ti),如(ru)氧氣(qi)來降(jiang)低(di)02的含(han)量(liang)。
(4) 光(guang)照(zhao)
光(guang)照(zhao)的時間和強(qiang)度(du)都(dou)和(he)凝膠的聚(ju)合(he)速度(du)有關(guan)。因(yin)此(ci)，必(bi)須(xu)固定(ding)光(guang)源(yuan)強(qiang)度(du)、光(guang)照(zhao)距(ju)離和(he) 光(guang)照(zhao)時(shi)間。
註(zhu)意和(he)控(kong)制好以(yi)上(shang)幾點(dian),制備得(de)到的凝膠(jiao)其(qi)可(ke)重(zhong)復性的程度(du)就(jiu)高(gao)。
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