HE染色(se)實驗(yan)中(zhong)常(chang)見問(wen)題及(ji)應對(dui)措(cuo)施(shi)

HE染色(se)實驗(yan)常(chang)見問(wen)題及(ji)解決方案

    HE染色(se)是(shi)石蠟切片技術(shu)中(zhong)常(chang)用(yong)的(de)染色(se)方法(fa)之壹，簡(jian)稱為蘇(su)木精-伊(yi)紅(hong)染色(se)法(fa)。該(gai)方法(fa)使(shi)用(yong)堿(jian)性的蘇(su)木精染液(ye)將(jiang)細胞(bao)核(he)內(nei)的染色(se)質(zhi)和胞(bao)質(zhi)內的核(he)酸(suan)染成紫(zi)藍(lan)色(se)，同(tong)時使(shi)用(yong)酸性染料(liao)伊(yi)紅(hong)將(jiang)細胞(bao)質(zhi)和(he)細胞(bao)外(wai)基質(zhi)中(zhong)的(de)成分染成紅(hong)色(se)。
 
1、切(qie)片出現白色斑(ban)點
原(yuan)因(yin)：(1) 烘(hong)片(pian)溫(wen)度(du)過低(di)，導致玻片(pian)未幹(gan)透(tou)；(2) 切(qie)片在二甲苯(ben)中(zhong)停(ting)留時間過短(duan)；(3) 二甲苯(ben)使(shi)用(yong)時間過長，導(dao)致脫(tuo)蠟不(bu)效果不(bu)好。
對(dui)策：若玻片(pian)未幹(gan)透(tou)，先(xian)用無水乙(yi)醇去(qu)除水分，再重(zhong)新脫(tuo)蠟。若斑點是(shi)由於(yu)停留時間過短(duan)或(huo)使(shi)用(yong)時間過長造(zao)成的，則(ze)需(xu)重(zhong)新操(cao)作(zuo)，延長停(ting)留(liu)時間或(huo)更(geng)換(huan)二(er)甲苯(ben)。
 
2、細胞(bao)核(he)染色(se)暗淡(dan)
原因(yin)：(1) 切(qie)片(pian)在蘇(su)木精染色(se)液(ye)中停留時間太(tai)短(duan)；(2) 蘇(su)木精染色(se)液(ye)過度(du)氧化；(3) 分(fen)化步(bu)驟(zhou)時間過長；(4) 骨組織(zhi)脫(tuo)鈣過度(du)。
對策：重(zhong)新染色(se)，若(ruo)固(gu)定(ding)時間過長導(dao)致染色(se)能(neng)力減(jian)弱，需(xu)延長蘇(su)木精染色(se)液(ye)停留時間或(huo)采用增(zeng)加組(zu)織(zhi)嗜堿(jian)性的方法(fa)。
 
3、細胞(bao)核(he)過染
原(yuan)因(yin)：(1) 切(qie)片(pian)在蘇(su)木精染色(se)液(ye)中停留時間過長；(2) 切(qie)片(pian)過厚(hou)；(3) 分化步(bu)驟(zhou)時間過短(duan)。
對策：若非切片(pian)過厚(hou)導致，重(zhong)新染色(se)並適(shi)當(dang)調整(zheng)染色(se)和(he)分化時間。若是(shi)切片(pian)過厚(hou)，需(xu)重(zhong)新切(qie)片(pian)。
 
4、細胞(bao)核(he)呈(cheng)紅(hong)、棕色改(gai)變
原因(yin)：蘇(su)木精染色(se)液(ye)過度(du)氧化或(huo)切片(pian)返(fan)藍不(bu)足(zu)。
對策：檢(jian)查蘇(su)木精染色(se)液(ye)的染色(se)能(neng)力，及(ji)時更(geng)換(huan)過度(du)氧化的(de)液(ye)體。在蘇(su)木精染色(se)後(hou)，用流(liu)水(shui)、溫(wen)水或(huo)弱堿(jian)性溶(rong)液(ye)如稀氨水(shui)、0.2%碳(tan)酸氫(qing)鈉等進(jin)行足(zu)夠(gou)的藍(lan)化處(chu)理。
5、伊(yi)紅(hong)著(zhe)色(se)淡(dan)
原因(yin)：（1）伊(yi)紅(hong)染液(ye)的pH值可(ke)能(neng)大(da)於5；（2）藍(lan)化液(ye)殘留過多(duo)；（3）切(qie)片(pian)太(tai)薄；（4）切(qie)片經伊(yi)紅(hong)染色(se)後(hou)在乙(yi)醇脫(tuo)水(shui)時間過長。
對(dui)策：檢(jian)查伊(yi)紅(hong)染液(ye)的pH值，如果必要(yao)的話，用乙(yi)酸將(jiang)其(qi)調節(jie)在4～5之間，從而(er)使(shi)伊(yi)紅(hong)染色(se)色(se)彩(cai)艷麗。確(que)保(bao)每(mei)次藍化步(bu)驟(zhou)完成後，使(shi)用(yong)的弱堿(jian)性溶(rong)液(ye)被充(chong)分(fen)洗(xi)去(qu)，玻片(pian)上(shang)沒(mei)有(you)殘留的(de)弱堿(jian)性溶(rong)液(ye)。檢(jian)查切片的(de)厚(hou)度(du)。脫(tuo)水(shui)時不(bu)要讓(rang)切(qie)片在低(di)濃度(du)乙(yi)醇停(ting)留時間過長，因(yin)為含水多(duo)的(de)低(di)濃度(du)乙(yi)醇會(hui)將(jiang)伊(yi)紅(hong)的(de)顏色分(fen)化掉(diao)。

6、細胞(bao)質(zhi)過染
原(yuan)因(yin)：（1）伊(yi)紅(hong)染色(se)液(ye)濃度(du)太(tai)高(gao)，特(te)別(bie)是(shi)焰(yan)紅(hong)燃(ran)料(liao)、四溴(xiu)四氯熒光素鈉的(de)存在；（2）切片在伊(yi)紅(hong)染色(se)時間過長；（3）切(qie)片(pian)在伊(yi)紅(hong)染色(se)後(hou)經乙(yi)醇脫(tuo)水(shui)步(bu)驟(zhou)時過的(de)太(tai)快，而(er)使(shi)乙(yi)醇分(fen)化伊(yi)紅(hong)的(de)作(zuo)用不(bu)能(neng)產生(sheng)。
對策：適(shi)當(dang)稀釋伊(yi)紅(hong)染色(se)液(ye)，減(jian)少(shao)伊(yi)紅(hong)染色(se)時間，或(huo)者(zhe)使(shi)切(qie)片在乙(yi)醇脫(tuo)水(shui)等步(bu)驟(zhou)時，停(ting)留(liu)時間相對(dui)均勻(yun)。同樣(yang)，也(ye)要(yao)檢(jian)查切片的(de)厚(hou)度(du)是(shi)否(fou)合適(shi)。

7、切片中出(chu)現藍(lan)黑(hei)色沈(chen)澱(dian)物(wu)
原因(yin)：蘇(su)木精染色(se)液(ye)中的金屬膜(mo)，黏附在玻片(pian)上(shang)。
對(dui)策：每天染色(se)前(qian)仔細過濾(lv)蘇(su)木精染色(se)液(ye)，或(huo)建議(yi)使(shi)用(yong)半氧化蘇(su)木精染色(se)液(ye)，如Gill蘇(su)木精染色(se)液(ye),可(ke)以(yi)避(bi)免過多(duo)的(de)金(jin)屬膜(mo)產(chan)生(sheng)。

8、顯微鏡(jing)下見切片(pian)內(nei)有(you)大(da)量(liang)水(shui)珠
原因(yin)：切(qie)片(pian)經梯度(du)乙(yi)醇處(chu)理後(hou)沒(mei)有(you)脫(tuo)水(shui)，導致二甲苯(ben)透(tou)明中(zhong)性(xing)樹(shu)膠封(feng)固(gu)後殘(can)留大(da)量(liang)水(shui)分(fen)。
對(dui)策：移去蓋玻片(pian)，用二甲苯(ben)溶(rong)解封(feng)固(gu)劑(ji)如(ru)中性(xing)樹(shu)膠。將(jiang)切片(pian)置入(ru)新鮮(xian)的(de)無水乙(yi)醇中(zhong)，待(dai)切(qie)片重(zhong)新脫(tuo)水(shui)後，用新二(er)甲苯(ben)透(tou)明，中(zhong)性(xing)樹(shu)膠封(feng)固(gu)。所有(you)用(yong)於脫(tuo)水(shui)和透明的(de)液(ye)體，在使(shi)用(yong)壹定(ding)時間以後(hou)，應即時更(geng)換(huan)。

9、光鏡下切(qie)片(pian)某些區(qu)域(yu)難(nan)以(yi)聚焦(jiao)
原因(yin)：蓋玻片(pian)上(shang)可(ke)能(neng)有封(feng)固(gu)切片(pian)的封(feng)固(gu)劑(ji)。
對(dui)策：移去蓋玻片(pian)，重(zhong)新用(yong)幹(gan)凈的(de)蓋玻片(pian)封(feng)片。

10、封(feng)固(gu)劑(ji)從(cong)蓋玻片(pian)與載玻片(pian)之間的縫隙(xi)回縮
原(yuan)因(yin)：（1）蓋玻片(pian)彎(wan)曲(qu)或(huo)不(bu)平(ping)整(zheng)；（2）封(feng)固(gu)劑(ji)含二甲苯(ben)過多(duo)，稀釋過度(du)。
對策：移去蓋玻片(pian)，重(zhong)新找(zhao)壹(yi)張(zhang)蓋玻片(pian)，用幹(gan)凈的(de)封(feng)固(gu)劑(ji)封(feng)片。每(mei)天保(bao)證(zheng)盛裝封(feng)固(gu)劑(ji)的(de)容器(qi)密封(feng)性良好，在封(feng)固(gu)結(jie)束(shu)的(de)時候蓋緊蓋子(zi)。盡量(liang)使(shi)用(yong)小的容器(qi)盛裝封(feng)固(gu)劑(ji)，壹(yi)旦(dan)封(feng)固(gu)劑(ji)太(tai)粘(zhan)稠，就(jiu)可(ke)以(yi)廢棄(qi)不(bu)再使(shi)用(yong)。

11、切片從脫(tuo)蠟的二甲苯(ben)經過梯(ti)度(du)乙(yi)醇進(jin)入(ru)水(shui)溶(rong)液(ye)時，水(shui)和(he)玻片(pian)呈(cheng)現乳白色混(hun)濁(zhuo)改(gai)變
原因(yin)：用(yong)於(yu)脫(tuo)蠟的二甲苯(ben)沒(mei)有(you)被乙(yi)醇洗(xi)幹(gan)凈。
對(dui)策：更(geng)換(huan)洗(xi)滌(di)二甲苯(ben)的(de)乙(yi)醇液(ye)體，把切片(pian)重(zhong)新放(fang)回無水乙(yi)醇，脫(tuo)去(qu)玻片(pian)上(shang)的(de)水分。

12、細胞(bao)核(he)灰藍
原(yuan)因(yin)：（1）組(zu)織(zhi)處理溫(wen)度(du)過高(gao)、過熱(re)，在石蠟停留的時間過長；（2）固(gu)定(ding)時間太(tai)短(duan)，接下來(lai)就直(zhi)接(jie)在高(gao)濃度(du)的乙(yi)醇中(zhong)行脫(tuo)水(shui)處理。
對(dui)策：理論上(shang)來(lai)說(shuo)，加熱(re)處(chu)理僅(jin)在組織浸(jin)蠟步(bu)驟(zhou)才使(shi)用(yong)，組織不(bu)能(neng)在熱的蠟液(ye)中停留過長時間。如果由於(yu)某些原(yuan)因(yin)不(bu)能(neng)進(jin)行下步(bu)包(bao)埋(mai)處(chu)理，完成浸(jin)蠟處理後(hou)的組(zu)織，可(ke)將(jiang)組織(zhi)連同塑料(liao)包埋(mai)盒壹並放置在室(shi)溫(wen)空(kong)氣(qi)中，冷卻(que)凝(ning)固(gu)，以備(bei)包(bao)埋(mai)。待(dai)需(xu)要包(bao)埋(mai)時再重(zhong)新加溫(wen)直至石蠟融化即可(ke)。組(zu)織(zhi)在處理前(qian)必須(xu)確(que)保(bao)固(gu)定(ding)良好，脫(tuo)水(shui)最好(hao)能(neng)從低(di)濃度(du)的乙(yi)醇開始。

13、切(qie)片(pian)中(zhong)出現類(lei)似(si)色素樣(yang)的(de)點(dian)狀結(jie)晶(jing)和黑(hei)色光(guang)滑(hua)的(de)細胞(bao)核(he)
原(yuan)因(yin)：切(qie)片(pian)封(feng)片前(qian)放(fang)置(zhi)在空(kong)氣(qi)中時間太(tai)長，以(yi)至於二(er)甲苯(ben)揮(hui)發(fa)切片(pian)幹(gan)燥所致。
對策：移去組織(zhi)切(qie)片(pian)上(shang)的(de)蓋玻片(pian)和封(feng)固(gu)劑(ji)，重(zhong)新處(chu)理。將(jiang)切片(pian)水洗數(shu)分(fen)鐘，然後(hou)重(zhong)新脫(tuo)水(shui)、透明、封(feng)固(gu)。封(feng)片過程(cheng)中(zhong)要保(bao)持(chi)組織切片(pian)的(de)輕(qing)度(du)濕(shi)潤，盡(jin)量(liang)不(bu)要讓(rang)其(qi)幹(gan)燥。
 
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