穩定細胞(bao)株的篩選步驟(zhou)

穩定細胞(bao)株是(shi)壹(yi)種常(chang)用於基(ji)因表達、藥(yao)物篩選和蛋白(bai)質表達等(deng)領域(yu)的工具。但是，穩定細胞(bao)株的篩選需要(yao)經(jing)過(guo)壹(yi)系(xi)列的步驟(zhou)和(he)實(shi)驗，下面(mian)介(jie)紹壹(yi)下穩定細胞(bao)株篩(shai)選(xuan)的兩種方(fang)法(fa)和(he)穩定細胞(bao)株的篩選簡(jian)要(yao)步驟(zhou)：
壹(yi)、質粒(li)轉染法(fa)
先(xian)把質粒(li)整(zheng)合(he)到染色(se)體(ti)上(shang)後，用相(xiang)應(ying)的質粒(li)DNA中的抗(kang)性(xing)標(biao)誌來(lai)篩選(xuan)該(gai)細胞(bao)系(xi)，單克(ke)隆(long)篩(shai)選(xuan)穩定細胞(bao)株。
1、篩(shai)選(xuan)濃(nong)度(du)測(ce)定(ding)，以10~14 天(tian)細胞(bao)全(quan)部死亡的抗(kang)生素濃度(du)為(wei)篩(shai)選(xuan)濃度(du)；
2、進行(xing)細胞(bao)接(jie)種，轉(zhuan)染實(shi)驗前天接(jie)種細胞(bao)，各(ge)種細胞(bao)的平板(ban)密(mi)度(du)依(yi)據(ju)各(ge)種細胞(bao)的生長(chang)率和(he)細胞(bao)形(xing)狀(zhuang)而(er)定(ding)。進行(xing)轉(zhuan)染當天(tian)細胞(bao)密(mi)度(du)應(ying)達到60%~80% 覆(fu)蓋(gai)；
3、進行(xing)細胞(bao)轉(zhuan)染
4、利用質粒(li)上(shang)含有的抗(kang)性(xing)選(xuan)擇(ze)進行(xing)篩(shai)選，並(bing)鑒定(ding)篩選結果(guo)。
 
二、慢病(bing)毒(du)轉染法(fa)：
應(ying)用逆(ni)轉(zhuan)錄病(bing)毒(du)，慢病(bing)毒(du)轉染，篩選(xuan)穩定細胞(bao)株。慢(man)病(bing)毒(du)可以攜(xie)帶(dai)外(wai)源基(ji)因隨(sui)機整(zheng)合(he)進基(ji)因組(zu)。轉染得(de)到穩定細胞(bao)株的效(xiao)率高(gao)，是建(jian)立(li)穩定株的比較不錯的方式。
1、將人(ren)源化(hua)的抗(kang)體(ti)基(ji)因轉(zhuan)接到慢(man)病(bing)毒(du)載體(ti)上(shang)，
2、使用包裝(zhuang)細胞(bao)，壹(yi)般(ban)為(wei)293細胞(bao)，包裝(zhuang)出病(bing)毒(du)，不同類型(xing)病毒(du)包裝(zhuang)時間壹般(ban)在(zai)3-5天(tian)。 
3、用病(bing)毒(du)轉染目(mu)的細胞(bao)。包裝(zhuang)好的病毒(du)要先(xian)測滴(di)度(du)，根(gen)據(ju)滴(di)度(du)決定轉(zhuan)染目(mu)的細胞(bao)的病毒(du)量。
4、後(hou)期篩選。轉(zhuan)染目(mu)的細胞(bao)1-2天(tian)後(hou)加抗(kang)生素篩選得(de)到穩定細胞(bao)株。

 
穩定細胞(bao)株篩(shai)選(xuan)步(bu)驟(zhou)：
1.構(gou)建(jian)攜(xie)帶(dai)目(mu)標(biao)基(ji)因的載體
首(shou)先(xian)，需(xu)要(yao)將目(mu)標(biao)基(ji)因克(ke)隆(long)到攜(xie)帶(dai)有選擇(ze)標(biao)記(ji)的載體中，例(li)如(ru)含有抗(kang)生素抗(kang)性(xing)基(ji)因的質粒(li)。然後(hou)將該載(zai)體(ti)轉染到目(mu)標(biao)細胞(bao)中。
 
2.選(xuan)擇(ze)標(biao)記(ji)篩(shai)選
轉(zhuan)染後的細胞(bao)需(xu)要(yao)在(zai)含(han)有抗(kang)生素的培養(yang)基(ji)中進行(xing)篩(shai)選。只有成功轉(zhuan)染的細胞(bao)才能夠在(zai)含(han)有抗(kang)生素的培養(yang)基(ji)中生長(chang)。
 
3.穩定細胞(bao)株的篩選
在(zai)完(wan)成(cheng)了(le)選(xuan)擇標(biao)記(ji)篩(shai)選後(hou)，需要(yao)對(dui)細胞(bao)進行(xing)進壹步(bu)的篩選，以得(de)到穩定的細胞(bao)株。這可以通(tong)過(guo)對(dui)細胞(bao)進行(xing)單(dan)克(ke)隆(long)分(fen)離(li)來(lai)實(shi)現。具體地(di)，將轉染後的細胞(bao)在(zai)96孔(kong)板(ban)中進行(xing)單(dan)克(ke)隆(long)分(fen)離(li)，每(mei)個(ge)孔(kong)只保(bao)留壹(yi)個(ge)細胞(bao)。然後(hou)，通過(guo)檢(jian)測(ce)細胞(bao)株的表達水(shui)平和(he)穩定性(xing)，篩(shai)選(xuan)出(chu)較佳的穩定細胞(bao)株。
 
總(zong)結：
穩定細胞(bao)株的篩選是壹(yi)個(ge)復雜(za)的過(guo)程，需(xu)要仔(zai)細設(she)計(ji)和(he)實(shi)驗。通過(guo)上(shang)述步驟(zhou)，可(ke)以篩(shai)選(xuan)出高(gao)表達、穩定的細胞(bao)株，為(wei)後(hou)續(xu)的實(shi)驗和研(yan)究(jiu)提(ti)供了(le)有力的支(zhi)持(chi)。
 
 蘇(su)州(zhou)阿爾(er)法(fa)生物(wu)提(ti)供細胞(bao)株、基(ji)因敲(qiao)除細胞(bao)株、培養(yang)基(ji)、細胞(bao)培養(yang)試(shi)劑細胞(bao)培養(yang)耗(hao)材(cai)等廣(guang)泛(fan)應(ying)用於細胞(bao)生物(wu)學(xue)研(yan)究(jiu)。