mRNA疫(yi)苗生(sheng)產(chan)流程及具(ju)體(ti)步(bu)驟

Step 1：將(jiang)含(han)病毒(du)的核酸序列(lie)的質(zhi)粒，註入到大(da)腸桿菌中，這裏(li)的質(zhi)粒可(ke)以(yi)是(shi)從(cong)病(bing)毒(du)中提取(qu)，但(dan)更(geng)安(an)全(quan)有效(xiao)的方(fang)法(fa)是(shi)根據(ju)發(fa)表(biao)的核酸序列(lie)優化設(she)計直(zhi)接(jie)連(lian)接到(dao)質(zhi)粒上(shang)，避(bi)免跟(gen)病毒(du)直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)；

Step 2：在溫暖適宜的條件下，大(da)量繁殖生(sheng)長(chang)攜帶(dai)了(le)質(zhi)粒的大(da)腸桿菌；

Step 3：將(jiang)上(shang)述生(sheng)長(chang)繁殖的大(da)腸桿菌轉(zhuan)移(yi)至體(ti)積(ji)更(geng)大(da)的營(ying)養液(ye)裏(li)，適宜條件下存(cun)放發(fa)酵(jiao)，使(shi)其(qi)復(fu)制億萬(wan)級(ji)別的質(zhi)粒；

Step 4：發(fa)酵(jiao)結(jie)束(shu)後(hou)，加入酶(mei)或(huo)者(zhe)其他(ta)化學(xue)物(wu)質(zhi)分(fen)解(jie)大(da)腸桿菌細胞(bao)壁，收(shou)集並(bing)純化質(zhi)粒；

Step 5：檢測(ce)上(shang)述的質(zhi)粒，確保質(zhi)粒攜帶(dai)的基因(yin)序(xu)列(lie)未(wei)發(fa)生(sheng)變異(yi)，能(neng)夠用(yong)於(yu)後(hou)續(xu)的疫苗生(sheng)產(chan)；

Step 6：加入限(xian)制性核酸(suan)內(nei)切酶，從(cong)環(huan)狀(zhuang)的質(zhi)粒中切割出(chu)直(zhi)線(xian)段的病毒(du)基因(yin)，並(bing)除(chu)去(qu)殘(can)留的細菌和(he)質(zhi)粒片(pian)段(duan)；

Step 7：根(gen)據“中心(xin)法則"，以DNA為模(mo)板(ban)轉錄成mRNA；mRNA進入人(ren)體(ti)，其(qi)攜帶(dai)的病毒(du)基因(yin)即(ji)可(ke)在(zai)體(ti)內(nei)翻(fan)譯出病毒(du)蛋(dan)白，即(ji)為抗體(ti)，用(yong)於(yu)中和病(bing)毒(du)；mRNA也(ye)需(xu)進行質(zhi)量(liang)中控(kong)，確(que)保能(neng)用(yong)於(yu)後(hou)續(xu)的疫苗生(sheng)產(chan)；

Step 8：準(zhun)備(bei)脂質(zhi)，用(yong)於(yu)保護(hu)mRNA進入體(ti)內(nei)時不(bu)會被破(po)壞(huai)；

Step 9：精(jing)確的控(kong)制著mRNA和(he)脂(zhi)質(zhi)流(liu)速(su)，將(jiang)他(ta)們混(hun)合成脂質(zhi)納(na)米(mi)粒。

具(ju)體(ti)生(sheng)產(chan)步(bu)驟如(ru)下：

步(bu)驟壹(yi)：從(cong)冷庫(ku)中提取(qu)DNA

第(di)壹步(bu)生(sheng)產(chan)人員會(hui)從(cong)主(zhu)細胞(bao)庫(ku)中提取(qu)RNA/dna，提取(qu)後的DNA會被技(ji)術(shu)人(ren)員提取(qu)後保存(cun)在-150℃的小(xiao)實驗瓶(ping)中。之(zhi)後技(ji)術人(ren)員將會把(ba)解(jie)凍了(le)的質(zhi)粒註入進壹批(pi)已(yi)經做了(le)人(ren)工(gong)調(tiao)整(zheng)了的大(da)腸桿菌裏(li)，從(cong)而(er)使(shi)大(da)腸桿菌把(ba)質(zhi)粒帶入自(zi)己細胞(bao)裏(li)。通常(chang)情(qing)況下壹小(xiao)瓶(ping)裝(zhuang)滿(man)質(zhi)粒的實驗瓶(ping)能(neng)夠用(yong)來(lai)生(sheng)產(chan)5000萬(wan)劑疫苗。

步(bu)驟二(er)：成長(chang)繁殖

涵(han)蓋(gai)了大(da)腸桿菌以(yi)及(ji)質(zhi)粒的溶液(ye)將會(hui)被裝(zhuang)在(zai)實驗瓶(ping)中，並且在(zai)壹(yi)種溫暖無(wu)菌的琥(hu)珀色(se)生(sheng)長(chang)培養基中生(sheng)長(chang)與繁殖。

步(bu)驟三(san)：發(fa)酵(jiao)混(hun)合物(wu)（細菌）

以(yi)上(shang)提到的細菌會(hui)被給(gei)予(yu)壹晚的時間進行生(sheng)長(chang)繁殖，然(ran)後(hou)會被轉(zhuan)移(yi)至(zhi)營(ying)養液(ye)中存(cun)放四天(tian)，進行細菌繁殖和(he)DNA復(fu)制。

步(bu)驟四：凈(jing)化並采集(ji)DNA

發(fa)酵(jiao)過(guo)程在經歷(li)了四天(tian)後(hou)，研(yan)究人(ren)員將(jiang)會往裏(li)註入(ru)壹種化學(xue)物(wu)質(zhi)來(lai)分(fen)解(jie)細菌的細胞(bao)壁，隨(sui)後會凈化混(hun)合物(wu)，並且最(zui)終(zhong)提取(qu)到僅留的質(zhi)粒。分解細胞(bao)壁——凈(jing)化提取(qu)質(zhi)粒

步(bu)驟五(wu)：質(zhi)量(liang)檢(jian)測(ce)

被提取(qu)出來(lai)的質(zhi)粒將會被技(ji)術(shu)人(ren)員通過(guo)和之(zhi)前的樣品進行對(dui)比，以(yi)確認剛剛生(sheng)產(chan)的質(zhi)粒的病毒(du)基因(yin)序(xu)列(lie)能(neng)夠被用(yong)於(yu)生(sheng)產(chan)疫苗。

步(bu)驟六(liu)：質(zhi)粒線(xian)性化

質(zhi)粒通過(guo)質(zhi)檢(jian)後(hou)，技(ji)術(shu)人員將會(hui)加入酵(jiao)素(su)進行環(huan)狀(zhuang)質(zhi)粒切割，把(ba)病(bing)毒(du)基因(yin)從(cong)環(huan)狀(zhuang)狀(zhuang)態(tai)切割成直線(xian)段。

步(bu)驟七(qi)：純(chun)化DNA

技術(shu)人員(yuan)將會將(jiang)純(chun)度(du)已經較(jiao)高(gao)的混(hun)合物(wu)進行再壹次(ci)純(chun)化，用(yong)於(yu)濾(lv)出(chu)殘(can)留的細菌或(huo)質(zhi)粒片(pian)段(duan)。

步(bu)驟八：運輸

在(zai)運輸前(qian)每(mei)瓶DNA都(dou)會(hui)被冷凍、裝(zhuang)袋(dai)、密封，然(ran)後被放入壹(yi)個裝(zhuang)有(you)足夠幹(gan)冰的容(rong)器裏(li)，這些容(rong)器將(jiang)會(hui)被轉(zhuan)運到另(ling)壹(yi)家(jia)工(gong)廠(chang)進行轉(zhuan)錄。

步(bu)驟九(jiu)：進行DNA到(dao)mRNA的轉變（體(ti)外(wai)轉(zhuan)錄IVT）

轉運過(guo)來的DNA將會先進行解(jie)凍然(ran)後(hou)摻(chan)入(ru)由(you)mRNA組成的部分(fen)混(hun)合，隨後(hou)酵(jiao)素(su)將(jiang)會(hui)撬(qiao)開DNA模(mo)板(ban)並轉(zhuan)化其成為mRNA。之(zhi)後得(de)到的混(hun)合物(wu)將會(hui)被移(yi)入(ru)到(dao)壹個儲罐(guan)裏(li)，並且通(tong)過(guo)過(guo)濾去(qu)除(chu)雜(za)質(zhi)。

步(bu)驟十(shi)：mRNA檢(jian)測(ce)

過(guo)濾後(hou)的mRNA將會被反(fan)復(fu)測(ce)試以確保其(qi)出(chu)精(jing)度以(yi)及基因(yin)序(xu)列(lie)是(shi)否準(zhun)確(que)。

步(bu)驟十(shi)壹(yi)：冷藏(zang)、打(da)包和再次(ci)運輸

檢(jian)測(ce)後(hou)的mRNA包冷凍到(dao)零(ling)下20度，然後(hou)運到工(gong)廠(chang)。將(jiang)會(hui)在(zai)那(na)裏(li)做成疫苗，然(ran)後再把樣本運回(hui)來(lai)檢(jian)測(ce)。

步(bu)驟十(shi)二(er)：準(zhun)備(bei)mRNA

收(shou)到mRNA的包裹(guo)後(hou)，保持(chi)冷凍直(zhi)到(dao)需(xu)要用(yong)時(shi)，每(mei)個包能(neng)個制造60萬(wan)瓶(ping)，360萬(wan)劑的疫苗。

步(bu)驟十(shi)三(san)：脂質(zhi)納(na)米(mi)粒遞送系統(tong)制備(bei)（LNP）

同(tong)時(shi)，另(ling)壹(yi)個步(bu)驟也(ye)在(zai)進行，準(zhun)備(bei)脂質(zhi)納(na)米(mi)粒——這種物(wu)質(zhi)能(neng)保護(hu)mRNA進入人(ren)體(ti)細胞(bao)時(shi)不(bu)會(hui)被破(po)壞(huai)。

步(bu)驟十(shi)四：制作(zuo)mRNA疫苗

準(zhun)備(bei)好之(zhi)後，通(tong)過(guo)機(ji)器精(jing)確控(kong)制mRNA和脂質(zhi)，將(jiang)他(ta)們混(hun)合成脂質(zhi)納(na)米(mi)粒，形(xing)成疫苗顆(ke)粒。

步(bu)驟十(shi)五(wu)：準(zhun)備(bei)疫苗瓶(ping)

清洗和(he)高(gao)溫消(xiao)毒(du)疫(yi)苗瓶(ping)，13部高(gao)速攝像機(ji)在(zai)盯(ding)著流(liu)水(shui)線(xian)，每壹個瓶(ping)子都(dou)要拍(pai)超(chao)過(guo)100張(zhang)照片(pian)，有(you)裂(lie)縫(feng)、碎片(pian)和(he)其(qi)他(ta)問題(ti)的瓶子，將會迅速(su)從(cong)生(sheng)產(chan)線(xian)篩選出(chu)去。

步(bu)驟十(shi)六(liu)：罐(guan)裝(zhuang)疫(yi)苗

機(ji)器將(jiang)0.45毫(hao)升(sheng)疫苗註(zhu)射到(dao)壹個瓶(ping)子，稀(xi)釋(shi)後，成為6個劑量的疫苗。生(sheng)產(chan)線(xian)每分鐘(zhong)能(neng)包裝(zhuang)575個瓶(ping)子。

步(bu)驟十(shi)七(qi)：打(da)包、冷藏(zang)和測(ce)試

灌註完的疫苗經(jing)過(guo)檢查，貼上(shang)標簽，然後放進盒子(zi)裏(li)打(da)包。所(suo)有(you)盒子要再冷凍數(shu)天(tian)，降(jiang)溫到零(ling)下70℃的極冷溫度。與(yu)此同(tong)時(shi)，該批(pi)次(ci)的疫苗要送(song)去做(zuo)檢(jian)測(ce)。

步(bu)驟十(shi)八：打(da)包和運輸成品疫(yi)苗

數(shu)周(zhou)的測(ce)試後，合格的疫苗可(ke)以(yi)運輸了(le)。盒(he)子裏(li)裝(zhuang)上(shang)了溫度計，實時監測(ce)溫度是(shi)否達標。每個盒(he)子裏(li)有45磅的幹冰。