熒光(guang)蛋(dan)白Marker優化方(fang)案(an)

熒光(guang)蛋(dan)白Marker優化方(fang)案(an)

    有報道稱壹(yi)種自(zi)預染熒光(guang)蛋(dan)白Marker，能夠(gou)實(shi)現(xian)蛋(dan)白Marker即(ji)是(shi)預染蛋(dan)白又是(shi)曝光(guang)蛋(dan)白。  具體(ti)原(yuan)理(li)是(shi)：將(jiang)天然(ran)提(ti)取(qu)的(de)熒光(guang)蛋(dan)白（包(bao)括藻(zao)紅蛋(dan)白、藻藍蛋(dan)白、別 藻藍蛋(dan)白、綠色熒光(guang)蛋(dan)白、黃(huang)色(se)熒光(guang)蛋(dan)白和紅色熒光(guang)蛋(dan)白等，其分(fen)子量(liang)為 20-300kDa），與(yu)能夠(gou)結(jie)合抗(kang)體(ti)IgG的(de)proteinA、proteinG和能被(bei)二抗(kang)結(jie)合的(de)抗(kang)體(ti)Fc區(qu)蛋(dan)白或肽(tai)共(gong)價(jia)偶聯，由(you)於(yu)熒光(guang)蛋(dan)白自(zi)帶顏(yan)色(se)，從而(er)實現(xian)蛋(dan)白即(ji)是(shi)預染蛋(dan)白，又是(shi)熒光(guang)蛋(dan)白的(de)目的(de)，無需(xu)轉(zhuan)膜(mo)染色(se)或X光片(pian)成(cheng)像，此(ci)外(wai)，熒光(guang)蛋(dan)白Marker條(tiao)帶可(ke)特異性結(jie)合壹(yi)抗(kang)或者二(er)抗(kang)，使蛋(dan)白樣品和(he)蛋(dan)白marker 經(jing)化學發光(guang)檢(jian)測(ce)後，能夠(gou)同(tong)時在(zai)X光(guang)片(pian)上(shang)顯(xian)示(shi)出(chu)來。
     此(ci)方(fang)法(fa)的(de)優點克(ke)服了預(yu)染蛋(dan)白Marker的(de)化學修(xiu)飾(shi)（染料屬於(yu)有機化合物），只(zhi)是(shi)將(jiang)不同(tong)功能的(de)蛋(dan)白或多肽(tai)偶聯在(zai)壹(yi)起(qi)（類似(si)於(yu)融(rong)合蛋(dan)白），不會出現(xian)電泳遷(qian)移變化(hua)，蛋(dan)白分(fen)子量(liang)不準(zhun)確(que)的(de)現象(xiang)；也不(bu)會(hui)影響(xiang)和(he)膜(mo)的(de)結(jie)合能力，能夠(gou)很(hen)好的(de)提(ti)示(shi)轉膜情況；還(hai)能實(shi)現(xian)蛋(dan)白Marker與目標蛋(dan)白顯(xian)示(shi)在(zai)同壹(yi)張(zhang)照(zhao)片(pian)上(shang)。缺點是(shi)需要將(jiang)天然(ran)提(ti)取(qu)的(de)熒光(guang)蛋(dan)白經(jing)過(guo)復雜(za)的(de)化學反應(ying)偶聯上(shang)識別抗(kang)體(ti)的(de)蛋(dan)白或多肽(tai)才能實(shi)現(xian)共(gong)同(tong)曝光(guang)在(zai)壹(yi)張(zhang)照(zhao)片(pian)上(shang)，此(ci)過(guo)程(cheng)操(cao)作(zuo)復雜(za)繁瑣(suo)，還(hai)會造成批(pi)間(jian)差(cha)異。

熒光(guang)蛋(dan)白Marker優化方(fang)案(an)
   方案(an)壹(yi)：利用(yong)色素(su)蛋(dan)白Marker代(dai)替預(yu)染Marker，此(ci)類蛋(dan)白包(bao)括含鐵卟(bu)啉(lin)的(de)色素(su)蛋(dan)白質、含黃(huang)素(su)的(de)色素(su)蛋(dan)白質和含胡蘿(luo)蔔(bu)素(su)的(de)色素(su)蛋(dan)白質等。由(you)於(yu)蛋(dan)白沒有(you)進(jin)行化(hua)學修(xiu)飾(shi)，不會(hui)出(chu)現(xian)預染蛋(dan)白Marker因(yin)為(wei)經(jing)過(guo)化(hua)學修(xiu)飾(shi)後在(zai)SDS-PAGE電(dian)泳過(guo)程(cheng)中遷(qian)移率(lv)發生(sheng)改變，分(fen)子量(liang)信息(xi)不再(zai)準(zhun)確(que)的(de)現象(xiang)，也不(bu)會(hui)影響(xiang)和(he)膜(mo)的(de)結(jie)合能力，肉(rou)眼就可(ke)以(yi)觀(guan)察(cha)轉膜(mo)效率(lv)。曝光(guang)的(de)時候(hou)，需(xu)要集(ji)普通(tong)掃(sao)描(miao)儀(yi)（類似(si)照(zhao)相(xiang)機）和ECL掃(sao)描(miao)儀(yi)或者熒光(guang)掃(sao)描(miao)儀(yi)為(wei)壹(yi)體(ti)的(de)設備(bei)，先(xian)通過(guo)普(pu)通掃(sao)描(miao)儀(yi)將(jiang)色素(su)蛋(dan)白Marker成像，然後利用(yong)ECL掃(sao)描(miao)儀(yi)或者熒光(guang)掃(sao)描(miao)儀(yi)將(jiang)目標蛋(dan)白成像，再(zai)利用(yong)軟(ruan)件將(jiang)這(zhe)兩種照(zhao)片(pian)整(zheng)合在壹(yi)起(qi)，由(you)於(yu)是(shi)同壹(yi)張(zhang)膜(mo)，拍照(zhao)未(wei)挪(nuo)動(dong)位(wei)置(zhi)，只(zhi)是(shi)進(jin)行二(er)次(ci)不(bu)同捕光(guang)原(yuan)理(li)成像，就不存在(zai)拼接導(dao)致位(wei)置(zhi)錯(cuo)誤(wu)，並(bing)且照片(pian)是(shi)由(you)專業(ye)軟(ruan)件整(zheng)合，不會(hui)出現(xian)修(xiu)改和拼接痕(hen)跡(ji)。缺點是(shi)需要集(ji)普通(tong)掃(sao)描(miao)儀(yi)（類似(si)照(zhao)相(xiang)機）和ECL掃(sao)描(miao)儀(yi)或者熒光(guang)掃(sao)描(miao)儀(yi)為(wei)壹(yi)體(ti)的(de)設備(bei)。
   方案(an)二：利用(yong)熒光(guang)蛋(dan)白的(de)顏(yan)色(se)（帶(dai)顏(yan)色(se)的(de)熒光(guang)蛋(dan)白，例如藻紅蛋(dan)白、藻藍蛋(dan)白、別 藻藍蛋(dan)白、綠色熒光(guang)蛋(dan)白、黃(huang)色(se)熒光(guang)蛋(dan)白和紅色熒光(guang)蛋(dan)白等，代(dai)替預(yu)染），肉(rou)眼(yan)就(jiu)可以(yi)判斷轉(zhuan)膜(mo)效(xiao)率(lv)。同色(se)素(su)蛋(dan)白壹(yi)樣，由(you)於(yu)蛋(dan)白沒有(you)進(jin)行化(hua)學修(xiu)飾(shi)，不會(hui)出(chu)現(xian)電泳遷(qian)移變化(hua)，蛋(dan)白分(fen)子量(liang)不準(zhun)確(que)的(de)現象(xiang)；也不(bu)會(hui)影響(xiang)和(he)膜(mo)的(de)結(jie)合能力，能夠(gou)很(hen)好的(de)提(ti)示(shi)轉膜情況。優點得到的(de)熒光(guang)蛋(dan)白不需要進(jin)行預(yu)染處(chu)理(li)就可以(yi)肉眼識(shi)別，也不需要進(jin)行改造去(qu)識別二抗(kang)，就可(ke)以(yi)熒光(guang)掃(sao)描(miao)。如(ru)果標記(ji)信號(hao)是(shi)熒光(guang)，僅僅使用(yong)熒光(guang)掃(sao)描(miao)儀(yi)就(jiu)可以(yi)將(jiang)Marker和目標蛋(dan)白顯(xian)示(shi)在(zai)同壹(yi)張(zhang)張(zhang)片(pian)上(shang)；如果使用(yong)ECL發光(guang)液(ye)，按(an)道理(li)也能用(yong)熒光(guang)掃(sao)描(miao)儀(yi)就(jiu)可以(yi)將(jiang)Marker和目標蛋(dan)白顯(xian)示(shi)在(zai)同壹(yi)張(zhang)照(zhao)片(pian)上(shang)，只是(shi)熒光(guang)蛋(dan)白需要激發後才(cai)可(ke)以(yi)產生(sheng)熒光(guang)，而(er)ECL發光(guang)屬於(yu)化學發光(guang)，是(shi)通過(guo)化(hua)學反應(ying)產生(sheng)熒光(guang)。
    方案(an)三(san)：將(jiang)熒光(guang)蛋(dan)白（帶顏(yan)色(se)的(de)熒光(guang)蛋(dan)白，例如藻紅蛋(dan)白、藻藍蛋(dan)白、別 藻藍蛋(dan)白、綠色熒光(guang)蛋(dan)白、黃(huang)色(se)熒光(guang)蛋(dan)白和紅色熒光(guang)蛋(dan)白等，代(dai)替預(yu)染）與(yu)識(shi)別抗(kang)體(ti)IgG的(de)proteinA、proteinG或 ProteinL，以(yi)及能被(bei)二抗(kang)結(jie)合的(de)兔源(yuan)或鼠源抗(kang)體(ti)Fc區(qu)基因(yin)融(rong)合表(biao)達，由(you)於(yu)熒光(guang)蛋(dan)白自(zi)帶顏(yan)色(se)，肉(rou)眼(yan)就(jiu)可以(yi)判斷轉(zhuan)膜(mo)效(xiao)率(lv)；同時，熒光(guang)蛋(dan)白 marker中的(de)蛋(dan)白可以(yi)識別不同來源的(de)壹(yi)抗(kang)或二抗(kang)，能和(he)目標蛋(dan)白壹(yi)起(qi)曝光(guang)顯(xian)示(shi)在(zai)壹(yi)張(zhang)照(zhao)片(pian)上(shang)，實現了熒光(guang)蛋(dan)白Marker既(ji)是(shi)自(zi)預染蛋(dan)白（自(zi)帶顏(yan)色(se)）又(you)是(shi)曝光(guang)蛋(dan)白。由(you)於(yu)熒光(guang)蛋(dan)白Marker沒有(you)進(jin)行化(hua)學修(xiu)飾(shi)，確(que)保了(le)蛋(dan)白分(fen)子量(liang)準(zhun)確(que)，也不會影(ying)響電泳遷(qian)移變化(hua)和與膜(mo)的(de)吸附(fu)能力。此(ci)外(wai)，在(zai)進(jin)行Western檢(jian)測(ce)時，不(bu)需(xu)要加入額外(wai)抗(kang)體(ti)試劑(ji)，也(ye)不(bu)需要使用(yong)集(ji)成多(duo)種檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)特殊(shu)設備(bei)，實驗室(shi)常(chang)規(gui)WB檢(jian)測(ce)設(she)備(bei)就可以(yi)勝(sheng)任(ren)。
   蘇州阿(e)爾(er)法生(sheng)物提(ti)供(gong)天根試劑(ji)盒、碧雲(yun)天試劑(ji)、蛋(dan)白酶K、蛋(dan)白 marker、DNA ladder、轉染試劑(ji)、elisa試劑(ji)、化(hua)學發光(guang)試劑(ji)等(deng)生(sheng)化試劑(ji)廣(guang)泛(fan)應(ying)用(yong)於(yu)細胞(bao)生(sheng)物學、分(fen)子生(sheng)物學、免疫(yi)組(zu)化(hua)學等個(ge)領域(yu)，同(tong)時提(ti)供(gong)實驗室(shi)儀(yi)器(qi)設備(bei)、實驗耗材(cai)供(gong)應(ying)服務(wu)。