細胞(bao)培(pei)養(yang)常見(jian)問(wen)題(ti)匯總(zong)

1 冷凍(dong)管應如何(he)解凍？取(qu)出(chu)冷(leng)凍管後，須立即(ji)放入 37 C 水(shui)槽(cao)中快速解凍，輕(qing)搖冷(leng)凍(dong)管使其在(zai) 1 分(fen)鐘(zhong)內(nei)全部融化，並註意(yi)水(shui)面(mian)不可(ke)超(chao)過冷凍管蓋沿，否則(ze)易發生(sheng)汙染情(qing)形(xing)。另(ling)冷凍管由液(ye)氮(dan)桶(tong)中取(qu)出(chu)解凍時，必(bi)須(xu)註意(yi)安(an)全(quan)，預防冷(leng)凍(dong)管之爆(bao)裂(lie)。

2 細胞(bao)冷(leng)凍管解凍培養(yang)時，是(shi)否應馬上(shang)去除(chu) DMSO？除(chu)少數特別註明(ming)對(dui) DMSO 敏感(gan)之細(xi)胞(bao)外(wai)，絕大部分(fen)細(xi)胞(bao)株（包(bao)括(kuo)懸浮(fu)性細胞(bao)），在(zai)解凍之後，應直(zhi)接放入含有(you) 10-15ml 新(xin)鮮培(pei)養(yang)基之培(pei)養(yang)角瓶(ping)中，待(dai)隔天再置換新(xin)鮮培(pei)養(yang)基以去除(chu) DMSO 即(ji)可(ke)，如(ru)此(ci)可(ke)避(bi)免大部分(fen)解凍後細胞(bao)無法(fa)生(sheng)長或貼附(fu)之(zhi)問題(ti)。

3 可否(fou)使用(yong)與原(yuan)先培養(yang)條件不(bu)同(tong)之培(pei)養(yang)基？不能。每壹細(xi)胞(bao)株均(jun)有(you)其特定使用(yong)且(qie)已(yi)適應之細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基，若(ruo)驟然(ran)使(shi)用(yong)和(he)原(yuan)先提供(gong)之培(pei)養(yang)條件不(bu)同(tong)之培(pei)養(yang)基，細胞(bao)大都(dou)無法(fa)立即(ji)適應，造成(cheng)細(xi)胞(bao)無法(fa)存(cun)活。

4 可否使(shi)用(yong)與原(yuan)先培養(yang)條件不(bu)同(tong)之血清種(zhong)類？不(bu)能。血清是(shi)細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)壹個極(ji)為重(zhong)要(yao)的(de)營(ying)養(yang)來源，所以血清的(de)種類和(he)品(pin)質對於(yu)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)長會產(chan)生(sheng)極大的(de)影(ying)響(xiang)。來自不(bu)同物(wu)種的(de)血清，在(zai)壹些(xie)物(wu)質或分子(zi)的(de)量或內容(rong)物(wu)上(shang)都(dou)有所不同，血清使(shi)用(yong)錯(cuo)誤(wu)常會(hui)造成(cheng)細(xi)胞(bao)無法(fa)存(cun)活。

5 何謂 FBS, FCS, CS, HS ?FBS (fetal bovine serum) 和(he) FCS (fetal calf serum) 是(shi)相同的(de)意思，兩(liang)者(zhe)都(dou)是(shi)指胎(tai)牛(niu)血清， FCS 乃(nai)錯(cuo)誤(wu)的(de)使用(yong)字眼(yan)，請不要(yao)再使(shi)用(yong)。CS (calf serum) 則(ze)是(shi)指小(xiao)牛(niu)血清。HS (horseserum) 則(ze)是(shi)指馬(ma)血清。

6 培(pei)養(yang)細胞(bao)時應使用(yong) 5 %或 10% CO2？或根本(ben)沒有(you)影(ying)響(xiang)？壹般(ban)培(pei)養(yang)基中大都(dou)使用(yong) HCO3-/CO32-/H+ 作(zuo)為 pH 的(de)緩(huan)沖(chong)系(xi)統(tong)，而(er)培(pei)養(yang)基中 NaHCO3 的(de)含量將(jiang)決定細胞(bao)培(pei)養(yang)時應使用(yong)的(de) CO2 濃度(du)。當(dang)培養(yang)基中 NaHCO3 含量為每(mei)公(gong)升 3.7 g 時，細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時應使用(yong) 10% CO2；當(dang)培養(yang)基中 NaHCO3 為每(mei)公(gong)升 1.5 g 時，則(ze)應使用(yong) 5% CO2 培養(yang)細胞(bao)。

7 何(he)時須(xu)更(geng)換培養(yang)基？視細(xi)胞(bao)生(sheng)長密度(du)而(er)定，或遵(zun)照(zhao)細胞(bao)株基(ji)本(ben)數據(ju)上(shang)之(zhi)更(geng)換(huan)時間(jian)，按(an)時更(geng)換(huan)培養(yang)基即可(ke)。

8 培(pei)養(yang)基中是(shi)否須(xu)添加抗(kang)生(sheng)素？除(chu)於(yu)特殊篩(shai)選系(xi)統(tong)中外(wai)，壹般(ban)正(zheng)常培(pei)養(yang)狀(zhuang)態下(xia)，培養(yang)基中不應添加任(ren)何(he)抗(kang)生(sheng)素。

9 附(fu)著(zhe)性(xing)細(xi)胞(bao)繼代時所使用(yong)之 trypsin-EDTA 濃度(du)？應如何(he)處(chu)理(li)？壹般(ban)使(shi)用(yong)之 trypsin-EDTA 濃度(du)為 0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4Na。第(di)壹次開(kai)瓶(ping)後應立即(ji)少量分(fen)裝於(yu)無菌試管中，保存於(yu)–20 C，避(bi)免反(fan)復(fu)冷凍(dong)解凍造成(cheng) trypsin 之(zhi)活(huo)性(xing)降低，並可(ke)減(jian)少汙(wu)染之機(ji)會。

10 懸(xuan)浮(fu)性細胞(bao)應如何(he)繼代處(chu)理(li)？壹般(ban)僅(jin)需持續加入新(xin)鮮(xian)培(pei)養(yang)基於(yu)原(yuan)培(pei)養(yang)角瓶(ping)中，稀(xi)釋細胞(bao)濃度(du)即(ji)可(ke)，若(ruo)培(pei)養(yang)液(ye)太(tai)多時，可(ke)將(jiang)培(pei)養(yang)角瓶(ping)口端稍微擡(tai)高，直(zhi)到無法(fa)容(rong)納(na)為止(zhi)。分瓶(ping)時取(qu)出(chu)壹部(bu)份(fen)含細(xi)胞(bao)之(zhi)培養(yang)液(ye)至另壹新(xin)的(de)培養(yang)角瓶(ping)，加入新(xin)鮮(xian)培(pei)養(yang)基稀(xi)釋至適當(dang)濃度(du)，重(zhong)復前(qian)述步(bu)驟即(ji)可。

11 欲(yu)將(jiang)壹般(ban)動(dong)物(wu)細胞(bao)離(li)心下(xia)來(lai)，其離(li)心速(su)率(lv)應為多少轉(zhuan)速？欲(yu)回收動物(wu)細胞(bao)，其離(li)心速(su)率(lv)壹般(ban)為 300xg (約(yue)1,000rpm)，5 - 10分鐘(zhong)，過(guo)高之(zhi)轉(zhuan)速(su)，將(jiang)造成(cheng)細(xi)胞(bao)死(si)亡。

12 細胞(bao)之(zhi)接種(zhong)密(mi)度(du)為何(he)？依照(zhao)細胞(bao)株基(ji)本(ben)數據(ju)上(shang)之(zhi)接種(zhong)密(mi)度(du)或稀(xi)釋分盤之比例接種(zhong)即(ji)可。細(xi)胞(bao)數太(tai)少或稀(xi)釋的(de)太多亦(yi)是(shi)造成(cheng)細(xi)胞(bao)無法(fa)生(sheng)長之壹重(zhong)要(yao)原(yuan)因。

13 細胞(bao)冷(leng)凍培養(yang)基之成(cheng)份(fen)為何(he)？動物(wu)細胞(bao)冷(leng)凍保存時最(zui)常使(shi)用(yong)的(de)冷凍培(pei)養(yang)基是(shi)含 5 - 10% DMSO(dimethyl sulfoxide) 和(he) 90 - 95 %原(yuan)來(lai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長用(yong)之新(xin)鮮培養(yang)基均(jun)勻(yun)混(hun)合之。註意(yi)：由於(yu) DMSO 稀(xi)釋時會(hui)放出(chu)大量熱能，故不可(ke)將(jiang) DMSO直(zhi)接加(jia)入細(xi)胞(bao)液(ye)中，必須使用(yong)前(qian)先行配制完成(cheng)。

14 DMSO之(zhi)等(deng)級和(he)無菌過濾(lv)之方(fang)式(shi)為何(he)？冷凍(dong)保存使用(yong)之 DMSO 等(deng)級，必(bi)須為 Tissue culture grade 之(zhi) DMSO(如 Sigma D2650)，其本身(shen)即為無菌狀(zhuang)況，第(di)壹次開(kai)瓶(ping)後應立即(ji)少量分(fen)裝於(yu)無菌試管中，保存於(yu) 4 C，避(bi)免反(fan)復(fu)冷凍(dong)解凍造成(cheng) DMSO 之(zhi)裂(lie)解而(er)釋出(chu)有(you)害(hai)物(wu)質，並可減(jian)少汙(wu)染之機(ji)會。若(ruo)要(yao)過濾(lv) DMSO，則(ze)須(xu)使(shi)用(yong)耐(nai)DMSO 之 Nylon 材質濾膜(mo)。

15 冷凍(dong)保存細胞(bao)之(zhi)方(fang)法(fa)？冷(leng)凍保存方(fang)法(fa)壹：冷(leng)凍(dong)管置於(yu) 4 C 30~60 分(fen)鐘(zhong) → (-20 C 30 分(fen)鐘(zhong)) → -80 C 16~18 小(xiao)時(或隔夜(ye)) → 液(ye)氮(dan)槽(cao) vapor phase 長期儲存(cun)。冷(leng)凍保存方(fang)法(fa)二(er): 冷凍管置於(yu)已(yi)設(she)定程序之(zhi)可程序降(jiang)溫機(ji)中每分鐘(zhong)降(jiang) 1-3 C 至–80 C 以下(xia)， 再放入液(ye)氮(dan)槽(cao) vapor phase 長期儲存(cun)。*-20 C 不(bu)可超(chao)過 1 小時，以防止(zhi)冰(bing)晶過大，造成(cheng)細(xi)胞(bao)大量死(si)亡，亦可(ke)跳過(guo)此(ci)步(bu)驟直(zhi)接放入-80 C 冰(bing)箱(xiang)中，惟存(cun)活(huo)率稍(shao)微降(jiang)低壹些(xie)。

16 細(xi)胞(bao)欲(yu)冷凍(dong)保存時，細(xi)胞(bao)冷(leng)凍管內應有多少細(xi)胞(bao)濃度(du)？冷(leng)凍(dong)管內細胞(bao)數目(mu)壹般(ban)為 1x106 cells/ml vial，融(rong)合瘤細胞(bao)則(ze)以 5x106 cells/ml vial 為宜(yi)。

17 應如何(he)避(bi)免細(xi)胞(bao)汙(wu)染？細胞(bao)汙(wu)染的(de)種類可(ke)分(fen)成(cheng)細(xi)菌、酵母(mu)菌、黴菌、病毒(du)和(he)黴漿(jiang)菌。主要(yao)的(de)汙染原(yuan)因為無菌操作(zuo)技術(shu)不當(dang)、操作(zuo)室(shi)環(huan)境(jing)不(bu)佳、汙(wu)染之(zhi)血清和(he)汙染(ran)之細胞(bao)等(deng)。嚴格(ge)無菌操作(zuo)技術(shu)、清潔的(de)環(huan)境(jing)、與(yu)品(pin)質良好(hao)之(zhi)細(xi)胞(bao)來(lai)源和(he)培養(yang)基配制是(shi)減(jian)低汙(wu)染的(de)好(hao)方(fang)法(fa)。

18 如(ru)果細胞(bao)發生(sheng)微生(sheng)物(wu)汙染時，應如何(he)處(chu)理(li)？加(jia)入相應抗(kang)生(sheng)素，直(zhi)接滅(mie)菌後丟棄之(zhi)。

19 支(zhi)原(yuan)體(mycoplasma) 汙(wu)染的(de)細胞(bao)， 是(shi)否能以肉(rou)眼觀(guan)察(cha)出(chu)異狀(zhuang)？不能。除(chu)極(ji)有(you)經(jing)驗(yan)之專(zhuan)家(jia)外(wai)，大多數遭(zao)受支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染的(de)細胞(bao)株，無法(fa)以其外(wai)觀(guan)分(fen)辨(bian)之。

20 支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染會對(dui)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)有何影(ying)響(xiang)？支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染幾乎可影(ying)響(xiang)所有細胞(bao)之(zhi)生(sheng)長參數，代謝(xie)及(ji)研究任(ren)壹數據(ju)。故進(jin)行實驗(yan)前(qian)，必須(xu)確(que)認細(xi)胞(bao)為 mycoplasma-free，實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)之(zhi)數據(ju)方(fang)有(you)意義。

21 偵測出(chu)細(xi)胞(bao)株有(you)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染時， 該(gai)如(ru)何處理(li)？直(zhi)接滅(mie)菌後丟棄，以避(bi)免汙(wu)染(ran)其它細(xi)胞(bao)株。

22 CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)之(zhi)水(shui)盤如何保持清潔？定期(至少每(mei)兩周壹次) 以無菌蒸餾水或無菌去離(li)子(zi)水更(geng)換(huan)之。

23 為何(he)培養(yang)基保存於(yu)4℃冰(bing)箱(xiang)中，顏色會(hui)偏暗紅色，且(qie)pH值(zhi)會越(yue)來越(yue)偏堿性？培(pei)養(yang)基保存於(yu)4℃冰(bing)箱(xiang)中，培養(yang)基內之(zhi)CO2會(hui)逐(zhu)漸溢出(chu)，造成(cheng)培(pei)養(yang)基越(yue)來越(yue)偏堿性，而(er)培(pei)養(yang)基中之酸堿指示劑(ji)(通(tong)常為phenol red) 的(de)顏色也(ye)會(hui)隨(sui)堿性增(zeng)加而(er)更(geng)偏暗紅。培(pei)養(yang)基偏堿之結(jie)果(guo)，將(jiang)造成(cheng)細(xi)胞(bao)生(sheng)長停滯(zhi)或死(si)亡。若(ruo)培(pei)養(yang)基偏堿時，可(ke)以通(tong)入無菌過濾(lv)之CO2，以調整pH 值(zhi)。

24 各(ge)種細胞(bao)培(pei)養(yang)用(yong)的(de) dish，flask 是(shi)否均(jun)相同？不(bu)同(tong)廠牌的(de) dish 或 flask，其所 coating 的(de) polymer 不同，制造程序亦(yi)不同(tong)，雖(sui)對(dui)大部分(fen)細(xi)胞(bao)沒(mei)有太大之影(ying)響(xiang)，惟少數細(xi)胞(bao)則(ze)可(ke)能因使用(yong)廠牌(pai)不同之 dish 或 flask 而(er)有(you)顯(xian)著之生(sheng)長差異。

25 購買之(zhi)細(xi)胞(bao)冷(leng)凍管經解凍後，為何(he)會發生(sheng)細胞(bao)數目(mu)太少之(zhi)情形(xing)？研(yan)究人(ren)員在(zai)冷(leng)凍細胞(bao)之(zhi)培養(yang)時出(chu)現細胞(bao)數目(mu)太少，大都(dou)是(shi)因為離(li)心過(guo)程操作(zuo)上(shang)的(de)失誤(wu)，造成(cheng)細(xi)胞(bao)的(de)物(wu)理(li)性(xing)損傷(shang)，以及(ji)細胞(bao)流(liu)失。建(jian)議(yi)細(xi)胞(bao)解凍後不要(yao)立刻(ke)離(li)心，應待(dai)細胞(bao)生(sheng)長隔夜(ye)後(hou)再更換(huan)培養(yang)基即可(ke)。

26 購買之(zhi)細(xi)胞(bao)死(si)亡或細胞(bao)存(cun)活率不(bu)佳可(ke)能原(yuan)因？研究(jiu)人(ren)員在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時出(chu)現存活(huo)率(lv)不佳，常見(jian)原(yuan)因可歸(gui)納(na)為：培(pei)養(yang)基使用(yong)錯(cuo)誤(wu)或培養(yang)基品(pin)質不佳。血清使(shi)用(yong)錯(cuo)誤(wu)或血清的(de)品(pin)質不佳。解凍過程錯(cuo)誤(wu)。冷凍(dong)細胞(bao)解凍後，加以洗(xi)滌細(xi)胞(bao)和(he)離(li)心。懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)誤(wu)認為死(si)細胞(bao)。培(pei)養(yang)溫度(du)使(shi)用(yong)錯(cuo)誤(wu)。細胞(bao)置於(yu)–80℃太(tai)久。

27 收到之冷(leng)凍管瓶(ping)身破裂(lie)，瓶(ping)蓋有(you)裂(lie)紋，或瓶(ping)蓋脫(tuo)落之原(yuan)因？冷凍(dong)管瓶(ping)蓋裂(lie)紋，或瓶(ping)身破裂(lie)，可能是(shi)因為操作(zuo)者(zhe)夾取(qu)冷凍(dong)管時用(yong)力不(bu)當(dang)，造成(cheng)冷(leng)凍(dong)管裂(lie)損，建(jian)議(yi)使(shi)用(yong)止血鉗(qian)小心(xin)夾取(qu)。另冷(leng)凍(dong)管瓶(ping)蓋松(song)動(dong)或松(song)脫(tuo)，乃(nai)因熱脹(zhang)冷縮之物(wu)理(li)現象，冷(leng)凍(dong)管有可能因此(ci)而(er)造成(cheng)細(xi)胞(bao)汙(wu)染，故冷(leng)凍管於(yu)放入和(he)取(qu)出(chu)液(ye)氮(dan)桶(tong)時，均(jun)應立刻(ke)將(jiang)冷(leng)凍(dong)管再壹次扭(niu)緊(jin)。

28 如何(he)選用(yong)特殊細(xi)胞(bao)系(xi)培(pei)養(yang)基？培養(yang)某(mou)壹類型(xing)細胞(bao)沒(mei)有固(gu)定的(de)培養(yang)條件。在(zai) MEM 中培養(yang)的(de)細胞(bao)，很(hen)可(ke)能在(zai)DMEM 或M199 中同樣很(hen)容(rong)易生(sheng)長。總之(zhi)， MEM 做(zuo)粘(zhan)附(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)、RPMI-1640做懸浮(fu)細胞(bao)培(pei)養(yang)是(shi)壹個好(hao)的(de)開始，各種(zhong)目(mu)的(de)無血清培(pei)養(yang)可選 AIMV（12005）培養(yang)基（SFM）。

29 L-谷(gu)氨酰胺在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)中重(zhong)要(yao)嗎？它(ta)在(zai)溶(rong)液(ye)中不穩定嗎？L-谷(gu)氨酰胺在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時是(shi)重(zhong)要(yao)的(de)。脫掉(diao)氨基後(hou)，L-谷(gu)氨酰胺可作(zuo)為培(pei)養(yang)細胞(bao)的(de)能量來(lai)源、參與蛋白質的(de)合成(cheng)和(he)核酸(suan)代謝(xie)。L-谷(gu)氨酰胺在(zai)溶(rong)液(ye)中經過壹段(duan)時間(jian)後(hou)會降解，但是(shi)確(que)切的(de)降解率壹直(zhi)沒(mei)有(you)最(zui)終定論。L-谷(gu)氨酰胺的(de)降解導致氨的(de)形(xing)成(cheng)，而(er)氨對於(yu)壹些(xie)細(xi)胞(bao)具有毒(du)性。

30 GlutaMAX-I 是(shi)什麽？培養(yang)細胞(bao)如(ru)何利用(yong) GlutaMAX-I？這(zhe)個二(er)肽(tai)有多穩定？GlutaMAX-I二肽(tai)是(shi)壹個L-谷(gu)氨酰胺的(de)衍生(sheng)物(wu)，其不穩定的(de)alpha-氨基用(yong) L-丙(bing)氨酸來(lai)保護。壹種(zhong)肽(tai)酶逐(zhu)漸裂(lie)解二肽(tai)，釋放L-谷(gu)氨酰胺供(gong)利用(yong)。GlutaMAX-I 二肽(tai)非常穩定，即使(shi)在(zai)121磅(bang)滅(mie)菌20分鐘(zhong)，GlutaMAX-I 二(er)肽(tai)溶液(ye)有(you)最(zui)小的(de)降解，如果在(zai)相同條(tiao)件(jian)下，L-谷(gu)氨酰胺幾乎降解完成(cheng)。

31 什麽培養(yang)基中可以省(sheng)去加(jia)酚(fen)紅(hong)？酚(fen)紅(hong)在(zai)培(pei)養(yang)基中被用(yong)來作(zuo)為 PH 值(zhi)的(de)指示劑(ji)：中性時為紅(hong)色，酸(suan)性(xing)時為黃(huang)色，堿性時為紫(zi)色。研(yan)究(jiu)表(biao)明，酚(fen)紅(hong)可以模擬固(gu)醇(chun)類激(ji)素的(de)作(zuo)用(yong)，（特別是(shi)雌(ci)激(ji)素）。為避(bi)免固(gu)醇(chun)類反(fan)應，培養(yang)細胞(bao)，尤(you)其是(shi)哺(bu)乳(ru)類細(xi)胞(bao)時，用(yong)不加(jia)酚(fen)紅(hong)的(de)培養(yang)基。由於(yu)酚(fen)紅(hong)幹擾檢測，壹些(xie)研(yan)究(jiu)人(ren)員在(zai)做(zuo)流式(shi)細胞(bao)檢測時，不(bu)使(shi)用(yong)加有(you)酚(fen)紅(hong)的(de)培養(yang)基。

32 培養(yang)基中丙(bing)酮酸(suan)鈉(na)的(de)作(zuo)用(yong)是(shi)什麽？丙(bing)酮酸(suan)鈉(na)可以作(zuo)為細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)中的(de)替代碳源，盡管細胞(bao)更(geng)傾向於(yu)以葡萄糖作(zuo)為碳源，但是(shi)，如果(guo)沒有葡萄糖的(de)話，細胞(bao)也(ye)可以代謝(xie)丙(bing)酮酸(suan)鈉(na)。

33 目(mu)錄上(shang)說(shuo)，Hank’s平(ping)衡(heng)鹽(yan)溶(rong)液(ye)(HBS)要(yao)在(zai)空(kong)氣(qi)中使用(yong)，不需(xu)要(yao)CO2培養(yang)箱(xiang)。原(yuan)因是(shi)什麽？Hank’s 平衡(heng)鹽(yan)溶(rong)液(ye)(HBS)和(he) Earle’s平衡(heng)鹽(yan)溶(rong)液(ye)(EBS)有(you)什麽本質的(de)功(gong)能差別？HBS和(he)EBS的(de)主要(yao)差別(bie)在(zai)於(yu)碳酸(suan)氫(qing)鈉(na)的(de)水平，在(zai)Eagles (2.2g/L)中比在(zai) Hanks (0.35g/L)中高。碳酸(suan)氫(qing)鈉(na)需用(yong)高水(shui)平(ping)的(de)CO2平衡(heng)，以維(wei)持溶(rong)液(ye)的(de) PH 值。Eagles 液(ye)在(zai)空(kong)氣(qi)水(shui)平(ping)的(de)CO2中，溶液(ye)會(hui)變堿，Hanks液(ye)在(zai)CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)中會變酸(suan)。如(ru)果希(xi)望在(zai)CO2培(pei)養(yang)箱(xiang)中保存組織(zhi)，需(xu)要(yao)用(yong) Eagles液(ye)。如(ru)果(guo)僅僅是(shi)清洗(xi)將(jiang)要(yao)在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基中儲存的(de)組織(zhi)，用(yong)Hanks液(ye)就可以了(le)。

34 二價(jia)離(li)子(zi)抑制胰(yi)蛋白酶(mei)活(huo)性(xing)嗎？使用(yong)胰蛋白酶(mei)時加(jia)入EDTA的(de)目(mu)的(de)是(shi)什麽？二價離(li)子(zi)的(de)確(que)抑制胰(yi)蛋白酶(mei)活(huo)性(xing)。EDTA 用(yong)來螯合遊離(li)的(de)鎂(mei)離(li)子(zi)和(he)鈣離(li)子(zi)，以便(bian)保持抑制胰(yi)蛋白酶(mei)的(de)活性。建(jian)議(yi)胰(yi)蛋白酶(mei)處(chu)理(li)細(xi)胞(bao)前(qian)，用(yong)EDTA清洗(xi)細(xi)胞(bao)，以消除(chu)來(lai)自(zi)培(pei)養(yang)基中所有的(de)二價離(li)子(zi)。

35 當(dang)在(zai)無血清培(pei)養(yang)基中添加抗(kang)生(sheng)素時，降(jiang)低(di)至少在(zai)有(you)血清培(pei)養(yang)基中所使用(yong)濃度(du)的(de) 50%。血清蛋白會(hui)結(jie)合和(he)滅活(huo)壹些(xie)抗(kang)生(sheng)素。在(zai)無血清培(pei)養(yang)條件下(xia)，抗(kang)生(sheng)素不被(bei)滅活(huo)，可(ke)能對於(yu)細(xi)胞(bao)達(da)到毒(du)性水平(ping)。

36 壹旦(dan)您在(zai)新(xin)鮮培養(yang)基中添加了(le)血清和(he)抗(kang)生(sheng)素時，您應該在(zai)兩(liang)到三周內使用(yong)它。因為壹些(xie)抗(kang)生(sheng)素和(he)血清中的(de)基本成(cheng)分(fen)在(zai)解凍後就開始降解。

37 大部分(fen)添加物(wu)和(he)試劑(ji)最(zui)多可(ke)以凍(dong)融 3 次，如(ru)果次數更(geng)多都(dou)會在(zai)包(bao)含蛋白的(de)溶液(ye)引起(qi)壹定水平(ping)的(de)降解和(he)沈澱，將(jiang)會(hui)影(ying)響(xiang)它的(de)性能。

38 在(zai)溶(rong)解的(de)壹周(zhou)內(nei)使(shi)用(yong)貯(zhu)存在(zai) 4℃冰(bing)箱(xiang)中的(de)液(ye)體胰(yi)蛋白酶(mei)溶(rong)液(ye)。胰(yi)蛋白酶(mei)在(zai) 4℃就可能開始降解，如果在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)放置超(chao)過 30 分鐘(zhong)，就會變得(de)不穩定。

更多細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)耗(hao)材、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基、細胞(bao)培(pei)養(yang)設(she)備進(jin)入蘇州阿(e)爾(er)生(sheng)物(wu)了解。