外泌(mi)體(ti)的(de)載藥(yao)方(fang)法(fa)和給藥(yao)途(tu)徑(jing)

  藥(yao)物傳遞(di)系(xi)統(tong)DDS：是(shi)將脂質(zhi)體(ti)、微囊、微球(qiu)、微乳、納(na)米(mi)囊、納(na)米(mi)球(qiu)、外泌(mi)體(ti)等(deng)作(zuo)為藥(yao)物載體(ti)將藥(yao)物通(tong)過(guo)不同的(de)給藥(yao)方(fang)式(shi)，直接(jie)輸(shu)送(song)到病(bing)竈(zao)部位的壹(yi)種(zhong)新型醫(yi)療方(fang)式(shi)。
將藥(yao)物加載到外泌(mi)體(ti)
  在(zai)進行(xing)藥(yao)物傳遞(di)系(xi)統(tong)DDS設計(ji)時(shi)，其中(zhong)壹(yi)個(ge)重要(yao)的(de)環節就(jiu)是(shi)載藥(yao)方(fang)法(fa)。由於外泌(mi)體(ti)具有生(sheng)物相(xiang)容性、穩(wen)定(ding)性(xing)和腫(zhong)瘤靶向(xiang)性，隨著(zhe)外泌(mi)體(ti)技(ji)術研(yan)究的不斷發(fa)展 使它(ta)們(men)成為有前景(jing)的(de)藥(yao)物載體(ti)。外泌(mi)體(ti)的(de)構建(jian)類(lei)似於雙膜脂質(zhi)體(ti)，並(bing)且(qie)藥(yao)物裝載方(fang)法(fa)也類(lei)似。但(dan)在(zai)藥(yao)物傳遞(di)系(xi)統(tong)DDS設計(ji)前(qian)需要(yao)根(gen)據(ju)藥(yao)物和外泌(mi)體(ti)特性(xing)仔(zai)細選擇(ze)。
  外泌(mi)體(ti)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)被動或主(zhu)動方(fang)法(fa)裝載多種(zhong)藥(yao)物、大分子和(he)其他(ta)物質(zhi)（ 圖(tu) 3）。被動方(fang)法(fa)比較簡單(dan)，它(ta)是(shi)基於(yu)藥(yao)物與(yu)外泌(mi)體(ti)或細胞孵育(yu)，並(bing)進壹(yi)步(bu)分離(li)含有藥(yao)物的釋放外泌(mi)體(ti)（ 圖(tu) 3 I、II）。這種(zhong)方(fang)法(fa)通(tong)過(guo)不同的(de)藥(yao)物濃(nong)度(du)梯度來實現(xian)；因此(ci)，在與(yu)外泌(mi)體(ti)孵(fu)育(yu)期間，物質(zhi)本身(shen)也(ye) 會遷移到囊泡中(zhong)。這(zhe)壹(yi)過(guo)程(cheng)可以(yi)通(tong)過(guo)施(shi)加額(e)外的力(li)來(lai)加強，例(li)如搖(yao)動或攪拌(ban)等(deng).
   被動裝載(zai)法(fa)的(de)缺(que)點是(shi)裝載(zai)效率低，輸(shu)出(chu)藥(yao)物濃(nong)度(du)低（約 1%）。將藥(yao)物與(yu)外泌(mi)體(ti)或其他(ta) DDS 載體(ti)壹(yi)起(qi)孵(fu)育(yu)是(shi)壹種(zhong)較常見並(bing) 且(qie)簡單(dan)的(de)方(fang)法(fa)，尤其適用於疏(shu)水性藥(yao)物。
    主(zhu)動加載(zai)方(fang)法(fa)可以(yi)實現更高(gao)的(de)加載(zai)效率，包括(kuo)超聲處理(li) (可達~28%)、電(dian)穿孔 (~5%) 、擠(ji)壓(ya)、凍融、pH 梯(ti)度 (1.7%) 和結合方(fang)法(fa)。具體(ti)方(fang)法(fa)是(shi)通(tong)過(guo)超聲處理(li)和電穿(chuan)孔在 外泌(mi)體(ti)膜(mo)上(shang)穿孔，再(zai)分別(bie)由聲波(bo)或電脈(mai)沖介導（ 圖(tu) 3 III、IV）。之後(hou)，外泌(mi)體(ti)將通(tong)過(guo)上(shang)述試劑(ji)誘(you)導的(de)小膜孔(kong)從(cong)溶(rong)液中(zhong)加(jia)載(zai)藥(yao)物。這些(xie)方(fang)法(fa)似乎不會改變外泌(mi)體(ti)膜(mo)的特性(xing)，但(dan)會(hui)導致外泌(mi)體(ti)大(da)小增加(jia)。
   主(zhu)動加載(zai)法(fa)的(de)另(ling)壹(yi)種(zhong)方(fang)法(fa)是(shi)通(tong)過(guo)抗(kang)體(ti)或點擊化(hua)學將藥(yao)物與(yu)外泌(mi)體(ti)結合。抗(kang)體(ti)將通(tong)過(guo)它(ta)們(men)對外泌(mi)體(ti)結構元(yuan)素的親(qin)和力(li)非(fei)共(gong)價結合到外泌(mi)體(ti)表(biao)面（ 圖 3七). 化(hua)學合(he)成(cheng)將導致藥(yao)物通(tong)過(guo)例(li)如 PEG 或膜蛋(dan)白(bai)與(yu)外泌(mi)體(ti)共(gong)價結合，並(bing)且(qie)進壹(yi)步(bu)釋放取決於(yu)外泌(mi)體(ti)降(jiang)解。這(zhe)些(xie)方(fang)法(fa)還可以(yi)通(tong)過(guo)將特定(ding)受體(ti)引(yin)入(ru)膜來(lai)將外泌(mi)體(ti)靶(ba)向所(suo)需(xu)細胞 。

圖 3. 將藥(yao)物裝入(ru)外泌(mi)體(ti)的(de)方(fang)法(fa)。
( I )—從(cong)藥(yao)物暴(bao)露(lu)細胞中(zhong)釋放的載(zai)藥(yao)外泌(mi)體(ti)，
( II )— 藥(yao)物與(yu)外泌(mi)體(ti)孵(fu)育(yu)並(bing)攪拌(ban)，
( III )—超聲處理(li)，
( IV )—電穿孔(kong)，
( V )— 擠(ji)出(chu)，
( VI )—凍融循(xun)環，
( VII )-藥(yao)物與(yu)外泌(mi)體(ti)的(de)化(hua)學綴合(he)。
     以(yi)上(shang)步(bu)驟中(zhong)提到的(de)方(fang)法(fa)允許根(gen)據(ju)藥(yao)物的親水性和親脂性將藥(yao)物摻入(ru)外泌(mi)體(ti)或磷脂(zhi)雙層的內部。親水性物質(zhi)將滲透於(yu)外泌(mi)體(ti)的(de)腔內，而可溶(rong)於脂(zhi)質(zhi)的(de)物質(zhi)將聚集(ji)在(zai)外泌(mi)體(ti)的(de)膜上(shang)（ 圖2）。壹些(xie)研(yan)究報告(gao)證(zheng)明，親(qin)水性物質(zhi)很(hen)容易加(jia)載(zai)到外泌(mi)體(ti)中(zhong)，而親脂(zhi)性(xing)物質(zhi)的(de)加載(zai)效(xiao)率較低(di)。通(tong)常，這(zhe)些(xie)物質(zhi)在(zai)體(ti)外 24 小時(shi)內從(cong)外泌(mi)體(ti)釋放約 50% 。
   選(xuan)擇(ze)藥(yao)物加載方(fang)法(fa)時(shi)需要(yao)考(kao)慮到對(dui)外泌(mi)體(ti)結構和(he)特性(xing)的影響。目(mu)前(qian)，通(tong)過(guo)電(dian)穿孔(kong)的(de)聚集(ji)和(he)融(rong)合(he)法(fa)使用較為(wei)普遍(bian)。
    實(shi)際上(shang)，外泌(mi)體(ti)作(zuo)為細胞間信(xin)號(hao)傳遞(di)分(fen)子(zi)可以(yi)遞送多種(zhong)物質(zhi)，包(bao)括化(hua)療藥(yao)物（紫(zi)杉(shan)醇(chun)、多柔比星(xing)和(he)紫(zi)杉(shan)醇(chun)）、RNA 和 DNA等(deng) 。另(ling)外，近(jin)年來(lai)還針(zhen)對細菌（弓形蟲病和沙(sha)門(men)氏(shi)菌病(bing)）、病毒(du)（艾滋病和(he)乙型肝炎）、癌(ai)癥（肺癌(ai)、胰腺癌(ai)、結腸(chang)癌(ai)、腦(nao)癌(ai)和乳腺癌(ai)）等(deng)進行(xing)基(ji)於外泌(mi)體(ti)的(de)疫(yi)苗(miao)開發設計(ji)。所(suo)以(yi)外泌(mi)體(ti)也(ye)常被用作(zuo)基因編(bian)輯(ji)工具遞送的(de)工具 ，例(li)如 Cas9. 
給藥(yao)途(tu)徑(jing)
根(gen)據(ju)目前(qian)的研(yan)究，外泌(mi)體(ti)主(zhu)要(yao)通(tong)過(guo)靜(jing)脈內(nei)給藥(yao)，位(wei)置(zhi)主(zhu)要(yao)為(wei)肝臟肺和腦(nao)、胃中(zhong)，只(zhi)有少數研(yan)究使用另(ling)壹(yi)種(zhong)給藥(yao)方(fang)法(fa)，即經鼻、口(kou)服和腹膜(mo)內(nei)給藥(yao)。
表(biao) 4. 外泌(mi)體(ti)的(de)藥(yao)物、大分子和(he)潛在(zai)靶(ba)向策(ce)略示(shi)例(li)。    近(jin)些(xie)年(nian)，外泌(mi)體(ti)研(yan)究領(ling)域(yu)發(fa)展迅(xun)速(su)，來新型外泌(mi)體(ti)分(fen)離技術實(shi)現(xian)了(le)從(cong)小(xiao)體(ti)積樣(yang)品中(zhong)快(kuai)速(su)、高效、精(jing)確地分(fen)離(li)，在(zai)外泌(mi)體(ti)研(yan)究也取(qu)得了(le)許多重大(da)進(jin)展，這(zhe)些(xie)都(dou)使外泌(mi)體(ti)成(cheng)為納(na)米(mi)藥(yao)物、基因要等(deng)創(chuang)新藥(yao)的(de)遞(di)送(song)工具。外泌(mi)體(ti)技(ji)術的(de)發(fa)展 對(dui)於(yu)未(wei)來(lai)的外泌(mi)體(ti)的(de)檢測、生(sheng)物標誌物篩選以(yi)及癌(ai)癥的鑒別(bie)等(deng)也都(dou)具有重要(yao)的(de)意義(yi)。
     選擇(ze)外泌(mi)體(ti)作(zuo)為給藥(yao)載(zai)體(ti)的(de)主(zhu)要(yao)優(you)勢(shi)在(zai)於它(ta)可(ke)以(yi)降低藥(yao)物濃(nong)度(du)，能夠準確到病(bing)竈(zao)部位有效提高(gao)效(xiao)率並(bing)減少(shao)藥(yao)物的毒副(fu)作(zuo)用。盡管如(ru)此(ci)，外泌(mi)體(ti)的(de)載藥(yao)效(xiao)率仍有提升(sheng)空(kong)間。比如：在(zai)外泌(mi)體(ti)研(yan)究領(ling)域(yu)中(zhong)，由(you)於(yu)不同供體(ti)細胞分離的外泌(mi)體(ti)特性(xing)也是(shi)不同的(de)，需要足(zu)夠(gou)了(le)解與(yu)熟悉(xi)各種(zhong)外泌(mi)體(ti)的(de) 特性(xing)，了(le)解外泌(mi)體(ti)的(de)長期毒(du)性、免疫(yi)原(yuan)性和安全性(xing)這(zhe)也是(shi)外泌(mi)體(ti)藥(yao)物傳遞(di)系(xi)統(tong)DDS設計(ji)的(de)重點(dian)。
           蘇(su)州(zhou)阿爾(er)法(fa)生(sheng)物專註(zhu)於生(sheng)物實驗室(shi)儀(yi)器和(he)生(sheng)物試劑(ji)、實(shi)驗室(shi)耗(hao)材行(xing)業(ye)14年。所(suo)提供的(de)納(na)米(mi)粒(li)度(du)儀(yi)、熒(ying)光(guang)顯(xian)微鏡等(deng)廣泛(fan)應(ying)用於細胞外泌(mi)體(ti)研(yan)究領(ling)域(yu)。另(ling)外，提供的(de)實(shi)驗室(shi)設備(bei)包(bao)括發(fa)酵(jiao)罐(guan)、生(sheng)物反應(ying)器、細胞培養(yang)搖(yao)床、恒(heng)溫(wen)恒(heng)濕培養(yang)箱(xiang)、PCR儀、乳酸分析(xi)測(ce)定(ding)儀(yi)等(deng)也廣(guang)泛(fan)應(ying)用於生(sheng)命科學(xue)實(shi)驗。