瞬(shun)時(shi)轉染(ran)和穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)的(de)區(qu)別

 轉染(ran)是指將外源DNA（宿主基因(yin)組以外的(de)遺傳(chuan)物(wu)質）引入(ru)細(xi)胞。轉染(ran)的(de)主要(yao)目的(de)是改(gai)變(bian)宿(xiu)主基因(yin)組以表(biao)達(da)或(huo)阻斷與基因(yin)相關的(de)蛋(dan)白質的(de)表(biao)達(da)。基於(yu)對轉(zhuan)染 產(chan)物(wu)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)可分為(wei)瞬(shun)時(shi)轉染(ran)和穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)兩種(zhong)，這(zhe)裏(li)著重(zhong)於(yu)瞬(shun)時(shi)轉染(ran)和穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)的(de)區(qu)別。
轉染(ran)定義：
轉化(hua):這(zhe)是用(yong)於(yu)定義(yi)和保留用(yong)於(yu)非病(bing)毒(du)基因(yin)傳遞方(fang)法(fa)的(de)術語(yu)。這(zhe)種(zhong)遺傳(chuan)物(wu)質的(de)宿主(zhu)或(huo)受(shou)體可以是細(xi)菌(jun)或(huo)真(zhen)核動(dong)物(wu)細(xi)胞。
轉導(dao):也(ye)稱為(wei)轉導感染。
穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran):目標(biao)遺傳(chuan)物(wu)質被整(zheng)合到(dao)宿(xiu)主(zhu)基因(yin)組中的(de)轉染(ran)方(fang)式。  
瞬(shun)時(shi)轉染(ran):是指遺傳(chuan)物(wu)質不整(zheng)合到(dao)宿(xiu)主(zhu)細(xi)胞基因(yin)組中的(de)轉染(ran)方(fang)式。 
轉(zhuan)染：它可以定義為(wei)將非(fei)病(bing)毒(du)基因(yin)遞送到(dao)受(shou)體細(xi)胞中的(de)方(fang)法(fa)。外源核酸材料(liao)包(bao)括(kuo)DNA、RNA、信(xin)使(shi)RNA（mRNA）、小幹(gan)擾RNA（siRNA）、微(wei)小RNA（miRNA）和短發夾(jia)RNA（shRNA）。 
轉(zhuan)染原(yuan)理
根(gen)據(ju)轉(zhuan)染(ran)的(de)含(han)義(yi)，外源遺傳(chuan)物(wu)質必(bi)須(xu)通(tong)過(guo)細(xi)胞膜進(jin)入(ru)細(xi)胞。重(zhong)要的(de)是要(yao)註意，無(wu)論(lun)是 DNA 還是 RNA，遺傳(chuan)物(wu)質都(dou)因與之(zhi)相關的(de)蛋(dan)白質而帶負(fu)電荷。因(yin)此(ci)在(zai)未經處理(li)的(de)環境中(zhong)，外源DNA不能穿(chuan)過(guo)細(xi)胞膜，可以輕(qing)松(song)穿過(guo)帶(dai)電膜的(de)屏障(zhang)。根據(ju)用(yong)於(yu)轉移外源遺傳(chuan)物(wu)質的(de)的(de)轉染(ran)方(fang)式又(you)可以將細(xi)胞轉染(ran)可分為(wei)化(hua)學轉(zhuan)染或(huo)物(wu)理轉(zhuan)染(ran)。 瞬(shun)時(shi)轉染(ran)的(de)含(han)義(yi)可以定義為(wei)不將外源物(wu)質摻入宿(xiu)主基因(yin)組的(de)轉染(ran)方(fang)法(fa)，比如：mRNA的(de)轉染(ran)可以被認為(wei)是瞬(shun)時(shi)轉染(ran)。它是mRNA的(de)原(yuan)因是(shi)細(xi)胞的(de)編碼元件(jian)，它經過(guo)翻譯(yi)來表(biao)達(da)蛋(dan)白質，當 mRNA被註(zhu)射(she)到(dao)細(xi)胞中時(shi)，它會表(biao)達(da)它所編碼的(de)蛋(dan)白質並隨著(zhe)mRNA的(de)半衰期而被(bei)降解(jie)。因(yin)此(ci)，在(zai)任(ren)何壹種(zhong)情(qing)況下，外源材料(liao)都(dou)會發生(sheng)降解(jie)並(bing)被(bei)視(shi)為(wei)瞬(shun)時(shi)轉染(ran)。
穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)是普遍使(shi)用(yong)的(de)方(fang)法(fa)；它是將外源遺傳(chuan)內(nei)容整(zheng)合到(dao)宿(xiu)主(zhu)基因(yin)組中的(de)方(fang)法(fa)。這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)確保了(le)外源材料(liao)編碼的(de)蛋(dan)白質的(de)連續(xu)表(biao)達(da)。這(zhe)些(xie)通(tong)常會導(dao)致宿(xiu)主(zhu)基因(yin)組的(de)改變(bian)。外源遺傳(chuan)內(nei)容通(tong)常直接轉(zhuan)移到(dao)宿(xiu)主(zhu)細(xi)胞核中(zhong)。 
瞬(shun)時(shi)轉染(ran)與穩(wen)定(ding)轉(zhuan)染(ran)的(de)比較(jiao) 

細(xi)胞轉染(ran)方(fang)法(fa)

細(xi)胞轉染(ran)的(de)方(fang)法(fa)主要(yao)有(you)物(wu)理、化(hua)學和(he)生(sheng)物(wu)三(san)種(zhong)。轉染(ran)的(de)生(sheng)物(wu)學方(fang)法(fa)也(ye)被稱為(wei)轉導。物(wu)理轉(zhuan)染(ran)方(fang)法(fa)用(yong)於(yu)使(shi)用(yong)敏(min)感工具(ju)和技(ji)術(shu)整(zheng)合遺傳(chuan)物(wu)質。化(hua)學轉(zhuan)染是(shi)使(shi)用(yong)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑來傳遞遺傳(chuan)成(cheng)分；常見(jian)的(de)化(hua)學轉(zhuan)染法(fa)是磷(lin)酸鈣轉(zhuan)染(ran)。
物(wu)理和(he)化(hua)學轉(zhuan)染概(gai)述(shu)
物(wu)理轉(zhuan)染(ran)
物(wu)理轉(zhuan)染(ran)包(bao)括(kuo)直接顯微(wei)註(zhu)射(she)、基因(yin)槍粒子遞送、電穿孔和激光(guang)介導(dao)的(de)轉染(ran)。
直接顯微(wei)註(zhu)射(she)- 這(zhe)是用(yong)針(zhen)將 DNA 直接插入(ru)細(xi)胞質或(huo)細(xi)胞核的(de)技術(shu)。它需要較(jiao)高的(de)專業(ye)知識和技(ji)能。
Biolistic 粒子遞送——在這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)中，外源材料(liao)被包(bao)裹(guo)在(zai)金(jin)粒子上，並使(shi)用(yong)高速(su)基因(yin)槍被遞送到(dao)細(xi)胞中。
電穿孔儀轉染法(fa)：在這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)中，受(shou)體細(xi)胞受到(dao)電脈沖以暫時(shi)破(po)壞細(xi)胞膜的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。從(cong)而在(zai)膜中(zhong)形成(cheng)孔，使(shi)核酸材料(liao)通(tong)過(guo)孔順利(li)進(jin)入(ru)細(xi)胞。
激光(guang)介導(dao)的(de)轉染(ran)：在這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)中，脈沖激光(guang)用(yong)於(yu)瞬(shun)時(shi)透(tou)化(hua)細(xi)胞以接受(shou)傳入(ru)的(de) DNA。 

化(hua)學轉(zhuan)染試(shi)劑

它依賴(lai)於(yu)使(shi)用(yong)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑讓遺傳(chuan)物(wu)質通(tong)過(guo)，包(bao)括(kuo)磷(lin)酸鈣轉(zhuan)染(ran)、PEI轉(zhuan)染等(deng)方(fang)法(fa)。化(hua)學轉(zhuan)染原(yuan)理是(shi)基於(yu)與帶負電荷的(de)核酸形成(cheng)復合物(wu)，然後進(jin)行內(nei)吞(tun)作用(yong)或(huo)吞(tun)噬(shi)作用(yong)，並(bing)被(bei)細(xi)胞吸收(shou)。他們(men)使(shi)用(yong)陽(yang)離子聚(ju)合物(wu)、磷(lin)酸鈣或(huo)陽(yang)離子脂質與遺傳(chuan)物(wu)質形成(cheng)復合物(wu)。
1. 磷(lin)酸鈣轉(zhuan)染(ran)：這(zhe)是基於(yu)形成(cheng)不溶(rong)性 DNA 沈(chen)澱物(wu)的(de)原(yuan)理：磷(lin)酸鈣共(gong)沈澱物(wu)。磷(lin)酸鈣轉(zhuan)染(ran)流程(cheng)如下：
DNA 與氯化(hua)鈣（轉(zhuan)染試(shi)劑）混(hun)合
⇩
將此(ci)復合物(wu)添加到(dao)磷(lin)酸鹽緩沖液中
⇩
pH 值的(de)優化(hua)工作在(zai)壹個(ge)狹(xia)窄(zhai)的(de)窗口(kou)內(nei) (6.9–7.4)
⇩
DNA沈(chen)澱：磷(lin)酸鈣復合物(wu)
⇩
細(xi)胞培(pei)養物(wu)中沈(chen)澱物(wu)的(de)去(qu)除(chu)和(he)分散
⇩
靶(ba)細(xi)胞吞(tun)噬(shi)共(gong)沈澱物(wu)
2. PEI-DNA 濃(nong)縮法(fa)：在這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)中，遺傳(chuan)物(wu)質與陽離子聚(ju)合物(wu)復合以促進(jin)基因(yin)傳遞，從(cong)而提(ti)高靶向特(te)定(ding)細(xi)胞類型(xing)的(de)效率。聚(ju)合物(wu)和遺傳(chuan)物(wu)質形成(cheng)復合物(wu)，然後被(bei)細(xi)胞吞(tun)噬(shi)。在(zai)細(xi)胞室(shi)中，宿(xiu)主吸收(shou)遺傳(chuan)物(wu)質並將其(qi)整(zheng)合到(dao)基因(yin)組中。 
細(xi)胞轉染(ran)的(de)應用(yong)
轉(zhuan)染(ran)有(you)作為(wei)壹種(zhong)分析(xi)工具(ju)，主要(yao)用(yong)於(yu)研(yan)究(jiu)各種(zhong)細(xi)胞類型(xing)中(zhong)的(de)基因(yin)或(huo)蛋(dan)白質表(biao)達(da)。轉(zhuan)染(ran)有(you)時(shi)用(yong)於(yu)降低某(mou)些(xie)蛋(dan)白質的(de)表(biao)達(da)，這(zhe)是通(tong)過(guo)進(jin)行 siRNA 轉(zhuan)染(ran)來實(shi)現(xian)的(de)。 它可以大規(gui)模(mo)生(sheng)產(chan)重(zhong)組蛋(dan)白，還可以用(yong)於(yu)基因(yin)沈默(mo)表(biao)達(da)和(he)產(chan)生(sheng)穩(wen)定(ding)的(de)細(xi)胞系。
    蘇(su)州(zhou)阿爾法(fa)生(sheng)物(wu)實(shi)驗器材有(you)限公(gong)司(si) 供(gong)應(ying)的(de)生(sheng)物(wu)試劑包(bao)括(kuo) 細(xi)胞轉染(ran)試(shi)劑、轉染試劑盒、天根試劑盒、碧(bi)雲天(tian)試劑等細(xi)胞學、分子生(sheng)物(wu)學、生(sheng)命科學相(xiang)關的(de)試劑及(ji)耗(hao)材，另外提(ti)供生(sheng)物(wu)反應(ying)器(qi)、發酵(jiao)罐(guan)、振蕩培(pei)養箱、移液器、離心機、顯微(wei)鏡(jing)、純(chun)水(shui)機等實(shi)驗室(shi)設(she)備。