紫外分(fen)光(guang)度(du)法(fa)進行(xing)蛋白(bai)定(ding)量(liang)的實驗(yan)方(fang)法

紫外分(fen)光(guang)度(du)法(fa)進行(xing)蛋白(bai)定(ding)量(liang)的實驗(yan)方(fang)法

蛋白(bai)定(ding)量(liang)是(shi)蛋白(bai)質檢測(ce)過(guo)程中的重要(yao)環(huan)節(jie)，檢測(ce)的方(fang)法(fa)有很多，有Bradford檢測(ce)法、Bradford斑(ban)點(dian)試(shi)驗(yan)法(fa)、Coomassie 斑點(dian)試(shi)驗(yan)法(fa)、紫外分(fen)光(guang)度(du)檢測(ce)法。其(qi)中、紫外分(fen)光(guang)度(du)法(fa)是(shi)蛋白(bai)質定(ding)量(liang)方法中比(bi)較(jiao)快的壹(yi)種方法。

壹(yi)、紫外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa)進行(xing)蛋白(bai)定(ding)量(liang)的檢測(ce)原理：

由(you)於蛋(dan)白(bai)質分(fen)子對於不(bu)同光(guang)度(du)波段的吸光(guang)率也(ye)有所(suo)不(bu)同，所(suo)以紫外分(fen)光(guang)度(du)檢測(ce)法主(zhu)要(yao)通過(guo)光(guang)系(xi)統來(lai)檢測(ce)蛋白(bai)分(fen)子的吸光(guang)率，從而(er)確(que)定(ding)蛋(dan)白(bai)質的(de)濃度進行(xing)的蛋白(bai)定(ding)量(liang)。比(bi)如(ru)205nm的(de)光(guang)波波長主(zhu)要(yao)吸(xi)光(guang)為(wei)肽(tai)鏈(lian)分(fen)子。280nm波長下(xia)色(se)氨酸與酪(lao)氨酸吸光(guang)率則這兩(liang)種分(fen)子以為主(zhu)。
 
二、蛋白(bai)定(ding)量(liang)中蛋白(bai)質溶(rong)液(ye)濃度的(de)確(que)定(ding)
1、純(chun)蛋(dan)白(bai)質溶(rong)液(ye)：
a.在(zai)濾光(guang)波長為(wei)280nm的(de)環(huan)境(jing)下(xia)對比(bi)其吸(xi)光(guang)率。
b.其中的抗體(ti)和BSA，估(gu)算(suan)公式為：蛋(dan)白(bai)質 A280 (1mg/ml)IgG =1.35； IgM=1.2； BSA=0.7。（單(dan)位/吸(xi)光(guang)率約等(deng)於1mg/ml） 

2、蛋(dan)白(bai)定(ding)量(liang)中核苷酸類(lei)的蛋白(bai)溶(rong)液(ye)濃度測(ce)定(ding)： 
a.在(zai)280nm和260nm或(huo)205nm光(guang)波長環(huan)境(jing)下(xia)對照(zhao)其(qi)吸(xi)光(guang)率；
b.蛋白(bai)質濃度估(gu)算(suan)公式：
280nm波長：蛋(dan)白(bai)質濃度（mg/ml）=(1.55×A280 )-(0.76×A260 )
208nm波長：蛋(dan)白(bai)質濃度（mg/ml）= A205 /(27 + 120 A280/ A205 )

更(geng)多bca蛋白(bai)定(ding)量(liang)相(xiang)關產(chan)品(pin)可(ke)以進入(ru)蘇(su)州阿(e)爾(er)法生物(wu)實(shi)驗器(qi)材(cai)有限(xian)公司進行(xing)咨(zi)詢(xun)。